激素诱导雄性花鳗鲡性腺发育及相关激素分泌研究（可编辑）

激素诱导雄性花鳗鲡性腺发育及相关激素分泌研究（可编辑） 激素诱导雄性花鳗鲡性腺发育及相关激素分泌研究 海南大学 硕士学位论文 激素诱导雄性花鳗鲡性腺发育及相关激素分泌的研究 姓名:周雯伊 申请学位级别:硕士 专业:水产养殖学 指导教师:林浩然 20090601摘 要 花鳗鲡人工繁殖的研究在国内外尚属空白。本实验重点研究与繁殖有关的激素分泌 活动,建立雄性花鳗鲡人工催熟、催产技术,为研究花鳗鲡繁殖内分泌的调控机理提供 理论依据,为成功解决鳗鲡人工繁殖提供实践基础。本文以塘养雄性花鳗鲡为研究对象, 通过肌肉注射外源促性腺激素诱导其性腺发育成熟,观察其精子发生过程,研究人工催 熟下花鳗鲡精子的生物学特性,研究与繁殖有关的激素分泌活动,研究催熟过程中相关 细胞的超显微结构变化。 研究结果如下: .采用肌肉注射生理盐水的方式处理对照组雄鱼,处理时间为周,对照组尾鱼 的平均性腺系数为.?.,平均肝体系数为.?.,平均消化道系数为 .?.,精巢没有发育,停留在.期。采用肌肉注射的方式处理实验组雄性 花鳗鲡,剂量为/?体重,每周注射次,注射时间为周。实验组尾鱼的平均 性腺系数为.?.厂平均肝体系数为.?.,平均消化道系数为.?.,性腺 明显发育,成熟率达.%。 .花鳗鲡精子头部长径为. ?.,短径为.?. ;尾部长度为. ?..;精液为.~.,精子密度为.×尾/。精子的适宜盐度为, 其中盐度为时,精子激活比率最高,快速运动时间以及精子的寿命最长。精子 的 适宜范围为。~.,值过高或过低都会影响精子的活力与寿命。另外,种金属离 子 、、和对花鳗鲡精子活力与寿命的影响趋势基本一致,金属离子浓度过 高或过低都会抑制精子的活力、缩短快速运动时间和寿命。而、、、 溶液浓度为.~./时,精子活力最好,最高激活比率为级。 .通过注射人绒毛膜促性腺激素诱导雄性花鳗鲡性腺发育成熟,每天注 射一次,共注射次。检测此期间血清中性类固醇激素、、和促性腺激素 的含量,以及相关细胞超显微结构的变化。结果表明,注射前雄性花鳗鲡血清 中、 和的含量都保持在一个很低的水平,性腺发育情况处于?期;当注 射第针后,血清中、的含量大幅度上升,这可能由于外源促性腺激素的正反馈 作用,使鱼体自身产生类固醇激素,的含量也有所上升,达到一个比较高的水平。 当注射第针后,雄性花鳗鲡排精,、和的含量均下降,但仍然高于催产前 的水平。在整个催产过程中,血清中的含量从一开始就不断的下降,排精后达到最低 点。 .脑垂体超微结构的观察表明,未注射的对照组雄鱼脑垂体中细胞含有大 小两种分泌颗粒,小颗粒电子密度高,大颗粒电子密度相对较低,分泌细胞处于静止期。 注射针的实验组雄鱼脑垂体中细胞处于活跃合成和分泌状态,大部分细胞 出现分泌释放激素后的空泡。 .肝脏组织的超显微观察表明,未注射的对照组雄鱼肝细胞略呈多角形,形 状规则,圆形的细胞核常位于细胞中央,核仁明显:细胞质内糖原丰富,脂肪泡很少见; 注射针后精巢发育成熟的雄性花鳗鲡肝细胞及核明显增大,小脂肪泡常融合在一 起形成大脂肪泡,致使许多细胞内只含有一、两个大脂肪泡,而把核挤到细胞一边,表 明肝细胞内脂类含量增加。 关键词:花鳗鲡,人工繁殖,精子,促性腺激素,类固醇激素,脑垂体,肝脏 也 . , ,. . ; ; ;. : . .%. : , /. .?. .?. .?. ,.. ,.~。.. ’~. ,. .,. . 十,,, ., . ,,, .. ,, .%.%. 曲 .’ ;,. 一, ,. 曲 ,. ., ; , , , . 。 ,; ; ,纽. ,. : , ,, , 海南大学学位论文原创性声明和使用授权说明 原创性声明 本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究工作所取得的成果。 除文中已经注明引用的内容外,本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品或成果。 对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本声明的法律结果由本人 承担。 论文作者签名: 日期: 年 月 日 学位论文版权使用授权说明 本人完全了解海南大学关于收集、保存、使用学位论文的 规定 关于下班后关闭电源的规定党章中关于入党时间的规定公务员考核规定下载规定办法文件下载宁波关于闷顶的规定 ,即:学校有权保留并向国家有 关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。本人授权海南大学可以将本学 位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或 扫描等复制手段保存和 汇编本学位论文。本人在导师指导下完成的论文成果,知识产权归属海南大学。 保密论文在解密后遵守此规定。 论文作者签名: 导师签名: 日期: 年 月 日 日期: 年 月 日 本人已经认真阅读“高校学位论文全文数据库发布章程”,同意将本人的学位论文提交 “高校学位论文全文数据库”中全文发布,并可按“章程”中规定享受相关权益。回盛途塞 逞銮丘澄丘:旦土生;旦生;旦三生筮查。 论文作者签名: 导师签名: 日 日期: 年 月 日期: 年 月 日岗雯伊 海南大学硕士学位论文 年月 第一章文献综述 第一节鳗鲡的研究概况 鳗鲡的分类地位和资源现状 .