【doc】催产素对妊娠末期大鼠蜕膜细胞内游离钙的刺激作用

【doc】催产素对妊娠末期大鼠蜕膜细胞内游离钙的刺激作用 催产素对妊娠末期大鼠蜕膜细胞内游离钙 的刺激作用 药学AetaPharmaceuticaSinica1994;29(11):814,817 盘{q一I7 催产素对妊娠末期大鼠蜕膜细胞内游离钙的刺激作用 乔风霞同兰张均田R尸— — _'—一 ——————一 (中国联学科学院,中国协和医科大学药物研究所,北京100050) 提要妊娠末期催产索刺激子宫蜕膜细胞产生与分娩有关的前列腺素,但其作用方式仍未知 本实验讣离妊娠l9d大鼠蜕膜细胞,测定了催产素作用后蜕膜细胞内游离钙的变化,结果加入0.O0/ , lpmol?L催产素后.蜕膜细胞内[Ca"+]j出现瞬息增加,其峰值与催产素浓度呈剂量侬赖关系. 且此作用有自身钝化现象.说明催产素可能瀚活妊娠末期大鼠蜕膜细胞内的肌薛磷酯蛋自撒酶C系 统.给妊娠朱期大鼠Ip硫酸去氢 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 雄酮钠盐后分离的蜕膜细胞,催产豪作用引起[Ca?i瞬息增加峰 值较对照升高 关键词新型钙离子荧光指示剂(Fura一2/AM)催产煮;蜕睫细盹游离钙 蜕膜是引发分娩激素作用的靶组织"..催产素是引发分娩的一个重要因素.妊娠末期随 妊期及分娩的进行,蜕膜产生前列腺索增加",催产素可剌激大鼠蜕膜产生前列腺素,在 大鼠子宫肌及蜕膜细胞有催产素受体",妊娠末期.大鼠体内催产素浓度并未增加',但在子 宫肌,蜕膜细胞膜催产素受体密度增加,可见分娩时前列腺索增加可能与催产素的作用密切 相关.Moore等研究表明催产素刺激人羊膜细膜产生PGEz可能是通过细胞内肌醇磷酯蛋白激 酶C系统完成的.本实验观察了催产素作用于分离的妊娠末期大鼠蜕膜细胞内游离钙浓度 [Ca3i的变化,以探讨了催产索作用于大鼠蜕膜细胞的途径问题,并观察了雌激素前体物 ,一 硫酸去氢表雄酮对它的影响. 材料和方法 药品及试剂催产素,胰蛋白酶,EDTA及DMSO均购自Sigma公司;Fura一2/AM为中国 医学科学院药物研究所产品,mp52,54c,分子量1001,用DMSO溶解成1mmol?L贮备 液,分装,置一20C避光保存.其它试剂均为市售分析纯妊娠19dWistar大鼠(每日查阴栓. 见有阴栓为妊娠第一天)由中国医学科学院动物中心提供. 蜕膜细胞悬液制备将妊娠I9d的Wistar大鼠,断头处死,取出子宫并将其剖开.去除胎 鼠及胎盘,将残留在子宫内的羊膜轻轻剥去,用冷PBS清洗子宫2次,将子宫平铺于水板上固 定,用手术刀轻轻刮取蜕膜组织,置入盛有1OmlTEPBS(含0.005胰蛋白酶,0.002EDTA) 的平皿中,将蜕膜轻轻剪碎后,连同TEPBS消化液一同倒八试管中通入含5COz.95O!的 气体.在37C水浴中振荡孵育1h,以DMEM培养基(含10小牛血清)终止消化,过 200目筛 阿.滤液离心(I25×9)tOrain去上清液,以Hanks液洗一次,之后将细胞悬浮于DMEM培养 基中使成每mI为5×10个细胞的细胞悬液.台盼兰排斥反应检查.细胞成活率在90以上 车文于199d年3月23日收到 荧光标记及[cai测定将上述细胞悬液在37C预温5rain后.加入Fura一2/AM(~浓 度为5umol?L一).37C恒温振荡45min,负载后的细胞再以含0.2小牛血清白蛋白的 Hankrs液洗2次.最后调整细胞浓度为5×106/ml.测定在37C循环水浴下进行,用日立 F一4010型荧光分光光度计,用文献方法进行测定. 结果 在细胞外钙浓度为1.3mmol?L条件下,静息状态时.妊娠19d大鼠子宫蜕膜细咆内 [ca]i为1.24士13nmol?L(d_SE,n=6)加入催产素0.001,1~tmol?L后,可引起 [ca]j出现瞬息增加,[ca.]i在I5S内达高峰,之后逐渐下降,在l2rain左右降至静息水 平,见图1 若在无细胞外钙的条件下(催产素作用前在细胞悬液中加入6mmol?LEDTA,,催产索 引起的[ca]i的瞬息变化,峰值不变.但在2rain即降至静息水平.