EIA定量检测甲状腺球蛋白抗体和甲状腺微粒体抗体在临床中的应用

EIA定量检测甲状腺球蛋白抗体和甲状腺微粒体抗体在临床中的应用 EIA定量检测甲状腺球蛋白抗体和甲状腺 微粒体抗体在临床中的应用 江西医学检验2006年10月第24卷第5期.429. ? 实验研究? EIA定量检测甲状腺球蛋白抗体和甲状腺微粒体抗体在临床中 的应用 陈绩才-李剑民t林秋强陈韧 中图分类号R446.61,R392.33文献标识码A文章编号1008—0023(2006)05—0429-02 【摘要】目的探讨酶免疫法定量检测血清抗甲状腺球蛋白抗体(TG—Ab)和抗甲状腺微粒体抗体 (TM—Ab)在临床应用价值.方法采用酶免疫法(EIA)定量检测血清TG—Ab和TM—Ab,并对检测条件, 干扰因素,精密度和准确度进行试验探讨.结果EIA定量测定血清TG—Ab和TM—Ab分别在8801U/ml 和665IU/ml以下线性良好.TG—Ab批内和批问CV分别为3.2%和7.1%;FM—Ah批内和批间CV分别为 3.9%和7.6%.测得平均回收率为TG—Ab:92.4%,TM—Ab:101.2%血清标本4?存放一周内.对测定结果 无影响.胆红素,血红蛋白在0.Sg/L对测定无干扰,H}】浓度>O.5g/l对rM—Ab产生干扰.结论EIA 定量检测能较准确检测血清甲状腺自身抗体水平.操作简便.结果准确.符台临床常规使用要求.对自身 免疫性甲状腺疾病的诊断,疗效观察及预后具有临床应用价值. 【关键词】酶免疫法;抗甲状腺球蛋白抗体;抗甲状腺微粒体抗体;定量 抗甲状腺球蛋白抗体(TGAb)和抗甲状腺微粒体抗体 (TMAb)等.是自身免疫性甲状腺疾病的重要诊断指标.对自 身免疫性甲状腺疾病的诊断,疗效观察及预后具有重要临床 应用价值.作者采用EIA法.对TGAb和TMAb进行定量检 测.并对影响试验的因素及临床应用进行探讨. l材料与方法 1.1标本637例.其中门诊健康体检人员500名.甲亢 l13例,甲低24例.年龄l4,66岁.平均年龄36岁.血清取 自本院门诊已确诊的患者. 1.2仪器与试剂洗板机(MK一2)和酶标仪(MK一3)芬兰 LabsystemDragon生产.EIA法TG—Ab和TM—Ab试剂盒购自 美国Diocheck公司 1.3检测方法在微孔条中分别加人100l标本和质控血 清(标本和质控血清用标本稀释液作I:100稀释),100l标 准液,空白:fUJI1100l标本稀释液,37~C×30min.用洗涤液 在洗板机上洗板三次,在各孔中分别加人100l酶标抗体. 温育和洗板同上.在各孔中加人100l显色剂.37?×30rain 温育.在酶标仪上用450nm虑光片检测各孔OD值.根据标 准的OD值.用五参数拟合曲线方程在电脑上绘制 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 曲线. 根据样品OD值计算相应TG-Ab和TM—Ab浓度. 2结果 2.1线性范围将l份Ab和TM—Ab高值血清标本. 用生理盐水作不同倍数稀释后.观察其反应进程的线性.结 果:TG-Ab浓度880IU/ml,TM—Ab浓度665IU,Tlll以下线性良 好.检测灵敏度TG—Ab和TM—Ab各为llU/ml. 作者单位:515800l,广东汕头澄海人民医院检验科2,内分 沁科3,风湿科 作者简介:陈绩才,1962年出生,男,副主任检验师.毕业于广 东省汕头卫校,主要从事临床免疫学研究. 2.2精密度试验批内低,高值血清标本各1份.重复测 定2O次.TG—Ab和TM—Ab平均CV分别为3.2%和3.9%:批 ?:将血清标本4~C冷藏.每天重复测定3次,连续7d. I’G—Ab和TM—AbCV分别为7.1%和7.6% 2.3刚收试验取已测定的血清标本.