【doc】茵栀黄注射液中细菌内毒素检查法的研究

【doc】茵栀黄注射液中细菌内毒素检查法的研究 茵栀黄注射液中细菌内毒素检查法的研究 ? 314?解放军药学第22卷第4期茵栀黄注射液中细菌内毒素检查法 的研究蔡亚敏 文章编号:1008—9926(2006)04—0314—02中囤分类号:R965文献标 识码:A 茵栀黄注射液中细菌内毒素检查法的研究 蔡亚敏?,琚玲丽,刘腊娥,陈非凡 (中国人民解放军第l63中心医院湖南长沙410003) 摘要:目的建立茵栀黄注射液的细菌内毒素检查法.方法用不同厂家 的鲎试剂对不同厂家不同批号的茵栀黄注射液 分别进行干扰试验,考察确立茵栀黄注射液细菌内毒素检查方法.结 果将茵栀黄注射液稀释4|D倍可消除干扰作用,结果准 确可靠.结论细菌内毒素检查法用于茵栀黄注射液的内毒素检查是 可行的. 关键词:茵栀黄注射液;细菌内毒素;鲎试剂 StudyontheBacterialEndotoxinTestforYinzhihuangInjection CAIYa-Min,jvLing-Li,LIULa-E,CHENFei-Fan (The163rdCentralHospitalofPLA,Changsha410003,HunanChina) ABSTRACT:AimTostudythebacterialendotoxintestofyinzhihuanginjecti onusinglimulUSlysateagent.Meth- odsThemaximumvaliddilution(MVD)wasfoundaccordingtotheinhibition/enhancementtest.ResultsWhenthe limuluslysategsensitivity(A)Was0.125EU?rrd_.,andthemaximumvalidityWas1:40,theinterferencebetween thesampleandtherelativeTALcouldbeeliminated.ConclusionTheresuhofthebacterialendotoxinstestWas consistentwiththatofthepyrogentestwithhealthymaturerabbits. KEYWoRDS:Yinzhihuanginiection;Bacterialendotoxintest:Limuluslysateagent 茵栀黄注射液具有促进胆汁分泌,肝细胞再生, 抑制血胆红素升高,抗炎,抗变态反应,阻止肥大细 胞释放组织胺等作用.目前其热原检查仍采用家兔 法LlJ.文献至今未有该制剂细菌内毒素检查的报 道.细菌内毒素检查法具有操作方便,快捷,灵敏等 特点,现通过实验考察用细菌内毒素检查法检测茵 栀黄注射液中细菌内毒素的可行性. 1 材料 关于××同志的政审材料调查表环保先进个人材料国家普通话测试材料农民专业合作社注销四查四问剖析材料 1.1试药细菌内毒素工作 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 品(CSE)(规格: IOEU/支,厦门鲎试剂实验厂,批号20041102);鲎 试剂(TAL0.125EU?ml,,湛江安度斯生物有限公 司,批号050218;厦门鲎试剂实验厂,批号 20041049;TAL0.5EU?ml,,湛江安度斯有限公 司,批号20050122);鲎试剂(TAL0.5EU?ml,,厦 门鲎试剂实验厂,批号20041152);茵栀黄注射液 (10ml/支,江苏安格药业有限公司,批号20050509, 20050704,20o50705).细菌内毒素检查用水(BET 水2ml/支,厦门鲎试剂实验厂,批号20040821). 1.2仪器微量取液器(50,250,上海新汉计量 器具技术研究所);WH一1型旋涡混合器(上海沪西 分析仪器厂);SHW一420型三用电热恒温水浴箱 (北京长安科学仪器厂). 2方法与结果 2.1鲎试剂灵敏度复核按文献细菌内毒素检 查法进行,复核结果各批鲎试剂灵敏度测定值0. 5A<Ac<2A,灵敏度标示符合规定,可用于实验. 2.2供试品内毒素理论限值(L)的确定根据内 毒素限值公式 L=K/(f×M1【 式中K为按规定的给药途径,人用每公斤体重 参考文献: [1]邓中甲.方剂学[M].北京:中国中医药出版社,2003.41—52 [2]崔佳,鲁燕侠,仝青英,等.感咳清颗粒中黄芩苷的含量测定 [J].中国中药杂志,2003,28(5):462 [3]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京:化 [4] [5] 学工业出版社,2005.644 傅献彩,沈文霞,姚天扬.物理化学(下)[M].北京:高等教育 出版社,1995.743 王北婴.中药新药研制和申报[M].