鳗鲡的分类地位 鳗鲡是鳗鲡属鱼类的统称,在分类学上隶属于硬骨鱼纲、鳗 鲡目、鳗鲡科、鳗鲡属,广泛分布于 全球热带、亚热带和温带地区。鳗鲡为洄游性鱼类,具有特殊的生活史,一般在 淡水中生长、生活,在海水中产卵、孵化。 长期以来,有关鳗鲡的分类问题一直存在众多争议。年,报道该 属鱼类有种,后来又把它归并成种。其后,、 通过系统发生学和地理分布学的研究,认为世界上鳗鲡属总共有种有种 包含亚种。其中:太平洋分布有种、印度洋分布有种、大西洋分布有 种。主要包括:日本鳗鲡/、花鳗鲡.、 、大口鳗鲡 苏拉威西鳗鲡 、内唇鳗鲡 、原鳗鲡 、加里曼丹鳗鲡 、太平洋双色鳗鲡 、灰鳗鲡 、东澳鳗鲡 、新西兰鳗鲡 、 、 澳洲鳗鲡 、新澳鳗鲡 、唇云纹鳗鲡“. 云纹鳗鲡 、双色 鳗鲡凹. 、莫桑比克鳗鲡 、欧洲鳗鲡 。 、美洲鳗鲡 有关我国鳗鲡种类的多少也众说纷纭。迄今为止,我国己定名并记载了 、中华 种鳗鲡,即日本鳗鲡 、花鳗鲡 鳗鲡 、短头鳗鲡 、疏斑鳗鲡 、云纹鳗鲡 、乌耳鳗鲡 和 福州鳗鲡 。但大多数学者认为我国淡水水域中只分布 种鳗鲡,即日本鳗鲡、双色鳗鲡和花鳗鲡;也有学者认为有种;还有学者认为 我国仅有日本鳗鲡和花鳗鲡种。 。鳗鲡的资源现状 我国鳗鲡养殖品种以日本鳗鲡和欧洲鳗鲡为主。现在欧洲鳗鲡苗种资源已经 接近枯竭,相对现有养殖规模,种苗资源严重不足。 年月日到日,在荷兰召开的“华盛顿公约”缔约国会 议,将欧洲鳗鲡列入公约濒危动植物附录,并将于年月起正式实施,周雯伊 海南大学硕上学位论文 年月 致使欧盟加强对苗种资源的保护。 日本鳗鲡资源也严重衰退,近年亚洲地区的日本鳗鲡苗种资源量只能维持在 吨左右,而近年的捕捞量均维持在~吨。年日本鳗鲡苗种产量约 为吨,为正常年景的/。从现下日本鳗鲡的现状看,已具有面临灭绝的可能 性。 可见,鳗鲡苗种资源严重短缺,导致鳗鲡苗种价格暴涨。而人工繁殖鳗鲡苗 种在近年内还不可能形成规模的生产能力,这为人工繁殖鳗鲡苗种研究提出 了十 分迫切的要求。因此,鳗鲡苗种资源问题也是阻碍养殖稳定发展的制约因素。 目前研究最多的鳗鲡有两种,既日本鳗鲡和欧洲鳗鲡。而世界上对花鳗鲡人 工繁殖的研究几乎空白。花鳗鲡是一种数量稀少、经济价值高的食用鱼类,为我 国二级保护动物,主要分布于海南、福建、广东等地。由于鳗鲡人工繁殖技术尚 未解决,花鳗鲡的种苗只能完全依赖于天然捕捞。而人为性质的水环境恶化和过 度捕捞,花鳗鲡的自然资源日渐枯竭。从可持续发展的角度来讲,这大大影响了 养鳗业的健康发展,并对鳗鲡资源的保护造成威胁。因此,解决鳗鲡人工繁殖技 术迫在眉睫。 鳗鲡的生活史 从年到,丹麦海洋生物学家 经历年的调查研 究,弄清了欧洲鳗鲡和美洲鳗鲡产卵场的位置。日本学者从上个世纪年代开 始调查日本鳗鲡产卵场,经历了年的时间,最终于年发现日本鳗鲡产卵 场位于马里兰岛向北的赤道流海域【】。年月我国首次在太平洋发现鳗鲡自 然孵化场,并采取到粒鳗鲡鱼卵。经分析鉴定:确定其中粒是日本鳗鲡鱼 卵,其产卵场位于马里亚纳群岛西侧,北赤道流北侧边缘海域。 鳗鲡是一种降海生殖洄游性鱼类,在淡水中生长,在外海产卵、受精,不同 种类的鳗鲡其生活史基本相同【】【。每年生长在淡水中的鳗鲡,性成熟后开 始进 行生殖洄游,到离海岸数千里之外的产卵场进行产卵。鳗鲡进入海水后性腺才开 始发育,到达产卵场时性腺成熟。 关于鳗鲡产卵水层的问题,年,根据采集到的柳叶鳗推断,鳗 鲡是在深海区的中层水面以下~产卵,而年,王义强等人根据 人工诱导鳗鲡产卵的情况推断,认为鳗鲡产卵水层可能是在表面【】 鳗鲡的卵为浮性卵,直径约。鳗鲡的受精卵孵化出白色透明的幼体, 天左右的时间,幼体在吸收完卵黄后变态为长扁形的柳叶鳗。柳叶鳗游泳能 力很弱,它们随洋流向陆地迁移,迁移速度约为公里/天,大约要经年的 时间才能接近河口。接近河口的柳叶鳗变态为半透明的圆柱状幼体,体长为 ,体重为..,被称为玻璃鳗。玻璃鳗进入江河湖泊后,开始了 周雯伊 海南大学硕士学位论文 年月 淡水生活。随着生长发育身体出现黄斑,过度为黄鳗,开始性分化。 在鳗鲡的整个生活史中,鳗鲡处于黄鳗阶段的时间最长,约年。当鳗 鲡成长到一定的时候,体色开始发生变化,由黄色转变为银色。鳗鲡体色转变过 程中,起决定作用的是体长,而不是年龄【】。鳗鲡体色开始变化,逐渐适应海水 生活,顺河向海洋开始进行生殖洄游,同时性腺也在这个时候开始发育。所以, 银鳗阶段也被称为生殖期。 一直以来,人们都认为鳗鲡属于一次性产卵鱼,产卵后不久,由于身体虚弱 而死亡。但在人工诱导鳗鲡排卵、排精实验中,亲鱼不是必然死亡的,多数可 以 成活【】。之后还有实验表明,虽然次催产的鳗鲡在催熟率、成熟系数、性腺 发 育情况上远远低于野生鳗,但是其催产率和幼苗成活率却高于野生鳗】。 第二节鳗鲡的性分化与性腺发育 鳗鲡的性分化 年,研究欧洲鳗鲡性分化过程时,得出以下结论:鳗鲡的性 分化需要经历个阶段。当体长在至~时,处于中性阶段; 当体长在~时,处于早熟的雌性阶段;当体长在~时,处 于雌雄同体两性阶段;当体长超过时,就是最后一个阶段,为雌雄异体 性分化阶段一。 年,等认为,欧洲鳗鲡是没有雌雄同体阶段,卵巢和精巢都是 直接由原始性腺发育而来的【】【 。这与年,佐藤等研究日本鳗鲡性分化时 得出得结论一样,认为没有雌雄同体阶段,只是有时在精巢中可能见到少量 的卵 原细胞或卵母细胞在结缔组织中分散存在。 年,在研究欧洲鳗鲡性腺分化时,得出的结论又有所不同。 