【doc】急性胆管炎时肝组织ICAM—1和E—selectin mRNA的表达变化

【doc】急性胆管炎时肝组织ICAM—1和E—selectin mRNA的 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 达变化 急性胆管炎时肝组织ICAM—1和E— selectin mRNA的表达变化 314 3I那 ? 急性胆管炎时肝组织ICAM-1和 E-selectinmRNA的表达变化 ,,五 董里迅生喜朱锡光 伽.6 廊Roz 【摘要】目的观察胆道感染大鼠肝组织细胞牯附分子1(TCAM-1)和E—se[ectin的表达变化,探 讨这些牯附分子在胆道感染肝脏损害病生机理中的作用. 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 应用原位分子杂交和斑点杂交技术 观察大鼠胆道感染时ICAM-1和E—selecdnn在肝组鲠的定位及转录表达强度.结果急性胆管 炎3小时后ICAM-1和E-selectinrnRNA表达开始增强.ICAM-112小时表达最强.E—selectin6小时表达 最强=TCAM-1的阳性反应细胞主要为肝窦内皮细胞,枯否细胞和肝小叶中央静脉.E-selectin的阳性 反应细胞主要为肝窦内皮细胞和肝小叶中央静脉.胆道感染后3小时肝脏ICAM-1和E—se[ecrinn 含量开始进行性增高.ICAM-112小时达高峰,E-seleetin6小时达高峰.结论胆道感染初期IC~M-1 和E—seledin表达均明显增强,为FM与肝窦内皮细胞牯附和迁移提供了分子基础,可能在胆道感染 . 2Hu,Ig.1:Depar~tofGeneadS~rgeryofD~p/ng,2:雎加柚D/se~esCemerof &衄吣H虹,Th/rd/V~/itaryM~dicalUnnm.(7~o+tgqing400342 【Al~taet】OlaleeliveToomthechange~0fe.,~ressionc/ICAM-1andE—se[ec6nintheliver0frats withacLItt~cholangidsandtoexploreeffectsc/thead}snn~teclesanliverdarnageinerechcla ngi6s M劬edsl~ationandexpressiandTCAM-1andE-selectinmRNAintheliver0ftatswithEIcutechcl angi6s werea~tem/nedbyin"hyl~ndizafi~anddothybridi~4anRes?lbI(1exp?叽wnlls,mainly inthesusdalena~the[iaIcells.KuN{ercellsandendethelialcells0fcen?aIveinofhepaticlobule,whiteE-se— leetin0啦惝_瑚wasnotedn~inlyinthesinusoidalend~elialceilsandend~helialceils0fcentralvein0fbet~fic tobulee唧sslc砷andwanscfiption0fA~}1andE—setectinincreased3afterinfectien.Dssiond ICAM1哪Stl~gestat12ho~rsafterintectien,teE-selectinexpressedmaststl删yat6ho~rsaft盯infec— tionc0IKIuonsE,4)ressl?0fK~}1andE—selectlnenhancesc~vicmlyeadyincIdar]gi6s,thusit州des