分别加人浓度为. TG—Ab:168,671IU/ml:TM—Ab:65,5181U/ml标准液进行回收 试验,测得平均网收率分别为TG—Ab:92.4%.TM—Ab: 1O1.2%. 2,4标本稳定性观察将标本置4?冰箱.连续测定7d.其 结果经统计学分析.无显着性差异(P>O.05). 2.5干扰试验在已测定的血清标本中分别加人血红蛋 白,腮红素做干扰试验.结果:血红蛋白浓度在O.5s/L以下, 胆红素浓度在274umol/L时.对1B—Ah和TM—Ab测定无影 响.当血红蛋白浓度超过ls/L,对TM—Ab测定可产生8.9% 正干扰. 2,6正常参考值用本法测定500名正常人血清标本.结 果经D检验呈正态分布.其正常参考值TG—Ab:l,171U/m1. TM-Ab:2,261U/ml. 2.7甲状腺疾病患者TGAb,TMAb检测结果见附 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf . 3讨论 目前测定甲状腺自身抗体TG—Ab和TM—Ab大多采用 间接免疫荧光法(1llq和放射免疫分析法(RIA).RIA法对环境 造成一定污染.且这两种方法目前只能作半定量检测.对自 身免疫性甲状腺疾病的诊断,疗效观察及预后判断有一定的 局限性.近年来发展起来的EIA技术.其灵敏度可与RIA法 媲美【lI,且避免了RIA法的缺点.目前文献报道不多.作者用 EIA法技术.对血清抗甲状腺球蛋白抗体和抗甲状腺微粒体 抗体进行定量检测.并对影响实验的因素和临床应用价值进 行探讨,各项指标符合EIA法的测定要求.实验证明.溶血, ? 430?JiangxiJ.MedLabSci.October2006,Vol24,No5 附表甲状腺疾病患者TGAb,TMAb检测结果 黄疸,标本放置4?冰箱1周内.其检测结果经统计学分析无 显着性差异(尸>0.o5).当血红蛋白浓度在lg/L时,对TM—Ab 可产生正干扰.与甲状腺微粒体是甲状腺过氧化物酶有关. 反应温度在37~C比在室温检测结果更稳定.EIA法属固相免 疫测定.抗原,抗体的结合只在固相表面上发生121,检测的稳 定性与微板孔的密度及试剂的稳定性有关定量免疫测定的 依据是使用系列浓度标准品测得的剂量反应曲线f即通常所 谓的标准曲线).由于定量免疫测定中的剂量反应曲线与生 化测定中的标准曲线相比,一般均为非线性的.变异较大,不 宜称为标准曲线131不同数学模式可用来改善上述剂量反应 曲线给制的精密度,本文采用五参数拟合曲线方程.在电脑 上制作剂量反应曲线.同时.为提高本法检测的稳定性和准 确性.每次检测均应制作剂量反应同曲线. 研究表明.用本法测定血清中1’G—Ab和TM—Ab具有简 便,快速,线性范围宽,灵敏度高,特异性强.结果准确等优 点.因此.本方法值得在临床推广应用. 通过附表发现.两个抗体在正常人群的检出率TG—Ab 和TM—Ab分别为8.1%和6.1%.与本检测方法所用的包被抗 原是重组人甲状腺球蛋白和重组人甲状腺过氧化物酶f微粒 体性抗原)有关.甲亢患者70%以上可检测出TG—Ab和 TM—Ab两种自身抗体.一般认为,弥漫性甲状腺肿伴甲亢患 者血清中可出现两种自身抗体.但浓度一般较低.治疗后抗 体效价下降或消失.若患者两个抗体持续出现.或持续增高, 日后发生甲减或甲亢复发的机率较高M1本文24例甲低患者 中,66%以上患者这两个抗体增高或持续增高.表明甲减是由 自身免疫性甲状腺病所致.因此TG—Ab和TM—Ab的检测. 对自身免疫性甲状腺疾病的诊断,疗效观察及预后判断具有 一 定的临床应用价值.TG—Ab和TM—Ab两个抗体的动态检 测在临床中的应用有待进一步的研究 参考文献 …1万文微,李吉文肿瘤标志的临床应用【J】.中华医学检验杂志,1997, 20(1):49. 【2】郑怀竞,韩松主编.临床检验ELISA指南【M】.