LDL对牛精子冷冻-解冻后运动特性的影响

LDL对牛精子冷冻-解冻后运动特性的影响 . . 第 卷第 期 中国牛业科学 .年月 文章编号: ?? ? 对牛精子冷冻一解冻后运动特性的影响 崔 山,尹瑞卿,张 鹏,胡建宏 西北农林科技大学动物科技学院,陕西杨凌 摘 要:在牛冷冻精液稀释液中,卵黄中的低密度脂蛋白 对精子起主要保护作用。本研 究利用含有 、 、 和 / 配制成的稀释液制作牛细管冷冻精液 ./支 , 冷冻一解冻后,通过计算机辅助分析系统对精子运动参数进行分析。结果表明:稀释 液中含/ 时冷冻效果最好,其冻后精子活力平均可达. ,显著高于其他组 .;精子直线速度平均为 . / ,平均路径速度为 . / ,与对照组相比差 异显著 .; , 级精子可占精子总数的 。本研究为牛冷冻精液新型稀释液的开 发与利用提供了一定的依据。 关键词:低密度脂蛋白;牛冷冻精液;精子运动性能;计算机辅助分析系统 中圈分类号: . 文献标识码: 在冷冻精液的制作过程中,稀释液中添加卵黄 力,以及体外受精后的卵裂率。 可以为精子补充营养,降低异物对精子的影响,同时 国内关于对冷冻精液品质影响的研究较 少,只是在猪冷冻精液方面进行了初步的探讨 。 缓和代谢产物的危害且能够保护精子,增强精子抵 抗低温打击和抗氧化的能力,减少冷冻一解冻对精 而在牛冷冻精液上还没有比较系统的研究,特别是 子造成的损伤。 。目前,在冷冻精液的制作过程 利用计算机辅助系统分析对于牛精子运动情 况的研究几乎未见报道。本研究分别用, 、 ;, 、 中,通常选用葡萄糖、柠檬酸钠、卵黄、甘油等作为稀 释液的主要成分 。虽然稀释液中卵黄是必要成分 、/ 四种不同浓度梯度的代替稀 之一,其中对精子起保护作用的有效成分是磷脂和 释液中的卵黄,并以含有卵黄的普通稀释液作为对 低密度脂蛋白 ,, 照。在对冻后精子品质 检测 工程第三方检测合同工程防雷检测合同植筋拉拔检测方案传感器技术课后答案检测机构通用要求培训 时,使用伟力彩色精子 但是,卵黄中的某些成分能够抑制精子呼吸,降低精 质量检测系统 ~ 检测精子活力以及各种 子活率 ,且添加卵黄后严重影响冻后精子的品 运动相关参数,以评定替代卵黄后对牛冷冻精 质九。 液品质的影响,为牛冷冻精液新型稀释液的开发和 目前国外关于的研究相对较多。 牛冷冻精液品质的提高具有一定的现实意义。 等 发现了一种简单快速的提取的方法,提取 材料 关于××同志的政审材料调查表环保先进个人材料国家普通话测试材料农民专业合作社注销四查四问剖析材料 与方法 产量达到 。同时研究表明,在牛冷冻精液稀释 液中添加 %的低密度脂蛋白,不仅可完全替代蛋 。 试验材料 黄,而且还可以提高冻后精子的运动参数,从而提高 . . 的提取 收集新鲜鸡蛋,用 %的酒 牛冷冻精液的品质。 等 研究证明,用 精溶液对蛋壳消毒后,打破蛋壳并将蛋清与蛋黄分 完全替代蛋黄后与商业蛋黄添加物相比,不仅可以 离。将卵黄轻轻的在滤纸上滚动,除去卵黄系带和 维持冷冻后的精子顶体完整率、质膜完整性和体外 卵黄膜上黏附的少量蛋清,再用手术刀划破卵黄膜, 受精后囊胚发育率,而且可显著提高冻后精子的活 将卵黄收集于用冰块预处理的烧杯中。 收稿日期: ? ?基金项目:西北农区生态型奶业生产技术和奶牛性控技术研究与开发。国家“十一五”科技支撑计 划。 作者简介:崔山~ ,男,辽宁大石桥市人,在读本科生,研究方向为动物学。 ※通讯作者:胡建宏 一 ,男,博士.副教授,主要从事动物生理与调控技术方面的教学与研究工作。第 期 崔山等:对牛精子冷冻一解冻后运动特性的影响 新鲜蛋黄收集以后,依据 等 所介绍 . . 试验动物 选取陕西省种公牛站体质健康, 的方法提取 。先用等渗的溶液 . / 性欲旺盛的荷斯坦种公牛 头,每周采精 次。,将卵黄稀释 ~ 倍,并用搅拌机在 ?环境下 . . 仪器设备高速冷冻离心机 一 搅拌 ,然后离心,×,将上清液与,冻干机 ,伟力彩色精子质量检测系 沉淀物分离。为避免蛋黄中所含小颗粒物的干扰, 统,北京 ,法国 塑料细管分装 同样条件下。