体外培养刺五加生产刺五加苷B、E的研究
体外培养刺五加生产刺五加苷B、E的研究 体外培养刺五加生产刺五加苷B、E的研究
本文由管理程序繁琐,3,，199年出版的《中国植物红皮
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》已把刺五加列为了渐危物种。 植物组织、细胞培养具有快速、高效、低成本的优点，因而近年来利用植物组织、细胞培养快速繁殖刺五加的研究成为热点。目前多数研究集中于刺五加体细胞胚胎发生,4,和人工种子包埋,5,方面，并取得了可喜成果，对茎尖的快速繁殖、遗传转化也有初步探索,4,。但关于刺五加的体外培养物生产刺五加主要药用成分——刺五加苷B、E的研究尚未见报道。本文以刺五加的体外培养物为试材，探讨了培养物类型、培养基种类、激素对刺五加苷B、E生产的影响。
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材料
关于××同志的政审材料调查表环保先进个人材料国家普通话测试材料农民专业合作社注销四查四问剖析材料
与方法
1.1 愈伤组织和体细胞胚胎的获得刺五加野生植株和种子采自吉林省伊通满族自治县西苇镇。种子经层积处理后，将种子的胚剖出，切取胚轴和野生植株萌发15 d以内的幼叶、叶柄作为外植体，接种在包含,4-D 1.0 mg/L+NAA 1.0或.0 mg/L MS培养基上，分别诱导产生愈伤组织或体细胞胚胎,4,6,。
1. 愈伤组织和体细胞胚胎质量的测定
将上述产自同一外植体的愈伤组织和体细胞胚胎分别继代入添加了0,1.0 mg/L ,4-D的MS和1/MS培养基中诱导愈伤组织增殖、体细胞胚胎产生次级体胚。培养60，10，180，40 d时分别取出增殖产生的全部愈伤组织和体细胞胚胎。用重蒸水洗净粘附的培养基后，置于滤纸上吸干
表
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面水珠，称取质量。
1.3 刺五加苷B、E含量的测定
HP-1100高效液相色谱仪为安捷伦科技有限公司生产，乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其余试剂为
分析
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纯。对照品购自中国药品生物制品检定所,刺五加苷B编号为111574-0001，刺五加苷E编号为111713-00501。色谱条件:色谱柱:Kromasil ODS柱;流动相:0.1, 磷酸水溶液-乙腈，流速为0.8 ml?min-1;柱温:室温。刺五加苷 B、苷 E 的检测波长分别是0 nm及06 nm。 取刺五加的体外培养物置于干燥箱中70?烘干后，粉碎。精密称取0.5 g，置于100 ml圆底
烧瓶中。参照 文献 ,7,的方法，加入50,甲醇溶液0 ml，回流提取1 h，抽滤，滤液用50, 甲醇溶解定容至5 ml。取滤液适量，1 000 r?min-1离心5 min，上清液作为供试品溶液。测定其刺五加苷B、E的峰面积，根据刺五加苷 B 的回归方程Y= 64.584X+.879,刺五加苷E回归方程Y=89.603X+3.808， 计算 刺五加苷B、E含量。
1.4 刺五加苷B、E产量的计算公式为:刺五加苷B、E产量=刺五加苷B、E含量(mg/100g)×培养物质量/100。
结果
.1 体外培养物类型对刺五加苷B、E产量的影响以相同质量的外植体材料为起始材料，分别按照最佳体细胞胚胎和愈伤组织培养体系经40 d培养后诱导产生的愈伤组织和体细胞胚胎的刺五加苷B、E产量如表1所示。
在整个培养过程中，愈伤组织和体细胞胚胎的物质质量随着培养时间的延长呈现指数增长。在测定的4个时间点上，诱导产生的愈伤组织的质量均大于体细胞胚胎的质量。刺五加苷B、E的含量在愈伤组织培养10 d以内逐渐上升，培养时间超过10 d后含量维持在稳定状态;体细胞胚胎自产生开始到培养40 d范围内的刺五加苷B、E含量均差异不大。综合考虑刺五加苷B、E含量和物质质量两个因素的变化，体细胞胚胎虽然在总物质质量上均低于愈伤组织，但由于刺五加苷B、E含量较高，因此在相同培养时间内，同质量外植体产生的体细胞胚胎的刺五加苷B、E的产量优于愈伤组织。表1 体外培养物类型对刺五加苷B、E产量的影响(略)本文由医学,015,35:80. ,8,赵春梅.植物组织培养方法生产药用次生代谢产物研究进展,J,.现代生物医学进展, 015,8:790. ,9,邢朝斌，沈海龙，刘 岩，等. 刺五加成熟种子的愈伤组织诱导及其RAPD分析,J,.种子，006,5:44. ,10,贾景明，吴春福，吴立军，等.天山雪莲愈伤组织培养与次生代谢物形成的研究,J,.中药研究与信息,005,7:11.
刺五加,体细胞,胚胎,培养,组织,含量,质量,培养基,体外,产生,诱导,产量,种子,测定,分别,研究,乙腈,蒸水
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