豚鼠胰腺的胰高血糖素,促性腺激素释放激素和促性腺激素释？…

豚鼠胰腺的胰高血糖素,促性腺激素释放激素和促性腺激素释？… 豚鼠胰腺的胰高血糖素,促性腺激素释放激 素和促性腺激素释,… 34 酿酶尺一倚屯髻 第四军医大学(JFourthMil1tMedUniv)1998;19(1) 豚鼠胰腺的胰高血糖素,促性腺激素释放激素和促性腺激素释放激素受 体的免疫组织化学双标记研究}弓?多 姬秋和.黄威孙岚赵伯钦.(第口军医 大学西京医院内分泌科.基础部组织胚胎学教研室 西安710033) 关键词胰高血糖素促性腺教素释放激素促性腺激素 释放激素受体免疫组织化学胰腺豚鼠 中图号R58 摘要目的:阐明胰外分泌部产生的促性腺激紊释放激紊 (GnRH)的受体与胰岛胰高糖紊的共存关系.方法:制备豚 鼠胰腺石蜡连续切片,ABC法分别进行GnRH和GnRH 受体,胰高血糖紊和GnRH受体的免疫组织化学染色.结 皋:GnRH免疫反应阳性细胞分布于胰腺的外分部, GnRH受体免疫反应阳性细胞位于胰岛内,与胰高血糖紊免 疫反应阳性细胞的数量及分布特点完全一致.结论:胰岛内 胰高血糖紊细胞可能为胰外泌部自身合成的GnRH的靶细 胞,提示胰外分泌部可能对胰内分泌具有调节作用. Double-Iabelinglocalization ofgheagon,gonadorelin(GnRH)andGnRHrecep- totwithinpancreasoftbeguin~~pig JIQiH—HeL,HUANGwei—Quan2,SUNLan2, ZHA0Bai—Q DepartmentofEndocrinology,XijingHospital DepartmentofHistologyandEmbryology,Faculty ofPreclinicalMedicine.FourthMilitaryMedlea1Uni— versity.Xiari710033 AbstractAim:Tofindthecoexistenceofglucogenandthe receptorofgonadorelin(GnRH)producedbytheexoerine partinthepancreas.Methods:Sequentialdeparaffini~edsec— lionsofguinea—pigpancreaswereimmunostalnedwithABC method.ThefirstantibodieswererabbitantiGnRH,rabbit anti—glucagonandrabbitanti-GnRHidiotypicantibodies,the IatterwereshowntobindspecificallytoGnRHreceptor.Re— sts!GnRHimmunoreactivecellswerefoundintheexocrine pancreas,whileGnRH—receptor—immunoreactlveeelkwere /ocatedinendocrinepancreas.Thenumheranddistributionof thelattercoincidewiththatofglucagonimmunoreactivecells. Condusion:Glucagoncellsinislets0fpancreasmaybethe targetcellsofGnRHwhichWaSsynthesizedintheexocfine '国家自然科学基金资助项目No39770388 姬秋和,男.1962一o922生,湖北省武汉市人,汉族,1905年6月上梅 第二医科大学博士毕业.导师陈家伦教授副教授,副主任医师.博 士,发表论文15篇.西安710033,电话(029)322191675300 pancreas.Thisimplicatesthattheexocrinepartmayregulates theendocrinepancreas. Keywordslmmunohistochemistrygonadorelinreceptor pancreasisletsglucagon 0引言 _大鼠胃肠胰系统能自身合成促性腺激素释放激 素(GnRH)[1],而且胰岛分布有GnRH受体免疫反 应阳性细胞口].