将二次离心后收集的上清液与 机,,低温平衡柜 ,的硫酸铵溶液混合,在 ?的环境下充分搅拌,全自动细管冷冻机 ? 后,混合离心 ,× , ? ,使溶液分层,, ,无菌操作 以沉淀卵黄蛋白。离心后,弃去沉淀物,将漂浮物用 台,恒温水浴箱,磁力搅拌机,电子天平,生物显微镜 蒸馏水透析 ,以除去溶液中的硫酸铵。待硫酸 等。 一一?? 船 ? 北色 ? ? 铵从溶液中完全去除后,再次将溶液离心 . . 稀释液的配制 用电子天平准确的称量各 ,× , ? ,所残余的漂浮即为,其纯度 种试剂 卵黄与甘油可用量筒量取 ,双蒸水将其溶 一 般可达 以上。 解定容后,再用磁力搅拌器搅拌,最后用压力 将收集好的粘稠状低密度脂蛋白均匀的铺在表 蒸汽灭菌锅灭菌? ,冷却至室温后即可 面皿上,放入冻干机中进行冻干处理,待其完全变成 使用。稀释液的成分和剂量见表 。 ? 一一??;?毛铊 如 ? 粉末状后收集,称重,装瓶,并放人低温冰箱中保存。 表 稀释液成分和剂量 稀释液 % .卵黄 .低密度脂蛋白/ 柠檬酸钠/ . 一一?? ? 色化 如 ? 果糖/ .三基/ .甘油/ . . 二蒸水/ .青霉素/万. 试验方法 离度,用表示,?/。 . . 精液的采集 利用假阴道采集法采集公牛直线性 :为精子运动曲线的直线分离 精液后,立即在 . ?下镜检,评定其活力。所采 度,用 表示,/。 集的精液为乳白色或乳黄色,元异味,活力在 . 曲线速度 / :精子头部沿其实际行走 以上方可用于试验。 曲线的运动速度,用表示。 . . 精液的稀释 按要求对检验合格的精液进直线速度 / :精子头部直线移动距离 行稀释,稀释倍数依精予密度而定。 的速度,用表示。 . . 细管冷冻精液的制作 用法国 塑料侧摆幅度:精子头部实际运动轨迹对 细管分装机 分装精液 . /支 。分装 平均路径的侧摆幅度,用表示。 完毕后置于细管支架上,于低温平衡柜中平衡 鞭打频率 :精子头部跨越其平均路径 温度在 ?~ ? 。用全 动细管冷冻机进行细 的频率,用表示。 管冷冻精液的制作,然后将细管投入液氮中保存。摆动性 :精子头部沿其实际运动轨迹 . . 精子冻后活力及运动参数的评定 取细管 的空间平均路径摆动的尺度,用表示, 冷冻精液, . ?解冻 ,然后用伟力彩色精子质 /。 量检测系统 一 测定得出各种运动相关参平均路径速度 / :精子头部沿其空问 数。主要包括精子活力、前向性 、直线性 平均轨迹的运动速度,用表示。 、曲线速度 、直线速度 、侧摆幅平均移动角度 。 :精子头部沿其运动轨迹 度 、鞭打频率 、平均路径速度 以 瞬间转折角度的绝对值之和对时间的平均值,用 及 、 、 、 四级精子的百分率等 。具体的参数 表示。 如下: 级精子百分率 :快速直线前向运动前向性 , :精子运动平均路径的直线分 的精子数占总精子数的百分率。 中国牛业科学 第 卷 级精子百分率 :慢速或无定向前向运动 能都得到显著提高。特别是精子活力和前向性等指 标,处理组均显著高于对照组 .。对 的精子数占总精子数的百分率。 级精子百分率 :非前向运动的精子数占总 于精子活力, 处理组极显著高于其他各组 .,, 和 处理组显著优于对照 精子数的百分率。 级精子百分率 % :不运动的精子数占总精子 组 .。精子平均路径速度, 、 和 % 数的百分率。 、 处理组显著优于对照组 .。在不同 . 数据分析 浓度的中,以 浓度的效果最好,冷冻一解 试验数据用平均数? 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 差表示,利用 冻后精子活力、前向性、直线性、摆动性、平均路径速 度等指标均显著优于其他处理组 .;精子. 软件,采用方差分析进行比较。 平均路径速度可达 . / , 、 级精子的数量占 结果与分析 到总精子数的 。浓度为 和 的处理 本研究选用 种不同的稀释液对牛精液进行稀 组,虽然相对于, 处理组精液品质有所下降,但冻 后精子活力大于 。而 处理组冷冻后 释和冷冻,利用伟力精液分析系统检测。经过 次 重复后,结果见表 和表 。从表 和表 可以看 精子活力明显下降。 