北京:北京医科大学, 中国协和医科大学联合出版社,1994,41. 【3】3李金明编着.临床酶免疫测定技术【M】.北京:人民军医出版社,2005, 96. 【4】张巾超主编.现代主治医生提高丛书【M】.北京:北京医科大学,中国 协和医科大学联合出版社.1998,144. (上接第477页)胞比例),其中吞噬各种血细胞的组织细胞? 1%.本文患者以隔日高热为主要的临床特点.外周血涂片检 到疟原虫裂殖体,滋养体,配殖体,形似问日疟.巨细胞病毒 抗体!gM阳性,且磷酸氯喹治疗后体温正常.故间日疟,巨细 胞病毒等感染诊断明确.骨髓中单核巨噬细胞占5%.吞噬红 细胞,白细胞,血小板等巨噬细胞易见.结合外周血象及肝脾 肿大,IAHS诊断可以成立.该患者抗疟治疗有效.其骨髓噬血 现象明显好转.基本确定IAHS还是由疟原虫感染引起. HPS与恶性组织细胞性增生症(MH)之间临床和细胞形 态学,组织学的差异并不十分清晰let.因此须与MH区别.从 形态学上看.HPS骨髓中增生的组织细胞多数为正常成熟细 胞,而MH的特征是异形组织细胞和多核巨组织细胞.本例 我们在骨髓检查时发现符合HPS同时临床上还有间歇热特 征,采集外周血检查检到疟原虫,而骨髓片中反复寻找并未 发现,原因可能和髓血屏障的存在有关.因此在检查骨髓片 时一定要结合临床.给临床提供更多线索. 目前治疗IAHS的主要药物和措施:(J)IVIG:其作用机制 可能在于抑制巨噬细胞Fc受体,减少吞噬血细胞作用,下调 11I细胞活性,而且IVIG毒性小;?皮质类固醇:它可抑制T 细胞产生细胞因子.还可抑制G-CSF,TNF—,IL-1,IL-2, IFN—,儿一2R等细胞因子基因的转录,但也影响其他细胞, 如巨噬细胞,嗜酸粒细胞等.限制了它的应用;?环孢霉素A (CsA):能有效抑制免疫系统,特别是抑制T细胞产生细胞因 子,抑制Thl细胞.纠正Thlgl’h2失衡.应注意长期应用CsA 时患儿感染机率大大增加;?其他免疫调节措施:抗胸腺细 胞球蛋白fATG)联合糖皮质激素和CsA能成功诱导原发性 噬血细胞性淋巴组织细胞增生症缓解.全血或血浆置换疗法 也可清除血液中的免疫抑制物质;?细胞毒药物:对于症状 严重,病情进展快的IAHS,特别是EB病毒相关HLH.可考 虑化疗171 参考文献 …1夏云金,万楚成,刘喻,等.噬血细胞综合征32例临床分析【J】.内科 急危症杂志,2004,10(3):159—166. 【2】2ChandraP,ChanderySA,RosenerF,eta1.Transienthistocytosiswith strikingphagocytosisofplatelets,ieukocytesanderythrocytes【J】.Arch InternMed,1975,135:989—99I. 【3】3祝明洁,姚晓虹,奚豪,等.感染相关性噬血细胞综合征的骨髓病 理学改变U】.诊断学理论与实践,2005A(3):222—224. 【4】朱自力,陆俊国,龚振夏,等.转移癌合并感染引起噬血细胞综合症 1例并文献 复习 预应力混凝土预制梁农业生态学考研国际私法笔记专题二标点符号数据的收集与整理 U】.河南肿瘤学杂志,2004,17(6):454—455. 【5】5陈灏珠主编.实用内科学【M】.第11版.北京:人民卫生出版社,2002, 2205—2205. 【6】6王学文.噬血细胞综合症研究进展【J】.国外医学输血及血液学分册, 1998,21(6):335—335. 【7】HiroyukiTsuda.TheuBeofCycio6porin-AinthetreatInentofvirus ,,ssociatedhemophagocyticsyndromeinadults【J】.LeukLymphoma, 1997.28:73—82.