他认为,鳗鲡精巢的分化过程经历个阶段:未分化的性腺、包含有雌性生殖细 胞卵原细胞和卵母细胞的类似于精巢的性腺被称为器官、精巢。 而卵巢则有两个过程:未分化的性腺发育成卵巢;未分化的性腺发育成 器官,再发育成卵巢?。 年,.的研究结论与有些类似,认为:卵巢是由早 期性腺直接发育而来,而精巢要经过一个两性时期,同时具备雌性、雄性生殖细 胞,这个时期和提出的器官时期比较相似【引。 一般认为,在天然种群中,野生雌性鳗鲡数量居多,而在池养鳗鲡中,雄性 鳗鲡数量居岁】【。大多学者推测,这是由于生种群密度的不同才出现这种差 异。实验 证明 住所证明下载场所使用证明下载诊断证明下载住所证明下载爱问住所证明下载爱问 ,高种群密度中雄性鳗鲡占优势,而低种群密度中雌性鳗鲡占优势 年,林鼎等在开展鳗鲡人工繁殖中遇到的首要问题就是从外观上鉴定 周雯伊 海南大学硕士学位论文 年月 鳗鲡性别的问题。研究表明雄鳗身体瘦小、眼大、眼间距窄、嘴短窄而尖、下唇 端紫黑;雌鳗身体肥大、眼小、眼间距宽、吻略长宽而原钝。根据此特点鉴定, 准确率为%左右【】。 鳗鲡性腺的发育 林鼎等 总结 初级经济法重点总结下载党员个人总结TXt高中句型全总结.doc高中句型全总结.doc理论力学知识点总结pdf 前人的经验,在激素诱导鳗鲡性腺成熟的过程中,用组织学的方 法观察性腺的发育情况。将精巢分为个时期,既精原细胞前增殖期,精原细胞 后增殖期,精母细胞生长、成熟期,精子开始出现期,精子完全成熟期和精子退 化吸收期;将卵巢分为个时期,即卵母细胞时相,卵母细胞单层滤泡时相,卵 母细胞出现脂肪泡时相,卵母细胞卵黄充满时相又分为早期、中期和晚期, 卵母细胞核极化时相,卵母细胞退化时相【。这是我国比较系统的一次将鳗鲡 性腺的发育过程做了详细分期。 .精子发生过程和精巢组织学分期 鳗鲡精巢属于壶腹型,精巢小叶由许多壶腹组成。壶腹间由疏松的结缔组织 分隔开,结缔组织间可见一些微血管分布,由这些微血管输送营养物质供给精原 细胞生长发育。壶腹内包含有若干个生精囊,精原细胞在生精囊中生长发育。 由于精巢发育程度不同,我们把精巢发育分成个时期。 第期,精原细胞前增殖期。 精巢小叶呈半圆形,薄而透明稍带肉色。其特点:可见单个精原细胞或数个 聚集成群的精原细胞。精原细胞形大,圆形或椭圆形,细胞核较大,核膜染色较 深,核内有一个被苏木精染成深紫色的大核仁,核质似以核仁为中心构成星网状。 核外包围有薄薄一层染成淡红色的细胞质。有一些精原细胞的外周由滤胞细胞包 围形成生精囊。数个生精囊被结缔组织包围形成似蜂窝状的壶腹雏形。 第期,精原细胞后增殖期。 精巢小叶增大增厚,小叶可见明显的微血管分布,呈淡红肉色。这个时期的 精原细胞仍呈圆形或椭图形,因经分裂,故细胞直径略小,核仍占很大比例, 核 外包围的染成淡红色的细胞质显得更稀薄。核内除可见一个被苏木精染成深蓝紫 色的大核仁之外,在核膜周边还可见个小核仁,核内染色质常呈疏网状。 第期,精母细胞生长、成熟期。 精巢小叶增大增厚成圆形,呈乳白色。初级精母细胞直径小,嗜碱性增强, 整个细胞被苏木精染成深蓝色,细胞核仍明显可见,核外细胞质似有所增长。初 级精母细胞在壶腹的生精囊中排列成层或多层,壶腹腔普遍可见。此时壶腹中 的精母细胞发育基本是同步的。此称为期早期,即处于精母细胞生长期阶段。 精巢进一步发育,在壶腹的生精囊中,出现由初级精母细胞经过第一次成熟 分裂所形成的次级精母细胞,细胞直径显然比初级精母细胞更小,嗜碱性增强, 年月 周雯伊 海南大学硕十学位论文 细胞膜外部轮廓隐约可辨,但核被苏木精染色极深,呈深蓝色。壶腹中可见排列 成多层的次级精母细胞。个别生精囊出现精子细胞,呈圆形,直径更小,有的出 现于壶腹腔中。开始呈现精子发育的非同步性,此称为?期晚期,即精母细胞成 熟期。个别发育的较好的下海鳗鲡鱼可达到这个时期。 第?期,精子开始出现期。 精巢小叶增多增大,呈乳白色,饱满肥厚,成熟系数达到~%。精巢组 织切片,可见精巢壶腹中精子细胞和精子聚集成丛。精子细胞呈图形小粒状,近 壶腹壁处易见,而精子呈眉月形,多处于壶腹腔中,两者易区别。虽然壶腹腔出 现精子,但其壶腹壁上尚可见有次级精母细胞和精子细胞复合存在,明显地表现 出精子发育的非同步性,此称为?期早期。 大多数注射激素诱导成熟的精巢进一步发育,壶腹腔中充满着精子细胞和精 子。壶腹壁变得非常薄,已见不到次级精母细胞存在,此称为?期晚期,精子的 发育,从?期早期的非同步性到晚期的同步性,似乎存在着发育的“追赶习现象。 第期,精子完全成熟期。 经过激素诱导达到完全成熟的雄性鳗鲡鱼,轻压其腹部可挤出白色精液;当 提起头部时个别雄鳗精液可由泄殖孔自然流出。精巢小叶呈乳白色、肥厚,组织 切片可见精巢壶腹中充满着经变态成熟的精子,并成涡旋流动状态。成熟精子头 部呈眉月形尾部只隐约可见。经“追赶之后各壶腹中精子发育十分整齐。 第?期,退化吸收期。 排精后精集萎缩,壶腹中精子大部分已排空,结缔组织增多。 .卵细胞生长发育过程和卵巢组织学分期 卵细胞发育可分成个时相。 第时相,卵原细胞时相。 卵原细胞略呈圆形或椭圆形,直径约.~..,细胞核占很大比例, 核径约.肛,核外包围一层很薄的细胞质,染成浅紫红色,核膜被苏木精染 成浅蓝色,核质呈疏网状,中央常可见一个深蓝色的大核仁。 第时相,卵母细胞单层滤泡时相。 初级卵母细胞呈多角椭圆形或成长椭圆形,细胞直径.~.,约比卵 原细胞大二、三倍,细胞质增长较快,细胞质具有颗粒结构,并呈现强的嗜碱 性 反应,被苏木情染成深紫蓝色。