为了解胰腺产生的GnRH对胰高血 糖素细胞的可能影响及其作用方式,本试验以邻片 免疫组织化学双标记法,对胰腺的胰高血糖素 (Glu),GnRH和GnRH受体分别进行了双标记研 究. 1材料和方法 l_l试剂兔抗GnRH抗体为中国科学院动物研 究所内分泌研究室制备";GnRH抗独特型抗体为 我校组织胚胎学教研室自制Ea];兔抗胰Glu抗体为 Dako公司产品;ABC药盒为Vector公司产品. 1.2组织材料雄性成年豚鼠3只,体重250g,在 戊巴比妥钠ip麻醉下,切断颈动脉放血处死,取出 胰腺,人Bouin液固定过夜,石蜡包埋,制成2/am厚 连续石蜡切片,取相邻切片分别进行GnRH和 GnRH受体,胰Glu和GnRH受体免疫组织化学染 色. 1.3免疫组织化学反应程序相邻石蜡切片脱蜡,水化后,人5ml/L甲醇一HO30min,以清除内源性 过氧化物酶的活性,然后按免疫组织化学ABC法进 行反应.第一抗体分别为兔抗GnRH抗体(1:l 000稀释),GnRH抗独特型抗体(1:2000稀释)和 免抗胰高血糖素抗体(1:2000稀释);4?孵育24 h,然后加生物素标记的马抗免IgG抗体(1.200稀 释)室温孵育1h,ABC复合物(1i00稀释)在室 温下孵育30min,用正常兔血清代替第一抗体进行 孵育作阴性对照试验. 2结果 GnRH,GnRH受体和胰Glu免疫反应阳性细 胞为深棕色,背底不着色,对比鲜明,阳性细胞很易 辨认.对照试验为阴性反应. GnRH免疫反应阳性细胞分布于胰腺的外分泌 部,阳性细胞多呈锥体形,有的散在分布,有的则3 第四军医大学(JFourthMiLitMedUniv)1998;l9(1) ,5个聚集成群,阳性反应物质分布于胞质,胞核为 阴性反应(Fig1).胰岛细胞均呈GnRH阴性反应. 邻片GnRH受体免疫组织化学反应的结果显示,外 分泌部GnRH免疫反应阳性的细胞均呈GnRH受 体免疫反应阴性,而GnRH阴性反应的胰岛则有部 分细胞呈GnRH受体免疫反应强阳性.阳性细胞较 大,呈卵圆形,散在分布于胰岛内,阳性物质亦分布 于胞质内,胞核为阴性反应(Fig2).胰Glu和 GnRH受体邻片免疫组织化学双标记的结果显示, 胰岛内所有胰Gh】免疫反应阳性的细胞均呈GnRH 受体免疫反应阳性,两种阳性细胞的数量及分布特 6). 点完全一致(Fig3, GnRH免疫反应阳性细胞分布于豚鼠胰腺的外分泌部 GnRHimmunoreacttvecallsintheexocrinepancreasoftheguineapig×200 GnRH受体免疫反应阳性细胞分布于豚鼠胰岛 GnRHreceptor—immunoreactivecellsinisletsofpancreas×200 脬鼠胰岛内胰高血糖素免疫反应阳性细胞 (31ucagonimmunoreativeceinisletsofpancreas×2D0 图3中呈胰高血糖素免疫反应阳性细胞同时呈GnRH受体免疫反应阳性 Giucagon-immunoreativeceUsinFig3a工ealsoGnRHreceptor-immunoreatire×200 胰岛内胰高血糖素免疫反应阳性细胞 Glucagon—immunoreactivecellsinisletsofpancreas×200 图5中呈胰高血糖素阳性的细胞同时呈GnRH受体免疫反应阳性 Glucagon—immunoreativecellsinFig5arealsoGnRHreceptor—immunoreative×200 1l2334 4 556 6 图啦图图啦圉罾圉 36 3讨论 不同器官的GnRH发挥不同的功能,如胎盘绒 毛的GnRH调节绒毛膜促性腺激素等多种绒毛 激素的释放,乳腺癌分泌的GnRH对癌细胞的增殖 起抑制性自调节作用.我们曾证明胰外分泌腺上 皮细胞既含GnRH免疫反应阳性物质],叉含有 GnRHmRNA杂交信号],但胰岛既未见GnRH阳 性细胞,又未见GnRHmRNA阳性细胞,说明胰腺 外分泌部能台成GnRH,而胰岛则不能.