催产索引起的蜕膜细咆内 [ca]I峰值呈剂量依赖性,如图2所示. 600 n(mirI) Fig1Oxytocin—indeced[ca]ipeak.Decidua cellsfromoneratwereloadedwithFura一2and challengedwithoxytocinr0.1pmol?L). Oxyl~in(…ntmtJ0n(nmol?L'1 Fig2[ca]idoseresponsetooxytocin:Peak [ca.]iresponseforincreasingconcentrationof oxytocjn.CellswereloadedwithFura一2and challengedwithoxytocin.Th~,eresultsarefrom deciduacellsoffivepregnantrats 以催产素lmoI?L反复剌激蜕膜细胞不能引起重复的[ca"]变化,在细l咆悬液中加 入催产素Imo1.LIrain后,以HankS液(含0.002牛血清白蛋白)清洗细胞1次.再以1 rtmol?L催产素加入细胞悬液,蜕膜细胞内[ca"]I变化很小.可见催产索引起的妊娠末期大 鼠子宫蜕膜细胞内[caji瞬息增加可被其自身钝化.从妊娠14d始.每日给妊娠大鼠|p硫酸 去氢表雄酮钠盐,共5d,于妊娠第19d处死大鼠.消化分散的蜕膜细胞并测定细胞内 [ca"]i.结果给药20mg?kg组和40mg?kg一'组,蜕膜细胞内[如!]1分别为132?12 nmol?L一(n一4)和i34土9nmol?L(n一5),与对照组比较无显着差异.给硫酸去氲表雄 酮钠盐后消化分散的大鼠蜕膜细胞由催产素(0.1岬0J?L)引起的[caI]i峰值明显高于对 ? ?fffff/ 一 1J?J??,1 蛐鲫曲 ^1_一0u 蓟学AetaPharmaceuticaSinica1994129r1【):8I4,引7 照组窘蜕膜细胞[caIj蝰值,对照组峰值为396?22nm0I.L一(n一4);给药40mg?kg 组曼不20mg?kg一组,[Ca"]j峰值分别为620~14nmol?L和604?l8nmol?L'n=4,P< 0.05) 讨论 车文采用荧光指示剂~'ura一2/AM删得分离的妊娠末期丈鼠子宫蜕膜细胞静息状态下 fca3i值.并发现催产素nI激福蜕膜细咆使其[ca:]i出现瞬息增加,在体给硫酸去氢表雄 酮钠盐呵姨此瞬息变化升高激素激活细胞内肌醇磷酯蛋白激酶c系统是通过与细胞膜表面 幢受体结台,使磷酸肌醇酶激活,通过G蛋白使二种第::信使——甘油二酯和三磷酸肌醇生 成.前者直接激活蛋白激酶C.后者使细胞内贮钙释放".本实验中随着催产索浓度增加,蜕 膜细胞内[Ca]i也平行地增加,催产素引起的[Ca]i瞬息变化与其他系统中所见的三磷酸 肌醇引起的细胞内质网钙释放相似;并且催产素的此种作用可被其自身钝化,这种钝化很 町能是由蛋白激酶C介导的反馈抑制蛋白激酶c介导的激素引起钙注入的反馈抑制已在许 多系统巾梭证寓+这种反馈可能包括受体磷酸化,与G一蛋白的相互作用及三磷酸肌醇降解加 快等'.蒋此反馈途径存在.蜕明在妊娠犬鼠蜕膜细胞中催产素可能激活肌醇磷酯蛋白激酶C .即1油二酯和三磷酸肌醇 的:条途径 本实验还汪实硫酸去氢袭雄酮钠盐在体给药后分离所得蜕膜细胞经催产索刺激引起 CCai瞬息增加峰值升高.且3,1量有关,而在细胞悬液加入硫酸去氢表雄酮钠盐则无此变 化硫酸去氢炭雄酮为雌激素前体,说明雌激素也与催产素的作用有关. 蜕膜产的PGs被认为是分娩发动的一个重要因素,此过程的激活剂仍未确定.催产 素 町刺激太鼠蜕膜PGs产生增加,且妊娠末期蜕膜细胞上催产素受体增加,这可能与 妊娠末期 雌激素优势有关,在体给硫酸去氢表雄酮钠盐使催产素作用增强支持这一种可能 性结 合本文结果我们认为.催产素激话妊娠末期大鼠蜕膜细胞产生与分娩有关的PGs 有可能通过 肌醇磷酯蛋白激酶C系统 参考文献 IOkazakiT.eta1.Initiationofhumanparturition.KII.Biosynthesisandmetabolismof prostaglandinsinfetalmembranesanduterined~cidua.ibndE?瞄"(:I98,;139i373. 2OlsonDM-eta1.Prostaglandinoutputinrelationtoparturitionbycellsdispersedfrombuula n intrauterjfietissues.dm诎肘毗倒l983E57:694 3ChanWY.Theseparateutrotonicandprc6taglandin— releasingactionsofoxytoxin.evidenceand comparisonwithangiotensinandmetacholineintheisolatedratuterus../wmdpTMr 1980{213,575. 4lshikawaM,eta1.EffectsofepineohrineandoxytocinoffthereleaseofPGFfromthaiso]ated ratuterus.?I978;15:89. SoloffMS-eta1.CharacterizationofoxytoeJnreceptorsintheuterusandmammarygland.Fe d Pr,r1977:3B:1861. 