n~lecularbasf盯adhering|ohepaticsinusoida1enak~be[ialcelk~andrT1i出be柳am{orhepaticd鞠1age inrechcl~gi6s 【KeywordsjBilia~tractinfecti~nAM-1E-selectin 细胞粘附分子1(ICAM-1)和E-selectin是PMN 与微血管内皮细胞粘附过程中非常重要的粘附分 子,在中性粒细胞(p.l舯.rpnuc1ear,PMN)与微血 管内皮细胞粘附,穿越内皮迁移,参与炎症反应过程 中发挥重要作用.本实验应用原位分子杂交和斑点 杂交技术观察胆道感染时这些粘附分子的表达变 化. 作者单位:400042重庆市,第三军医大学大坪医院昔通外科(黄显 凯,朱锡光);西南医院肝胆中心【韩奉立) 材料和方法 ? 论着? 1.动物模型及分组:Wistar大鼠,雌雄不拘,体 重200,250g,自由进食进水.动物随机分为3组: (1)正常对照组.(2)假手术(SO)组:动物乙醚吸人 麻醉,无菌条件下开腹,游离胆总管,然后关腹.(3) 急性胆管炎(Ac)组:同样条件下开腹,分离胆总管, 结扎远端.近端注人0.3ml大肠杆菌液(ECdi. 0111t34,北京生物制品检定所),结扎近端胆总管,关 腹.各组分别于3.6,12,24小时取材,每个时相点6 , 一 , 只动物. 2.取材:大鼠麻醉后,开胸,经左心室一主动脉插 管灌注生理盐水约200ml,然后灌注4%多聚甲醛 l50,200ml.30分钟后取出肝组织,投入4%多聚甲 醛液置冰箱继续固定,24小时后取出肝组织,放人 2f1%蔗糖溶液(4%多聚甲醛配制)过夜,取出标本 一 70?保存备用. 3.原位分子杂交:将ICAM-1质粒(日本T.Hur1. uchi教授惠赠)和E—selectin质粒(美国 M.P.Bevi[acqua教授惠赠)转人大肠杆菌(JMl09)中 并扩增,用酚,氯仿抽提质粒并纯化,电泳鉴定.分 别加入内切酶EcoRI,}(pTlI和XbaI,XhoI将 ICAM-1和E—se1en酶切.制备线性ISqA 模板 个人简介word模板免费下载关于员工迟到处罚通告模板康奈尔office模板下载康奈尔 笔记本 模板 下载软件方案模板免费下载 .用 地高辛标记CAM一1cDNA探针和E-selectin反义 c1^探针.冰冻切片机将肝组织切30v冰冻切片, 参照文献…的方法进行原位分子杂交.显色后将切 片平铺贴于涂有铬矾明胶的载玻片上.晾干过夜,系 列乙醇脱水.二甲苯透明.DPX封片.原位杂交对照 采用以下两种方法:(1)杂交前将切片用20 RNA酶预处理3o分钟;(2)杂交液中不加核酸探针 或加地高辛标记的顺义探针. 4.RNA提取及斑点杂交:用异硫氰酸胍提取肝 组织RNA,进行斑点杂交,显影结果用计算机扫 描仪扫人,测定各杂交点的吸光度(A)值,并作相对 定量. 结果 1.肝组织ICAM-1和E—se1ectin原位杂交:正常 肝组织可见少许散在分布的ICAM-1阳性反应细胞. 呈紫蓝色颗粒,主要见于肝窦内皮细胞,枯否细胞和 肝小叶中央静脉内皮细胞也呈阳性反应.胆道感染 后3小时阳性反应增强,表现阳性细胞数量增多,细 胞内阳性颗粒逐渐增加,着色加深,胆道感染后l2 小时阳性反应最强,24小时阳性反应开始减弱.正 常肝组织E—selectin阳性反应细胞很少,胆道感染后 3小时肝窦内皮细胞可见大量紫蓝色颗粒堆积.6小 时阳性反应最强,肝小叶中央静脉内皮细胞亦呈阳 性反应,感染后l2小时肝窦内皮细胞阳性反应开始 减弱. 2.肝组织ICAM-1和E-selectin斑点杂交:胆道 感染后3小时肝脏ICAM-1mRNA含量开始增高(P <0.01),l2小时达高峰,24小时呈下降趋势.