细胞质中常可见一个深蓝色圆形小体的卵黄 核, 故中常有多个脂肪样小泡,在有些细胞中可同时见到个梭形似卵黄核样的结 构。细胞核大且圆,核径约.。,核膜清晰,核膜内侧常见有一个呈强 嗜碱性反应、染成深蓝色的大核仁,有的细胞核中除大核之外还见有个小核 仁,核质中可见成等刷状染色体。核膜外有一层长梭型的滤泡细胞围成的、 呈嗜 周雯伊 海南大学硕士学位论文 年月 碱反应的滤泡膜,故称单层滤泡时相。 第时相,卵母细胞出现脂肪泡时相。 初级卵母细胞继续生长,呈圆形,细胞直径.~..。一个明显的 特征是细胞质中间圈开始出现一层脂肪泡而不是液泡,用法染色不着色, 用饿酸染色则见泡内周缘染成黑色圈仔细调节焦距可以见到。随着卵母细胞 进一步发育,脂肪泡向内外扩展,从一层发展成多层。细胞核梨形或圆形,核 大, 约占细胞的大部分,核径...,核膜清晰可见,核仁被染成红色,一 个切面约有个大小核仁,多数核仁靠近核膜周缘。当出现多层脂肪泡时, 在近卵膜周缘出现稀疏的液泡层,在液泡间和脂肪间出现一些被染成紫红色 的卵 黄颗粒,卵膜外出现层滤泡膜。 第?时相,卵母细胞卵黄充满时相。 早期:初级卵母细胞继续长大,细胞呈椭圆形,细胞直径约~“。核 位于中央,核径约~.,卵黄粒由外向核方向逐渐充满细胞质,脂肪泡密集 于围核区。 中期:细胞呈圆形,细胞直径约.岬。核呈椭圆形,仍位于中央, 核径.~,核膜呈波纹状,核仁小而多,多数核仁紧贴在核膜上,一个 切面约~个。卵黄粒大量充满,脂肪泡在围核区溶汇成几个大的脂肪球油 球,染色时,油球呈空泡状,经用饿酸染色,这些泡状的脂肪球呈现浓黑色, 脂肪球直径大小不等,一般~,大的可达.。液泡仍集中分布于卵 膜内缘一带。有些卵母细胞在外周细胞质中出现有细胞质聚集的半圆形颗粒 带。 卵膜出现明显的放射纹,滤泡膜仍为双层滤泡结构。 晚期:细胞大小与早期时相差不多。明显的特征:是核开始向动物极~端移 动,核轮廓十分清楚,核质均匀致密,核质周缘仍然可见数个小核仁,核周常形 成.个特大的油球,核相对一端卵黄粒比较密集,有些细胞质聚集的半圆形颗 粒带更为明显。 第时相,卵母细胞核极化时相。 卵母细胞由第?时相过渡到第时相。主要特点:是细胞核极化,核移到动 物极,核膜溶解,核样可辨,但核质已和动物极处的细胞质交融在一起,还可见 稀少几个核仁,卵母细胞处于准备第一次成熟分裂状态。有些卵母细胞在植物极 一端可见细胞质聚集的半圆形颗粒带,似向动物极流动。放射膜和滤泡膜变得很 薄三卵母细胞易脱离滤泡膜,为排卵前兆。 第?时相,卵母细胞退化时相。 未能排出的成熟卵母细胞在卵巢内即行退化吸收。退化卵细胞的特征是:卵 质液化,放射膜增厚、模糊不清,外围的滤泡细胞肥大,活跃地增殖,由一层增 周雯伊 海南大学硕士学位论文 年月 为多层,并侵入吞噬卵质。卵母细胞逐渐萎缩,在细胞残体液化的卵质甲可见断 裂溢缩的卵膜,退化卵的外周可见有微血管分布伸入,内可见明显的血球。 第三节鳗鲡人工繁殖的研究进展 鳗鲡人工繁殖的背景 世界上鳗鲡人工繁殖技术始于世纪年代。年,等首次用 注射孕妇尿的方法促使一条体重为的雄性欧洲鳗鲡精巢成熟,但同样的方 法,雌性效果却不明显。年,、等分别用脑垂体提取物诱导 欧洲鳗鲡,雄鳗完全成熟,而雌鳗仍未能成熟。年,等用促性腺激 素诱导欧洲鳗鲡,虽然雌鳗仍然没能完全成熟,但卵细胞直径增大到.。 年,年用绒毛膜促性腺激素和合成的雌激素诱导欧洲鳗鲡, 每周注射,天后雄鱼排精,雌鱼的卵细胞直径增大到.。直到 年等通过每周次重复注射鲤鱼脑垂体匀浆的方法催熟欧洲鳗鲡,个 月后雌鳗排卵【。年等用上述方法诱导欧洲鳗鲡产卵,并获得 了早期的胚胎。年等同样用上述方法获得早期胚胎。之后,就没有 关于欧洲鳗鲡人工繁殖的新报道【】。 世纪年代,日本学者开始了对日本鳗鲡人工繁殖的研究工作。 年石田等用乙烯雌酚、恩那霍林、虹尊脑垂体与维生素首次使日本鳗鲡达到 性成熟并排卵。,北海道大学等用鲑鱼脑垂体匀浆诱导日本鳗 鲡,首次获得了第一批仔鳗,存活了后全部死亡,在世界尚属首次【。 年,等做了进一步的研究,使孵化的仔鳗存活天。年,佐藤等 使孵化后的仔鳗存活时间达到天。年,等采用以鲨鱼卵冷冻干燥 粉末为日本鳗鲡育苗饲料的主要成分,获得重大突破,使人工孵化的仔鳗存 活了 天。据报道,仔鳗天体长为左右,变态为柳叶鳗;天时,体长 超过;到了天时,已经达到舢【。年日本水产研究所再次报 道人工孵化的鳗鲡最大个体体长超过,存活时间达到天。几乎实现了 鳗鲡人工繁殖这一梦想?。 我国对鳗鲡的研究起步于世纪年代。从到年,王义强等用 鲤鱼脑垂体和诱导鳗鲡性成熟并产卵,获得少量仔鳗存活天【】。 年,张长春等研究鳗鲡产后再生殖的可能性,认为鳗鲡产后不是必然死亡,并 且 可以再次达到性成熟。年,林浩然等开始进行了一些关于在诱导鳗鲡发育 过程中内分泌调控机理的研究,并取得了很大进展。 年,邓岳松研究 种不同激素对日本鳗鲡性腺发育的效果。年,柳凌等开始在鳗鲡催熟、催 产和育苗等方面又做了大量工作【。年,谢骏等进行了人工诱导池塘养 殖鳗鲡性腺成熟、产卵及胚胎和仔鱼发育的研究【。 周雯伊 海南大学硕士学位论文 年月 人工诱导鳗鲡性腺发育与排卵的研究 鳗鲡在淡水中生长时性腺是不发育的,雌鱼性腺成熟系数仅为%%,雄 鱼的仅为.%.%。因此,只有用外源激素长期诱导人工蓄养的鳗鲡,才 能使其性腺发育成熟,雌鱼成熟系数可达%%,雄鱼也可达到%。 鳗鲡催熟、催产所用的制剂主要有以下几种: 外源促性腺激素,一般分两种:一种是鱼类脑垂体匀浆,常用鲤鱼和 鲑鱼的脑垂体;另一种是促性腺激素制品,如等。