药学论文-苦瓜水提取物对雄性小鼠精子影响
药学论文-
作者:胡怡秀,刘秀英,马征,胡春生,张莹莹,尹进 【关键词】 苦瓜水 雄性小鼠精子
苦瓜作为一种药食兼用的草质藤木植物的果实,民间食用已有数百年历史,其药用价值越来越被人们所关注。随着研究的深入,人们发现苦瓜有较多的保健作用〔1-3〕和广阔的临床应用前景。对苦瓜的毒性研究发现,苦瓜对雄性动物具有较强的抗生育活性〔3〕。国内外学者采用不同方法对苦瓜食用部分进行了分离提取及鉴定,从苦瓜中曾分离出苷类、蛋白质、多肽、氨基酸、糖类、生物碱类、有机酸、脂类、甾类、萜类、微量元素等多种化学成份〔4〕。由于提取方法不同,导致苦瓜提取物成分各异,不同提取物的生物学作用亦不同。因此,本实验观察了苦瓜提取物对雄性小鼠精子的影响,旨在为更好地开发利用苦瓜系列产品提供科学依据。现报告如下。
1 材料与方法
11 材料
111 苦瓜水提取物
由湖南师范大学化学测试分析中心提供。
112 实验动物及饲养
清洁级昆明种小鼠,体重25,35?g(南华大学实验动物学部);实验动物生产许可证号为SCXX(湘)2004-0009,实验动物使用许可证号为
SYXK(湘)2003-0002。实验期间动物房环境温度为21,24?,湿度为56%,58%。
12 方法〔,〕
5?000, 将25只小鼠随机分为5组,每组5只。试验组设10?000,
2?500?mg/(kg?bw)3个剂量,采用40?mg(kg?bw)剂量的环磷酰胺为阳性对照,蒸馏水为阴性对照,小鼠按20?ml/(kg?bw)体积灌胃,每日1次,连续5?d,于末次灌胃后的第30?d处死动物,取两侧副睾,按文献〔5〕制备精子悬液。
121 精子计数〔6〕
将精子悬液滴入细胞计数池内,用高倍镜计数中央大格内5个中方格的精子数,结果乘以10,即为每升悬液中的精子数。
122 精子活动率〔6〕
于(20?2)?的室温下,在10?min内完成每只鼠1?000个左右精子活动力的观察,取悬液滴片,显微镜下将精子活动状态分为4级:?:运动活泼,直线运动;?:运动欠活泼,直线游动;?:原地旋转,动作迟缓;?:毫无活力,并按下式计算精子活动率:
精子活动率(%)=?+?+??+?+?+?×100
123 精子存活率采用伊红试验〔7〕。
取精子悬液和05%伊红水溶液各1滴混合,在1?min内高倍镜检查。活的精子不着色,死的精子染成淡红色或淡黄色,计算存活率。
124 精子形态学观察〔5〕
将精子悬液用4层擦镜纸过滤,吸滤液涂片,干燥后甲醇固定5?min,2%伊红染色1?h,用水轻冲、干燥。每只动物计数1?000个结构完整的精子,计算畸变精子发生率。
13 统计分析
数据进行χ2检验。
2 结果
21 苦瓜水提物对小鼠精子计数的影响
2?500,5?000,10?000?mg/(kg?bw)剂量组小鼠精子数分别为(7620?2637),(5640?1511),(6140?1110)×109/ml,对照组为(7840?4586)×109/ml。单因素方差分析显示,4组精子计数总体比较差异无统计学意义(P，005)。
22 苦瓜水提物对小鼠精子存活率的影响
2?500,5?000,10?000?mg/(kg?bw)剂量组小鼠精子生/死比例分别为0934,0794,0863,对照组为1383,χ,检验显示,3个剂量组小鼠精子生/死比例较对照组显著减低(P，0001)。
23 苦瓜水提物对小鼠精子活动度的影响(表1) 表1 苦瓜水提物对小鼠精子活动度的影响(略)
χ,检验显示,5?000,10?000?mg/(kg?bw)剂量组较对照组小鼠精子活动率显著升高(P，0001)。
24 小鼠精子形态学观察(表2) 表2 苦瓜水提取物对小鼠精子畸形发生率的影响(略)
χ,检验显示,各试验组精子畸形率与阴性对照组比较差异无统计学意义(P，005),而各试验组和阴性对照组精子畸形率显著低于环磷酰胺组(P，001)。提示苦瓜水提物对小鼠精子畸形发生率无明显影响。
3 讨 论
本实验结果表明,(1)苦瓜水提取物对精子的存活率有显著影响,3个剂量组与对照组比较分别下降了975%,1379%,1172%;(2)苦瓜水提取物能提高存活精子的活动度,5?000,10?000?mg/(kg?bw)剂量组与对照组比较,活动度有明显提高,分别较对照组提高了99%,160%;(3)苦瓜水提取物3个剂量组精子数量虽较对照组均有下降,但差异无统计学意义;(4)未见苦瓜水提取物对小鼠精子形态有明显影响。本实验观察结果与覃国芳等〔8〕、Nasseem MI等〔9〕的报道相似,精子存活率下降,理论上讲可导致生育力下降;也有不同,即存活精子活动度增强,精子计数未见明显下降,畸形数未见明显增加。这可能与苦瓜提取方式、受试对象物种不同有关。由于苦瓜水提取物成分目前还不
是十分清楚,导致精子存活率下降、存活精子活动度增加的作用机制,有待于进一步研究。
【参考文献】
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〔8〕覃国芳,李远慧,张振强,等.苦瓜果对雄性大鼠生育力的影响〔J〕.
贵阳医学院学报,1995,20(1):14.
〔9〕Naseem MI,Patil SR.Antispermatogenic and androgenic activities of Momordica(karela)in albino rats〔J〕.J Ethnopharmacol,1998,61(1):9-
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