胆道 感染后3小时肝组织EselectinmRNA含量显着增高 (P<0.01),6小时达高峰,l2小时开始降低,24小 时降低更明显,见表1. 裹1肝组织ICAM-1,E—selectin 含量变化(pgDNA/gRNA) :与正常对照组比较P<0.01 讨论 在抵御病原微生物的入侵及对各种病理 性损害的防御中具有非常重要的作用.但白细胞在 组织和脏器的大量聚集和过度活化可转而对宿主产 生破坏作用,造成组织损伤.在严重感染,组织缺 血,缺氧等情况下,与微血管内皮细胞粘附性 增强,通过黄嘌呤脱氢酶一氧化酶系统,髓过氧化物 酶系统,NAKPH氧化酶系统等产生大量氧自由基, 造成血管内皮细胞损伤.并使微血管通透性增高. 在趋化因子作用下穿越血管内皮细胞迁移到 周围组织,释放活性氧,水解蛋白酶及脂类代谢产 物,造成脏器的细胞损害. 近年来研究发现对组织细胞的损害作用 呈粘附依赖性,即依赖与微血管内皮细胞的粘 附.而这种粘附的分子基础是和血管内皮细胞 表面细胞粘附分子的表达变化_3】.在多种细胞因子 或化学递质作用下,这些细胞粘附分子表达上调,使 与血管内皮细胞粘附及迁移增强,从而参与一 系列的炎症反应.细胞粘附分子ICAN-1与E—se. 1ectin是与微血管内皮细胞的粘附过程中非常 重要的两种粘附分子.研究表明E.selen在 沿血管内皮滚动及着边等初期粘附中起主要作用, 而ICAM-1则在后期与血管内皮细胞牢固粘附 和穿越内皮迁移中发挥关键性作用. 严重胆道感染是各种胆道疾患的常见并发症和 主要死亡原因之一.该症起病急,进展快,病程早期 即可发生肝功能严重受损,肝脏能量代谢障碍,并导 致以肝功能不全为先导的多器官功能衰竭乃至死 亡,病死率高达13.3%,40.9%【1,其肝损伤的机 理尚不完全清楚.本实验结果显示ICAM-1主要在 肝窦内皮细胞,肝小叶中央静脉内皮细胞,枯否细胞 316中华肝胆外科杂志1999年10月第5眷第5期 ChinJHepalob[[iaryStag.(hD1999,5jNo 等细胞表达;E-selectin主要在肝窦内皮细胞,肝小叶 中央静脉内皮细胞表达.胆道感染初期ICAM-1和 E—selectin表达均明显增强.表明胆道感染初期在 n,IL-1,LPS等刺激下肝窦内皮细胞等细胞表面 粘附分子表达明显上调,为胆道感染时与肝窦 内皮细胞粘附和迁移提供了分子基础,可能在胆道 感染肝脏损害等病生机理中具有重要意义. 参考文献 I蔡文翠,王伯云.编着实用免疫细胞化学与接酸分子杂交技术 成都:四JIl科学技术出版社.1994406.埘 2H.Nomr~iL巩LHM目cIlaT1i锄andpe帕m瑚 lsclHa—pe而Binduced[i~ex1?yinratsJsL雌Res.199151: 14(I 3金伯泉,主编细胞和分子免疫学.北京:世界图书出版公司1994 35.47 4Te0der"IF.e妇1)(印A.et日【1hese[eetin:~ularadI册 ~lecu[esFAs日BJ,1995,9:866 5R嘟nSD.B哪LCR.1hesennsandtheir【【ldCrOplnGell B.1994,6:663. 6R椰E.1raeg~in1ainIn州,1991,87:1 7I~-arMieHI.Caba—C,ch培A.Ha【Diva[e~cl?托lmthe m锄】e邮integ~in?1A_1J&llB1992,116:219. 8R—RG,Lict~LT._1]脚rs?nUHa【Pd科H眦【叫】I虹 c难ml?d?岫huraan??