外源可直接作用于 性腺使其发育,同时也正反馈调节内源的分泌和释放。由于外源可刺 激性腺产生性类固醇激素,使血液中性类固醇激素含量增加,然后性类固醇 激素 作用于脑区,使下丘脑的水平上升,促进脑垂体分泌内源,从而使内 源与外源共同作用促进性腺发育。【】【】 类似物,如等。性腺发育是脑垂体合成和分泌的作 用的结果,的功能受下丘脑合成和分泌的促性腺激素释放激素和促性 腺激素释放的抑制因子的双重调节。类似物可持续作用于脑垂体, 使其持续分泌内源,从而促使性腺发育。【】【】 类固醇激素。性类固醇激素在鱼类性腺发育成熟过程中起着重要作用, 促性腺激素促进生殖细胞发育成熟主要是通过性类固醇激素来实现的。在 日本鳗鲡 中,雌二醇.:、睾酮、甲基睾酮和雄 烯二酮对性未成熟鳗鲡的性腺发育存在正反馈调节作用,可作用于脑和 垂体水平促进的合成和分泌,诱导性腺发育。】【】【】 年,柳凌等在对日本鳗鲡排卵研究中发现,卵巢发育时间越长,催产 率就越低,这就要求在催熟过程中注射激素的剂量和间隔时间都要求最佳点 【。 研究还表明,排卵后越早进行人工受精,卵的受精率和孵化率就越高。 人工孵化仔鳗发育的研究 王义强等研究后发现,亲鱼自然产卵的时间大约在凌晨点至点分, 水温在.到.之间,盐度为~.%。孵出后第天、第天的仔鳗悬于 水表;第天,卵黄大部分吸收,消化道全通,并且有极缓慢的下沉和上升。第 天,眼球出现黑色素。第天,出现肝脏原基,静止时侧卧水底。第天能 在微水流中不断游动。仔鳗养至天死亡【。。谢刚等研究得出,鳗鲡孵化的最 适温度为??,最适盐度为~‰。。天然孵化的仔鳗生长天左右 开始变态为柳叶鳗,而人工孵化的仔鳗天才开始变态,并且变态后相对于野 生鳗鲡生长缓慢【】。 等【发现,仔鳗的消化器官刚孵化出来时出现在咽部,并从咽部开始 分化,第天肝胰脏开始出现,第天可从肝胰脏中检测到胰蛋白酶,同时口与 周雯伊 海南大学硕上学位论文 年月 消化道开始分化。孵化后第天,眼与领发育完全,卵黄囊消失,若投入轮虫, 仔鳗身体弯曲,并剧烈游动。第天,许多仔鳗的消化道中可发现轮虫,用免 疫组织化学的方法可在仔鳗身体与消化管壁中检测到轮虫蛋白,说明仔鱼消化道 可通过胞饮作用吸收蛋白质。 关于胚胎与仔鱼耗氧的研究。谢刚等【】测定了日本鳗鲡人工繁殖的胚胎 个主要发育期的耗氧量,总的变化趋势是随着胚胎发育时间的延长,耗氧量也逐 渐增加,其中原肠期和出膜期是对水中溶解氧含量特别敏感的时期。同时,测定 了早期仔鳗孵出后~生长的耗氧量。王广军等】研究了不同盐度、温度、 光照条件下日本鳗鲡初孵仔鱼的耗氧情况。结果表明:初孵幼鱼的耗氧率随盐度 的升高而下降,随温度的升高而上升,耗氧率在遮光条件下比在自然光下要低。 同时还测定了初孵仔鱼的窒息点。 关于仔鱼的开饵料。邓岳松【】研制了微型胶囊饵料,将脂溶性营养物 和水溶性营养物分别溶入适量水和鱼油中,再将水与鱼油制 成/乳剂,最后以,为囊材将乳滴包裹成微囊。对鳗鲡仔鱼的投喂 实验表明,微囊饵料加上天然饵料可使仔鳗存活,而只投喂天然饵料的仔鳗 仅存活了。 梁旭方等人】还观察了日本鳗鲡仔鱼的摄食行为,认为日本鳗鲡仔鱼的摄 食方式主要是型攻击和触碰后咬食,并对仔鱼的摄食机理进行了探讨。 第四节鳗鲡繁殖内分泌学的研究 鳗鲡和其它硬骨鱼一样,其性腺的发育和成熟是在下丘脑.脑垂体.性腺轴 ..,的控制下进行的。由于鳗鲡是降海生 殖洄游鱼类,因此无法研究其在自然发育成熟过程中轴的变化,到目前为 止关于繁殖内分泌学的研究还仅限于外源激素对其功能的影响。 欧洲鳗鲡和日本鳗鲡的脑部及脑垂体都存在两种形式的促性腺激素释放素 ,:即哺乳类 , . 和鸡 ,.。其中是调节鳗鲡生 殖活动的主要】【。年,汪小东等进一步证明了是调节鳗 鲡生殖活动的主要种类,同时说明注射外源促性腺激素可以通过影响鳗 鲡脑区的合成进而刺激脑垂体的合成来刺激性腺发育【。 在未成熟的鳗鲡中,的含量比较低。在外源促性腺激素的作用下, 随着鳗鲡性腺的发育,脑部的含量逐渐上升,而?的含量则没 有明显变化。 年,证明鳗鲡和其它硬骨鱼一样,存在两种促性腺激素: ?和.。硬骨鱼的.主要在性腺发育成熟前的鱼中表达,起促进 周雯伊 海南大学硕士学位论文 年月 性腺发育过程中所需要的性类固醇激素的生成,如和等;.主要在性 腺成熟的鱼中表达,其功能是促进性腺成熟时所需的类固醇激素的生成,如, 双羟孕酮等。 在自然状态下,外界环境因子的刺激通过感觉器官传入大脑,使下丘脑大量 释放使多巴胺等抑制物的作用减弱,引起脑垂体中的大量释放, 随着血液达到性腺,使其发育成熟。人工催产下,单独注射.,脑垂 体中的含量没有增加,只有同时注射.和多巴胺拮抗物,脑垂 体中的含量才明显增加,说明鳗鲡存在较强的多巴胺抑制作用。【】【】 下丘脑的神经内分泌细胞通过神经纤维和脑垂体的细胞直接联系,分 泌促性腺激素释放素调节脑垂体促性腺激素的合成与释放。 作用于性腺组织,刺激性类固醇激素生成,包括睾酮、雌二醇、孕酮等。在 未成熟的鳗鲡中,性类固醇激素通过正反馈作用调节下丘脑和脑垂体 的分泌活动;而在性成熟的鳗鲡中,性类固醇激素起负调节作用。 林浩然等注射雌二醇后,鳗鲡脑垂体的明显高于对照组,表明雌二醇 通过正反馈作用能促进脑垂体细胞的合成;注射促黄体素激素类似物 .利血平后,血液中的含量明显高于对照组,表明 .能促使脑垂体中的释放【。