北京:中国中医药出版社, l995.197 (收稿日期:2006-05—30;修回日期:2006—07一l9) (本文编辑梁爱君) ?作者简介:蔡亚敏(1976一),男,湖南益阳人,学士,主管药师.研究方向:药物分析.Tel:(0731)84224;E—mail:caiyamin一2001@si. Ila.com 解放军药学2006年8月第22卷第4期PharmJChinPLAVol22No4A2006 每h可接受的内毒素阈剂量(注射剂K=5EU- kg,-h),M为人用每公斤体重每小时给药的最 大剂量(M=20/60=0.33ml?kg,?h,,人均体重 按60kg计算),f为安全系数,取3,计算得L=5. 0EU?ml,. 2.3供试品最大有效稀释倍数(MVD)的确定目 前市场上用于药品检验的鲎试剂其标示灵敏度A为 0.03—0.5EU?ml,,故按公式MVD=CL/A计算,当 A=0.5,0.25,0.125,0.06,0.03EU-ml时,可得相 应MVD=10,20,40,80,160倍. 2.4初筛试验 2.4.1供试品阴性对照系列(NPC)与供试品阳性 对照系列(PPC)的制备取供试品(批号 2o05O509)用BET水将其稀释成1O,2O,4o,80,160 倍的系列稀释液作为NPC系列,同时配制与NPC 系列相同浓度且每一浓度供试品均含2A内毒素的 浓度系列作为PPC系列. 2.4.2加样及反应取上述经灵敏度复核合格的 两个厂家的鲎试剂分别和NPC,PPC2个系列的供 试品反应,每一浓度重复两管,同时设阳性对照管 (PC)和阴性对照管(NC).将上述系列反应管垂直 放人(37?1)?水浴中,保温(60?2)min,观察结 果.结果见表1. 表1初筛试验结果 Tab1Resultofthescree?i?gtest 结果表明,供试品稀释20倍后不干扰实验进行. 2.5干扰试验将供试品以BET水稀释4o倍 作为供试品溶液,再用此溶液及BET水分别将细菌 内毒素工作标准品稀释成0.25,0.125,0.06,0. 0$EU?ml不同浓度的内毒素标准溶液,鲎试剂灵 敏度选取0.125EU?ml,,按《中国药典>>2000年版 细菌内毒素检查法的供试品干扰试验项进行,同一 试验均用2个批号的鲎试剂进行,结果见表2.结 果显示Es在0.5—2.0A且Et在0.5—2.0Es之间, 故认为供试品在稀释40倍后不产生干扰. 2.6样品细菌内毒素检查取3批茵枝黄注射 液(每批取5支)分别用BET水稀释至40倍,使用灵 敏度为0.125EU?ml的鲎试剂按《中国药典>>2o0o 年版细菌内毒素检查法检查,结果全部呈阴性. 表2供试品稀释液干扰实验结果 Tab2Resultsoftheinhibitionenhancementtest TAL样品细菌内毒素标准溶液(EU~TtlI1)阴性E值 EU?ml’.批号0.250.1250. 060.03对照(EU?ml) 3讨论 茵枝黄注射液为中药注射剂,现有的药品标 准…和专着规定其成人常用量最大值为20ml,经 结合临床实际用药情况,初定M=20/60=0.33ml? kg,?h,.考虑到临床安全等因素,对于中药注射 剂因其成分较复杂故细菌内毒素限值应从严考虑, 故取安全系数为3. 由初筛试验可确定供试品有效稀释倍数和可使 用的鲎试剂灵敏度范围.从供试品有效稀释浓度选 取一个浓度及相对应灵敏度的鲎试剂做干扰试验, 可减少盲目性和试剂消耗,节省时间.本实验的初 筛试验显示供试品2O倍以上稀释液对实验无干扰 作用,考虑中草药成分较复杂,干扰因素较多,从实 验可靠性计选取其4O倍稀释液用相对应灵敏度为 0.125EU?ml的鲎试剂检测本品细菌内毒素. 不同厂家鲎试剂对供试品的反应有差异,本实 验采用不同厂家两种批号的鲎试剂对不同厂家,批 号的供试品同时进行试验,试验无干扰,说明鲎试剂 用于茵枝黄注射液的内毒素检查是可行的. 参考文献: [1]浙江省卫生厅.浙江省药品标准[s].浙江:浙江科学技术出版 社,1993.DB33/WS一224—88—93 [2]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[s].北京:化 学工业出版社,2000.附录86,204 [3]黄清泉,夏振民.药品细菌内毒素检查的实验设计[J].中国药 学杂志,1997,32(2):72 [4]刘腊娥,陈诚,陈立新,等.甘露醇注射液中细菌内毒素的检 查研究[J].解放军药学,2003,19(4):296 [5]周健,尹银嘉,潘细贵.注射用血塞通细菌内毒素检测法的实 验研究[J].中国医院药学杂志,2003,23(9):535 [6]赵新先.中药注射剂学(第一版)[M].广州:广东科技出版社, 2000.629—630 (收稿日期:2005—08—10;修回日期:2005—10—20) (本文编辑狄亚敏)