6FuchsA—R.Theroleofoxytocininparturition.In:ParrezH,ParrezS,eds.舳m 药学AetaPharmaceutieaSinica1994;29(11){814,817817 Ez~imentalMedicg~e:AG椭 Tribut~toC/audeBernard.Amsterdam:ElsevierNorthHolland, l980:150.734.. 7FuchsAR.Oxytoein—receptersinthehumanuterusduringpregnancyatparturition.Am.,0 Oyno~z,~1984;lSO:734. 8 9 1O 1l l2 MooreJJ.eta【.Oxytoeinactivatestheinositol—phespho[ipid— proteinkinaseCsystemandstimu— laresprostaglandinproductioninhumanamnioncells.gMocruu/z~, y1988:123:l771. 李明,等.应用Fura-2/AM检测分离的神经细胞内游离钙及其变化.药学 1991;2B:890. NishizukaY.StudiesandperspectivesofproteinkinaseC.-~ciettce1986l233:305. Abdel-LatifAA.Calciummobilizingreceptorstpolyphosphoinesitidesandthegenerationof secondmessengers.Rev1986f30:228. WaynforthHB,eta1.Secretionratesofoestrogensintotheovarianvenousbloodofpregnant rats.JmdFee1972}2e,19t, 0XYT0CINPROV0KEINTRACEI工ULARCAIIUM10N C0NCENTRAT10NINDISPERSEDDECIDUACELLS 0FLATEPREGNANTRATS FXQiao,LFZhouandJTZhang (1,~t/tnteofM~teriaMedim.(weAcademyofMedical&??? PeldagMedical曲衄e,&廊00050) ABSTRACTIthasbeenpostulatedthathormonalsignalactsupondeciduaandammionto triggerLaborviaproductionofPGs.In0ufexperimentthedeciduacellsofpregnantratsfday19) weredig吲 edanddispersedtotesttheeffectofoxytocin0/4intracellularcalciumionconcentration [ca3iwhichwasmeasuredwiththefluorecentdyefura-2.Additionofoxytocin0.001,1 /xnol?L,tothetestsystemresultedinadose— dependenttransientJ/)c/'easein[ca"]jwhichpeaked withinl58andreturnedtobaselineinI2rain.Repeatedadditionofoxytoeinlurn.l?L一 fmledto elicitarepeatedresponse.Inthedeciduacellsofdihydroepiandroteronesulfate-treatedpregnantrats, the[Ca]ipeakprovokedbyoxytocmwassignificantlyhigherthaninthecontrols.Theseresults suggestthatoxytoeinmayactivatetheinositot—ph?Dholipid— proteinkinaseCeffectorsystemindecidua ceilsofprgenantrats.Dihydrcepiandrosteronesulfatemayinfluencetheaction. KeywordsFura一2/AM;Oxytocin;Deciduacells;[ca]i