林浩然等还对鳗鲡多次埋植雄二 醇后血清中卵黄蛋白原的含量明显增加,但卵巢发育幅度很小,表明雌二醇 虽然 能促使肝细胞合成卵黄蛋白质并释放到血清中,但未能全部渗入卵母细胞内; 多 次埋植睾酮后血清中的卵黄蛋白原没有明显增加,但卵巢明显发育,表明睾酮能 促使肝细胞合成的卵黄蛋白原迅速地通过血液运送到卵巢,并渗入卵母细胞内 脑垂体分泌的促性腺激素是调控硬骨鱼类卵巢产生和诱导卵母细胞最 后成熟的主要激素,无论是在体或离体情况下,多种制备物都能诱导卵巢 的生成和排卵。林浩然等证明,,.是鳗鲡成熟卵泡产生的 。 第五节存在问题 经历了一个世纪的研究,鳗鲡人工催熟、催产技术基本解决,人工育苗方面 有了突破性的进展,人工孵化出的仔鳗最大可长到,但仍然存在很多问题。 由于不知道鳗鲡在自然情况下的产卵条件,人们只能根据推测来模拟 自然条件进行实验。因此,鳗鲡不成活的原因可能是生态条件不满足,比如:水 质、水压、水温、光照、盐度等。 天然鳗鲡天左右就开始变态成柳叶鳗,而人工孵化下的仔鳗余 天仍未变态。主要问题在于没有合适的开口饲料和无法提供充分的营养。研究表 周雯伊 海南大学硕士学位论文 年月 明,鳗鲡的开口饲料是比轮虫更小的某类生物,开始时它们是被动摄食,然后逐 渐转变为主动摄食。 精子、卵子质量也是一个关键的问题,由于尚未在海中捕捞到性腺发 育的鳗鲡,因此无法从生化成分的角度上建立 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 ,无发比对人工情况下和 天然 的不同。 为了尽快解决鳗鲡人工繁殖这一世界性难题,还需要做大量工作。继续从鳗 鲡的基础生物学和繁殖生物学等方面进行更深入的研究,更详细的了解鳗鲡 的生 物特性,解决目前催产率、受精率低,仔鳗存活时间短等一系列问题。周雯伊 海南大学硕士学位论文 年月 第二章实验部分 第一节激素诱导花鳗鲡精巢发育成熟及其精子发生的组织学研究 材料 .试验用鱼 年月日从海南文昌金山花鳗科技有限公司购买尾雄性花鳗鲡,体 重为..,全:为。每尾实验鱼在规格为××的 淡水水族箱中驯养周,驯养期间投喂,鱼正常摄食。然后开始催熟实验,水温 控制在~?之间,实验期间投喂,但实验组鱼不摄食。 .试验场所 本实验主要在海南大学海洋学院暨热带生物资源教育部重点实验室进行,在 正式课题实验之前,做预实验,效果理想。 .主要试剂和其它试验用品 /支 红霉素软膏 超纯水 。 甲醛 冰醋酸 苦味酸 酒精 二甲苯 苏木精 伊红 切片石蜡一? 中性树胶 载玻片 盖玻片 染色缸 镊子 周雯伊 海南大学硕上学位论文 年月 量筒 注射器 卷尺 定时器 上述试剂均为分析纯,试剂和用品均购置海南天地科技有限公司。 .主要仪器设备 旋转石蜡切片机 光学显微镜 显微照相设备 . .电热恒温干燥箱 电子天平 .数显恒温水浴锅 越给 灭菌锅 方法 .实验 设计 领导形象设计圆作业设计ao工艺污水处理厂设计附属工程施工组织设计清扫机器人结构设计 实验鱼随机分为对照组尾、实验组尾和实验组尾。对照 组注射生理盐水,实验组每周肌肉注射制品为粉末状,使用时用生 理盐水溶解,剂量为/?体重,处理总时间为周,实验组每周肌肉注 射,计量同上,处理时间分别为、、、周。 实验结束后,将上述几组试验用鱼解剖,称量对照组和实验组鱼的体重、 性腺重、肝脏重和消化道重,将对照组、实验组和实验组的精巢取一小块固 定于液中。 .鱼类生理盐水的配制方法 先配制种贮备液各,如下: 液 . . . .,加蒸馏水至 ;液 .,加蒸馏水至;液 .,加蒸馏水 至。 使用时,、、液各取力入蒸馏水中。 .性腺成熟系数、肝脏系数和消化道系数的计算 以下方法计算性腺系数、肝体系数、消化道系数: % 性腺系数生殖腺重/体重× %; 肝体系数肝脏重/体重× 消化道系数消化道重/体重×%。 .组织的石蜡切片及染色周雯伊 海南大学硕士学位论文 年月 ..组织包埋及石蜡切片 小块精巢组织用液固定小时后换上%醇室温保存; 梯度酒精脱水:%乙醇一%乙醇%乙醇%乙醇 : 组织透蜡:%乙醇二甲苯:一?二甲苯?二甲 苯石蜡:石蜡; 包埋:透蜡完毕的组织立即用石蜡包埋在包埋盒中,于.。冰箱冷却 后室温保存; 切片:石蜡包埋好的组织在切片机上以~.连续切片,于。烘片 过夜。 .. 染色 脱蜡:二甲苯 ?二甲苯 ; 复水:二甲苯%乙醇:%乙醇%乙醇 一%乙醇%乙醇一灭菌水; 苏木精染色 ,自来水冲洗: 分色:.%盐酸.,自来水冲洗: 梯度酒精脱水:%乙醇%醇%乙醇一% 乙醇; 伊红染色脂溶性伊红,%乙醇配制; 脱水:%乙醇; 透明:二甲苯%乙醇?二甲苯 ?二甲苯; 封片:透明完毕后立即用中性树胶封片,室温风干后观察。 以显微镜观察并拍照。 结果 .人工催熟的效果 对照组的尾雄性花鳗鲡经注射周生理盐水后,观察无尾精巢发育成熟, 组织学切片结果表明精巢发育处于或期。精巢期即精原细胞增殖前期,精 巢中的生精囊中有多个聚集成群的初级精原细胞,初级精原细胞形大,圆形 或椭 圆性,核膜染色较深,核内有一个被苏木精染成深紫色的大核仁图?。精巢 期即精原细胞增殖后期,此时精巢小叶中壶腹形成腺泡状,壶腹中有多层次级 精原细胞层,壶腹腔明显,这时期的精原细胞仍呈圆形或椭圆性,但因经过分裂, 细胞直径略小图.。 尾注射的实验组雄性花鳗鲡中,尾性腺完全成熟并排精,精 巢发育处于期,即精子完全成熟期,此时精巢中充满了变态成熟的精子图 周雯伊 海南大学硕士学位论文 年月 .;另尾性腺发育达到?期,精巢壶腹腔中几乎充满了圆形的精子细胞和成 熟的精子,亦接近成熟图。,成熟率为.%。 