出,用替代卵黄后,冷冻一解冻后精子运动性 表 不同稀释液对精子运动性能的影响 注:同列肩标不同小写字母表示差异显著 .;不同大写字母表示差异极显 著 .。 度 ,达到保护精子的作用。然而,卵黄中的某些 讨论 成分可抑制精子呼吸,降低精子活率 ,且添加蛋 黄后严重影响冷后精子的品质检测 。如高密度脂 . 对精子冷冻保护的作用机理 蛋白可诱导精子膜上的胆固醇外流,从而导致精子 约占卵黄固体成分的三 分之二,是一种甘 提前获能或出现一些获能样变化 。 。 油三酸脂和胆固醇内核被磷脂和蛋白外膜包围的球 通过本研究作者同样认为,结构解体后, 状分子,包含 / ~ , 的脂质和 ~ / 的蛋 白质 。研究表明 ,在精液冷冻~解冻过程 在精子细胞膜周围的脱辅基蛋白 能够形成一层保护 膜,使其免遭精子细胞内形成致死冰晶所造成的伤 中,可使卵黄在一 ?以下由于脱水而发生凝 胶化,而卵黄中其他成分不直接参与此过程。在冷 害,这种保护作用可以通 过在精子膜上的富集 加以证实。关于中脂质和脱辅基蛋白在冷冻 冻时,降温可使精子膜磷脂发生从液晶到凝胶的向 一 解冻过程中保护精子的确切机理目前还不十分清 温性相位转变,从而导致精子膜刚性增强易遭受降 温破坏 。释放到稀释液中的磷脂不仅可在 楚,需要深入研究后予以揭示。 精子膜表面形成一层保护膜,而且还可以替代精子 . 对精子运动特性的影响 膜上的一些磷脂,从而降低精子膜相位转变温 本研究采用伟力彩色精子质量检测系统第 期 崔山等:对牛精子冷冻一解冻后运动特性的影响所下降,但仍然显著高于对照组,且 、 级精子数占 一 对精子运动参数进行分析 。用 到精子总数的。而 处理组明显下降,特别 替代卵黄后,在不同浓度的处理组中,以 是直线速度甚至低于对照组,这与等 的 效果最好,精子活力、前向性、直线性、摆动性、 平均路径速度等与其他处理组之间差异均显著,与 研究结果相吻合,其原因可能与卵黄中的小颗粒物 等 和所报道的结果相似。在本 质有关 。 等。研究报道,在牛冷冻精液稀释 研究中,对照组稀释液中含有 / 卵黄,卵黄 液中添加时,蛋黄中的小颗粒物质对牛精子冻 中含 的干物质,而其中 是 。因此,这 后活率产生一定的有害作用。 等 在羊精 也就意味着一柠檬酸钠一果糖稀释液中自然 液冷冻的研究中也证实了这一论断。稀释液中添加 含有 %~/ 的,这与 的浓度比较 不同浓度的 时,精子活力及运动参数等与 等在猪上的研究结果相比,精子活力等指 相近。这同时也表明卵黄中含有一些有害物质,它 可以明显降低冷冻一解冻后的精子活率 。 标有所提高,其原因可能与物种之间的差异有关,因 稀释液中浓度为 和 的处理组,精 为猪精子相对于牛精子而言,对低温更加敏感。 子活力、平均路径速度等指标相对于 处理组有 参考文献:, 。,.. , , : ? . ,,,. ., ,:?. 李晓东,边风玉,丁可为,等.牛冻精稀释液配方的实验研究.中国奶牛, , : ?. 郭玉华,王元兴,林金曾.卵黄油作保护剂对奶牛冷冻颗粒精液活力的影响.四川畜牧兽医, , : ? .胡建宏.猪精液冷冻保存研究.陕西杨凌:西北农林科技大学动物科技学 院, . ,, ,.: . ? , , :?. ,,,. :?. ,, : ? . ,. ? . , , : ? . 。 , , , . : ,. . : ~ .? ,? , , . ?., , : ? . 书海,孙志杰.李青旺,等.不同解冻方法对奶牛冻精活力的影响 .西北农林科技大学学报, ,: ? . 陆汉希.牛冷冻精液专用稀释液冷冻效果的试验 .中国畜牧杂志, ,: ? . 刘美意.人类精液冷冻前后精子运动变化的计算机辅助分析.中华男科学, ,: ? .李 刚.猪精液冷冻保存技术研究 .陕西杨凌:西北农林科技大学动物科技学院, .李晓强,陈兴平,胡建宏,等.牛精液冷冻技术应用研究进展口 .中国牛业科学. , , ? . , .? . ,, : ? ., , ,. : 口 . , , : ? .,, . . , ,: ?., ., . . , : ?., . . 。 , : 一. ,. ? .