本实验观 察到,邻片GnRH免疫反应阳性的胰外分泌腺细胞 呈GnRH受体免疫反应阴性,GnRH免疫反应阴性 的胰岛细胞中有一部分则呈GnRH受体免疫反应 阳性,提示外分泌部产生的GnRH可能以旁分泌的 方式对胰岛的部分细胞起调节作用.有人提出], GnRH作用缓慢而且持久,由于机体对其缺乏有效 的灭活机制,因此它可以弥散较长的距离,通过非突 触的联系作用于邻近的细胞.我们的结果支持以上 观点. 胰腺微血管灌注实验证明,胰腺内微循环血流 方向为B细胞一A细胞一D细胞一胰外分泌腺, 推测胰腺的内分泌部对外分泌部可能具有调节作 用0一.在临床中,部分非胰岛素依赖型糖尿病的胰 外分泌功能受损,并且这种损害与胰岛素分泌总量 有关],至于内分泌功能降低的因果关系尚不明 确.本实验观察到,胰岛内呈胰Glu免疫反应阳性 的细胞也呈GnRH受体免疫反应阳性.说明胰岛内 第四军医大学(JFourthMilitMealUniv)1998'l9(1 胰Glu细胞是GnRH的靶细胞,提示胰外分泌部对 内分泌部可能也具有调节作用.GnRH可能是实现 胰外分泌部对内分泌部的胰Glu进行调节的生物活 性物质,但是它对胰Glu细胞哪些功能起调节作用, 尚待进一步研究. 参考文献 1黄威权,罹祟理.GnRH免疫活性细胞和神经在大鼠胃陆瞎系坑分 布的韧步研究箭剖,19902(3):290301 2黄威权,向正华,孟琳.促性腺激素释放澈素mRNA阳性细胞在 大鼠胄陆胰系统的丹布.解剖.1996}27(2):180,191 3黄威权,孙岚,张祟理.GnRH抗独特型抗体的制备与鉴定.解剖 学杂志,199417(增刊):353 4穰粜理,王红,腔红.L.HRH放免定厦其应用中国应用生 理学杂志,1989'5:(1):8793 5MathialaganN?RacAJ.Gottadetropin—releasinghormone(GnRH) stimulatesbothsecretionandsynthesisof}1…chorioniego- nadcecropin(hCG)byfirsttrimesterhumanplacenta[minceviz~. B研,198613(5):757—765 6HarrisN,DutlowC.EidneKetGonadotropimreleasioghormone geneexpressioninMDAM1~231and2R751breastcareino~.eII [ine~.C口一Res,1991;51(10)25772581 7林禳诚.生暂活性肚觅;陈兆聪主编.医学分子生物学武汉;武 祝大学出版社,1988:385 8姬袱和,胡绍文.李恒泽atN1DDM患者中胰岛素分越与胰外 分蜷功能关系的初步探讨.中华内丹蜷代谢杂志,1993;9(4):231 — 232 9SamdsEtStagnerJ1.Isletssomatc~tafin-microvamu~r,paine andpulsatileregulation.Metobotism.1990I39(9Suppl2){55—6O (收稿19961O15隹回199'70108)编辑黄良田 噪声对豚鼠耳蜗核一氧化氮合酶阳性神经元及其基因裹达的影响 [姜鸿彦.王棉玲.黄维国.中华耳鼻咽喉抖杂志,1997;32(5):268,270] 为探讨豚鼠耳蜗核一氧化彝合酶(nitricoxidesynthase.NoS)神经元在白噪声损伤过程中可能的作用.采用硫辛酰胺脱氢酶 (NADPH—d)组织化学方法及半定量多聚酶链反应(PCR)技术.研究白噪声暴露后豚鼠耳蜗棱Nos神经元及NoSmRNA含量 的变化以及与听两的关系.结果表明.噪声暴露后耳蜗棱NOS阳性神经元的数量及染色强度明显增加,2周选高峰.3,4周持 续高表达.5周有所恢复,但仍高于正常水平.耳蜗棱NoSmRNA含量的变化规律与形态学观察结果一致,2周组NOSmRNA 是正常的5.02倍.噪声暴露后ABR阈移与耳蜗棱NoSmRNA古量呈正古量最高. 相关(r--0.9655,P<O.01).提示耳蜗菝 Nos阳性神经元可能参与了耳蜗神经损伤修复的调节,N0s基因的高表达是噪声性聋发病机制中不可忽视的重要因素之一. (王小仲)