对照组尾鱼的平均性腺系数为.?.,平均肝体系数为.?., 平均消化道系数为..图.,而实验组尾的平均性腺系数为. ?.,平均肝体系数为.?.,平均消化道系数为.?.图.。结 果表明,实验组平均性腺系数极显著高于对照组,平均肝体系数显著高于对照 组,平均消化道系数显著低于对照组表。同时,对照组鱼的平均体重在试 验前后无明显变化,而实验组鱼的平均体重由.下降到.。 表人工诱导雄性花鳗鲡性腺发育成熟的结果 . .花鳗鲡精子发生的组织学研究 由于花鳗鲡精巢发育过程和日本鳗鲡极为相似,根据年林鼎等对日本 鳗鲡精巢发育的分期标准,将花鳗鲡精巢发育过程也分为个时期。 第期为精原细胞前增殖期。 数个初级精原细胞聚集成群,细胞体积大,呈圆形或椭圆形,细胞核较大, 核膜染色较深,核内有一个被苏木精染成深紫色的大核仁。核外包围有薄薄一层 染成淡红色的细胞质。图. 第期为精原细胞后增殖期。 次级精原细胞,仍呈圆形或椭图形,因经分裂,故细胞直径略小,核仍占很 大比例,核外包围的染成淡红色的细胞质显得更稀薄。核内除可见一个被苏木精 染成深紫蓝色的大核仁之外,在核膜周边还可见个小核仁,核内染色质常呈 疏网状。图. 第?期为精母细胞生长、成熟期。 初级精母细胞,细胞直径变小,细胞嗜碱性增强,整个细胞被苏木精染成深 周雯伊 海南大学硕士学位论文 年月 蓝色。精巢进一步发育,在壶腹的生精囊中,出现由初级精母细胞经过第一次成 熟分裂所形成的次级精母细胞,细胞直径显然比初级精母细胞更小,嗜碱性增强, 细胞膜外部轮廓隐约可辨,但核被苏木精染色极深,呈深蓝色。个别生精囊出现 精子细胞,呈圆形,直径更小,有的出现于壶腹腔中。开始呈现精子发育的非同 步性。图?, 第?期为精子开始出现期。 精子开始出现,精子细胞呈图形小粒状,近壶腹壁处易见,而精子呈眉月形, 多处于壶腹腔中,两者易区别。虽然壶腹腔出现精子,但其壶腹壁上尚可见有次 级精母细胞和精子细胞复合存在,明显地表现出精子发育的非同步性。图. 第期为精子完全成熟期。 经过激素诱导达到完全成熟的雄性鳗鲡,轻压其腹部可挤出白色精液;当提 起头部时个别雄鳗精液可由泄殖孔自然流出。组织切片可见精巢壶腹中充满着经 变态成熟的精子,并成涡旋流动状态。成熟精子头部呈眉月形尾部只隐约可见。 经“追赶’’之后各壶腹中精子发育十分整齐。图. 讨论 . 自年法国/首次报道了用孕妇尿对雄性欧洲鳗鲡的催熟成功以 来,世界各国陆续开展鳗鲡人工繁殖技术的研究,并在雄性鳗鲡人工催熟技术上 取得较大进展。雄性鳗鲡的催熟方法主要有肌肉注射、肌肉注射或腹腔埋 植雄烯二酮、肌肉注射鲤鱼脑垂体或鲑鱼脑垂体、腹腔埋植 甲基睾酮等?。从催熟效果、操作难易程度来看,肌肉注射是 一种较为成熟的、理想的催熟方法,该方法己在日本鳗鲡、欧洲鳗鲡、澳洲 鳗鲡、 美洲鳗鲡、新西兰长鳍鳗等种类上取得成功【】。本研究采用了肌肉注射 的方法第一次成功地诱导雄性花鳗鲡性腺发育成熟并排精,成熟率高达.%, 未成熟的尾性腺也发育明显达到?期,催熟效果较为理想。 由于花鳗鲡精巢的发育和日本鳗鲡十分相似,本研究根据林鼎等年对 日本鳗鲡的划分标准,将花鳗鲡精巢发育也分为个时期。 海南大学硕卜学位论文 年月 周雯伊 图版说明 图卜: 对照组雄性花鳗鲡解剖图,示其性腺及内脏器官。 图: 实验组雄性花鳗鲡解剖图,示其性腺及内脏器官。 图: 初级精原细胞。 图: 次级精原细胞。 图: 初级精母细胞。 图: 次级精母细胞和精子细胞。 图.: 精巢的不同步发育,示精子细胞和精子。 图缶: 精巢中呈漩涡流动状态的精子。 图版年月 周雯伊 坶南学?学位论文 图版周雯伊 海南人学硕’:学位论文 年月 第二节人工催熟雄性花鳗鲡精子活力的观察 材料 .试验用鱼 年日从海南文昌金山花鳗科技有限公司购买尾雄性花鳗鲡,体 重为..,全长为。。每尾实验鱼在规格为××的 淡水水族箱中驯养周,驯养期间投喂,鱼正常摄食。然后开始催熟实验,水温 控制在。之间,实验期间投喂,但实验组鱼不摄食。 .试验场所 本实验主要在海南大学海洋学院暨热带生物资源教育部重点实验室进行。 .实验试剂和其他实验用品 海水 蒸馏水 冰 精确试纸 注射器 解剖针 毛巾 胶头滴管 载玻片’ 计时器 盐度计 上述试剂为分析纯,试剂和用品均购置海南天地科技有限公司。 .主要实验仪器 光学显微镜 方法 .实验设计 参照邓岳松等方法,将精子激活比例精子活力分为个等级: 级,活动精子比例.%; 周雯伊 海南大学硕士学位论文 年月 级活动精子比例为.‰.%; 级,活动精子比例为.%.%; 级,活动精子比例为.%巧.%; 级,活动精子比例为.%.%; 级,活动精子比例为./~.%。 精子快速活动时间是指精子自激活开始至%的精子原地颤动为止的时间。 精子的寿命是指精子自激活开始至停止运动所经历的时间。 盐度梯度溶液:用自然海水、去离子水、溶液配制成盐度范围为 ‰的溶液,共设个梯度; 和. 值梯度溶液:以去离子水滴加. 溶液,调配 范围为.~.的酸碱度溶液,共设个梯度; 各离子梯度溶液:配置浓度范围从.~.%的、、和 溶液,共设个梯度。 所有实验水温范围在~?之间。 .测定方法 用小吸管吸一滴实验溶液于载玻片上,解剖针挑取少许新鲜精液置入载玻片 的液滴中,立即在显微镜下观察精子被激活后的各种运动状况,并统计所经 历的 时间,每尾鱼重复试验次,取其平均值。 结果 .不同盐度对花鳗鲡精子活力的影响 从表与图.中可以看出,花鳗鲡精子的适宜盐度范围为~,其中盐度 时,精子的激活比率最高,快速运动时间以及精子寿命最长。