咖nmh,JCod[C4o1.1981,91: 459 9n幔B,HircbeAHhpr|adI~lecules kssl:eciticazkIt】d日r山l|ykme-d目d【celtsin cul恤Cell11ssueRes.1996.284:45 10黄志强.努力提高重症急性胆昔炎的治疗效果实用外科杂志. 19866:1. (收稿:1998-07.13修回:1998.12.o9) 棘颚口线虫蚴胆道移行症一例报告 王海东 棘颚口线虫(r埘lh.r舢 舯)病是由棘颚口线虫引起的人 体组织感染.临床表现为皮肤或内畦 蜘虫移行症.眼部感染或致死性嗜酸性 粒细胞增多性脑脊髓膜炎.最近我院 收治1倒棘颚口线虫蜘胆道移行症.现 报告如下. .30岁,海南临 住院号:201077.男 高^.患者因反复右上腹痛伴晨寒,发 热,巩膜黄染4年于1996年4月25日 入院.既往有胆道蛔虫史.查体:体温 36.612,脉搏78次/分,血压15/11kPa. 皮肤,巩膜轻度黄染,腹平.肝右叶上界 第6肋问.下界右锁骨中线肋下10era. 剑突下20era.质软,缘锐,表面光滑,肝 区叩击痛(+).B超报告胆总管结石, 左右肝内胆管结石并扩张.化验三大 常规正常.肝功:ALT101U,AST50U, "IBil529~l/L.D115.I~I/L,AFP ().肾功,电解质正常.人院诊断慢 性胆囊炎,肝内外胆管结石.术中所 见:肝颜色质地正常.但左外叶可触及 结石,胆囊增大壁厚.内有绿豆大小结 石11枚.胆总管扩张直径为3.0era.内 作者单位:570311海?市.海南省人民医院 盱胆外科 有结石2块.大小分别为3era×4era× 4cra及2em×3era×2era.并有小结石数 枚.左右肝管扩张.内有数枚结石.即 行胆囊切除.胆总管切开取石,T管引 流术.左肝外叶切除术.术后应用先锋 v,丁胺卡那霉素,甲硝唑预防感染.但 术后高热.每天中午达39?以上并伴寒 战.持续4天.发热寒战时急查血常规 wBC(116,13.9)×109/L.N89%, 91%.E2%,3%.连续三次查疟原虫 (一).于术后第3天.T管引流胆汁中流 出11,14mm长线状活虫7条.急送寄 生虫病研究室检查,报告棘颚口线虫. 病理报告慢性胆囊炎,肝内胆管结石 伴肝被膜下小胆管明显腺瘤样增生,炎 性细胞浸润及肝内胆管灶性增生,扩 张.肝细胞浊肿.术后2周经T管造影 后拔除T管.经噻苯哒唑1,5g2攻/ 日,连用5周,痊愈出院.半年后来院 复查.血嗜酸性粒细胞正常.血清沉淀 反应及屎沉淀反应阴性. 讨论:棘颚口线虫分布于东南亚, 以囊包形式寄生于狗,猫或野生猫科动 物的胃牯膜,受精卵经粪便排出体外. 在水中孵化出第一期幼虫.幼虫被第一 中间宿主剑水蚤吞食.潢水鱼,泥鳅, ? 病例报告? 蛙,蛇,鳗等又吞食剑水蚤.幼虫在这 些第二中问宿主的软组织中发育成为 感染的第三幼虫.鸡,鸭,蟹,鱼,鼠,猪 等动物食人这些第二中问宿主也成为 感染幼虫的携带宿主或称转续宿主. 人体感染是食入未煮熟的有感染的鸡, 鸭,鱼等而引起.由于人不是棘颚口线 虫正常宿主.因而在人体不能完成其生 活周期.未成熟的幼虫在人体腹部和 胸部脏器中游走,产生局部炎症和出 血,致病部位极为广泛.几乎遍及全身 各处.临床上表现为发热,嗜酸性白细 胞上升,荨麻疹,疼痛等.人体所见者 均为第三期幼虫,典型病例全身症状多 在一月内缓解.同时虫体转移到皮下组 织.幼虫因移走脏器不同而有不同的 症状和临床表现.文献中有在痰和屎 液中或咳嗽时出现虫体的报道.本例 正逢胆道术后T管引流.其移行于肝畦 及胆道时引起高热,寒战,而虫体随胆 汁排出体外,获取活幼虫7条而得以确 诊.药物治疗以噻苯哒唑嫂果较好.阿 苯哒唑有一定作用,海群生亦可试用. 其预防是不吃生的或未煮熟的鱼,蛙, 蛇,鸡,鸭等. (收稿:l998—04.?恪回:1998.?.10)