随着盐度降低或 升高,精子活力下降,精子的快速运动时间和寿命缩短。当盐度为和时,精 子不能被激活。而放在自然海水中,虽然有部分精子被激活,但活力很差,被 激 活的精子不能快速运动,而且寿命很短,仅为.。 表不同盐度对花鳗鲡精子活力的影响 .周雯伊 海南大学硕士学位论文 年月 .不同对花鳗鲡精子活力的影响 从表与图.中可见,当值为.时,精子激活比例最高,达到级;而当 值为.时,精子的快速运动时间。和寿命.最长。值过 高或过低都会影响精子的活力与寿命。当为.和.时,精子激活比例极低, 被激活的精子不能快速运动,仅在原地颤动,精子几乎没有活力。说明花鳗鲡 精 子的适宜范围应为.~.。 表不同对花鳗鲡精子活力的影响 ..不同金属离子、、和对花鳗鲡精子活力的影响 从表.、图.和图.中可见,种离子、、和对花鳗 鲡精子活力与寿命的影响趋势基本一致。离子浓度高或低都会抑制精子的活 力、 缩短快速运动时间与寿命。、、、溶液浓度为..叭 时,精子活力较好。但花鳗鲡精子在浓度./的溶液中仍有较高的激活 比率和较长的寿命,说明花鳗鲡对的适应能力较、、的要强。 表不同对花鳗鲡精子活力的影响 .周雯伊 海南大学硕士学位论文 年月 表不同对花鳗鲡精子活力的影响 . 表不同对花鳗鲡精子活力的影响 . 表不同对花鳗鲡精子活力的影响 . 讨论 .盐度对花鳗鲡精子活力的影响 盐度是影响鱼类精子活力的主要因子之一。一般来讲,鱼类精子在不同盐度 中的活力与其栖息繁衍环境是一致的。我们的实验结果表明,盐度对花鳗鲡精子 的激活比例活力、快速运动时间和寿命都有明显影响。花鳗鲡在盐度为~周雯伊 海南大学硕上学位论文 年月 时精子激活比率较高、快速运动时间和寿命较长,盐度过高或者过低都会抑制精 子的活力甚至使其丧失活力。由此看来,花鳗鲡精子的适应盐度应在~之间, 该盐度范围与河口海水的盐度接近,这是否意味着花鳗鲡的产卵、受精过程是在 河口附近进行的。但等【】研究认为北太平洋花鳗鲡群体的产卵场在马来西 亚群岛以东海域。谢刚等【】对日本鳗鲡研究表明日本鳗鲡精子的适宜盐度为 ~,精子寿命与海水鱼类相似,反映了日本鳗鲡在海洋中繁殖的特征。而花 鳗鲡精子的适宜盐度为,精子寿命介于淡水鱼与海水鱼之间。两者间的明 显差异是否真正反映了它们的种间差异,或是由于其他原因还有待进一步探讨。 . 对花鳗鲡精子活力的影响 鱼类精子对的适应范围较广,一般是精子在中性和偏碱的溶液中活力较 强,在酸性溶液中活力较差。尽管如此,不同鱼类对的适应能力还是存在一 定的差异。如日本鳗鲡精子的耐受范围为.~.,适宜范围为..;大口 鲇精子的耐受范围为.~.,适宜范围为.~.垆】;大黄鱼精子的耐受范围为 .~.,适宜范围为.~.【】。本实验研究表明,花鳗鲡精子在为.. 范围内都具有一定活力,其中为.~.时,精子活力最强。可知花鳗鲡精子 的耐受范围为.~.,适宜范围为.~.。由于海水与河口水通常呈碱性, 一般在.~.,淡水水域一般在.~.。因此,由此推测可能不是影响 鱼类繁殖的主要因素。 金属离子对花鳗鲡精子活力的影响 、、与是鱼类精浆的重要组成成分,也是形成精浆渗透压的 主要离子。不同离子对鱼类精子的影响不同,同种离子对精子活动的影响也 因鱼 的种类不同而有所差异。我们的实验结果表明,、、、四种金属 离子对花鳗鲡精子的影响相似。种离子浓度在.. /之间,精子的运动时 间与寿命最长,活力最好。精子在含的溶液中快速活动时间与寿命比在其他 种离子中的要长一些。但花鳗鲡精子激活比例很低,最高的仅达级,而日本鳗 鲡精子最高可达级】;花鳗鲡精子快速运动时间与寿命也明显低于日本鳗鲡 ,这可能是花鳗鲡资源匮乏的原因之一。 但从精子活力来看,花鳗鲡精子活力尚略低于日本鳗鲡等其他鱼类【引,其 原因还有待进一步研究。 年月 周雯伊 海南大学硕士学位论文 图版说明 图.: 不同盐度对花鳗鲡精子快速运动时间与寿命的影响 图.: 不同对花鳗鲡精子快速运动时间与寿命的影响 图.: 不同金属离子对花鳗鲡精子寿命的影响 图.: 不同金属离子对花鳗鲡精子快速运动时间的影响周雯伊 海南大学硕 十学位论文 年月 图版 筋 加 快速运动时间 屿 寿命?/留芝星窖 目. 盐度蛐 快速运动时间 寿命盖/垦茁 . 值 舭 高童 看意 。 羹 誊重 . . . . 溶液浓度鲈儿 击 鲈儿 /难豫?禧删,露一一】父 . . . . 溶液浓度/ /周雯伊 海南大学硕十学位论文 年月 第三节人工催熟雄性花鳗鲡精子结构的观察以及脑垂体促性腺激素 细胞和肝脏细胞超显微结构变化 材料 .试验用鱼 年月日从海南文昌金山花鳗科技有限公司购买尾雄性花鳗鲡,体 重为..,全长为。每尾实验鱼在规格为×× 淡水水族箱中驯养周,驯养期间投喂,鱼正常摄食。然后开始催熟实验,水温 控制在~之间,实验期间投喂,但实验组鱼不摄食。 .试验场所 本实验主要在海南大学海洋学院暨热带生物资源教育部重点实验室进行。 .实验试剂和其他实验用品 瑞氏.吉姆萨染液 甲醛 甘油 戊二醛 醋酸异戊酯 丙酮 锇酸 环氧丙烷 苯胺蓝 醋酸双氧铀 氏柠檬酸铅液 冰醋酸 苦味酸 酒精 二甲苯 苏木精 伊红周雯伊 海南大学硕士学位论文 年月 切片石蜡? 中性树胶 载玻片 盖玻片 注射器 上述试剂为分析纯,试剂和用品均购置海南天地科技有限公司。 .主要实验仪器 光学显微镜 显微照相设备 . 离子溅射镀膜仪 .型扫描电镜 ?型超薄切片机 .型透射电镜 方法 .实验设计 试验鱼随机分为对照组尾和实验组尾,对