HPLC法同时测定梦驼铃片中褪黑素和维生素B6的含量
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HPLC法同时测定梦驼铃片中褪黑素和维生素B6
的含量
【关键词】 褪黑素
摘要:目的 采用高效液相色谱法同时测定梦驼铃片中褪黑素和维生素B6的含量。
方法
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色谱柱为迪马公司Diamonsil ,18柱;流动相:甲醇水(体积比60?40);检测波长:278 nm。结果 在建立的色谱条件下，褪黑素和维生素B6能完全分离。褪黑素在0.066~0.33 μg，维生素B6在0.024~0.122 μg范围内与峰面积呈良好线性关系，r分别为0.999 8,0.999 9，回收率依次为102.1%、101.9%。结论 本法精密度好，结果准确可靠。
关键词:HPLC法;梦驼铃片;褪黑素;维生素B6
梦驼铃片是本公司的产品，主要由褪黑素和维生素B6等成分组成。本公司的质量
标准
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只对褪黑素进行含量测定，未对维生素B6进行含量测定。有关褪黑素与维生素B6的分析方法已有文献报道,1,2,，但同时测定两者的方法未见报道。本文采用HPLC法同时测定了梦驼铃片中褪黑素和维生素B6的含量，操作简便，精密度好，结果准确可靠，能更好地控制成品质量。
1 仪器与试剂
岛津LC-10AT泵，SPD-10A紫外检测器，浙江大学N2000工作站。梦
美国SIGMA公司出品)，维生素B6(经驼铃片为本公司产品，褪黑素对照品(
归一化法测得含量>99%)，甲醇(色谱纯)，水(二次蒸馏水)。
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2 实验方法与结果
2.1 色谱条件
迪马公司Diamonsil C18柱;流动相:甲醇水(体积比60?40);检测波长:278 nm，流速:1.0 ml/min;柱温:室温;进样量:10 μL;理论板数按褪黑素峰计算应不低于3 000，褪黑素与维生素B6的分离度应大于15。对照品与样品的色谱图见图1。
2.2 线性试验
精密称取褪黑素对照品约30 mg，维生素B6原料约10 mg，置同一量瓶中，用流动相制成分别含0.03 mg/mL及0.01 mg/mL的对照品储备液，精密量取20，4.0，6.0，8.0，10.0 mL分别置于10 mL量瓶中，用流动相定容。精密量取10 μL注入色谱仪，与进样量(m)为横坐标，峰面积(A)为纵坐标，得回归方程分别为:A褪黑素=10 973 890m+685.6 r=0.999
8A维生素B6=6 632 090m-423.5 r=0.999 9
结果表明，褪黑素与维生素B6进样量分别在0.066~0.33 μg及0.024~0.122 μg范围内与峰面积均呈良好线性关系。
2.3 供试品溶液的制备
取梦驼铃片10片，研细，精密称取0.1 g置50 mL容量瓶中，加流动相45 mL，超声处理15 min，加流动相至刻度，摇匀，静置片刻，取上清液用0.45 μm微孔滤膜过滤，得供试品溶液。
2.4 阴性对照溶液的制备与测定
按处方比例配制未加褪黑素和维生素B6的辅料，按“2.3”项制备阴
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性对照溶液，精密量取10 μL，注入色谱仪记录色谱图，结果表明，阴性对照溶液对褪黑素和维生素B6测定无干扰，见图1。1 维生素B6; 2 褪黑素
2.5 重现性试验
取同一批样品(批号为000604)5份，分别精密称定，按“2.3 ”项方法制备，分别进样测定峰面积，测得褪黑素及维生素B6峰面积RSD分别为1.1%和1.3%(n=5)。
2.6 回收试验
取已知含量的样品粉末5份(批号为:000604)，分别加入含褪黑素及维生素B6为0.9150 mg/mL和03271 mg/mL的混合对照品溶液1.0 mL(3份)及1.1 mL(2份)，按供试品溶液的制备方法处理并测定，计算回收率，结果褪黑素为102.1%，RSD=0.9%(n=5)，维生素B6平均回收率为101.9%，RSD=1.2%(n=5)。表1 褪黑素回收率测定结果(略)表2 维生素B6回收率测定结果(略)
2.7 稳定性试验
在本实验条件下，样品溶液室温放置0、2、4、8、24 h后测定，测得褪黑素和维生素B6峰面积RSD分别为0.3%、1.0%，说明样品溶液在室温放置24 h内基本稳定。
2.8 样品含量测定
取3批样品，按“2.3”项方法制备，进样分析，测得结果见表3。表
3 梦驼铃片中褪黑素和维生素B6的含量(略)
3 讨 论
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3(1 检测波长的确定
取褪黑素与维生素B6对照品溶液，分别在200~400 nm波长进行扫描，记录其吸收光谱，结果褪黑素在278 nm处有最大吸收，维生素B6在290 nm处有最大吸收，经比较上述2个测定波长，褪黑素在278 nm处有最大吸收，维生素B6有较大吸收，为了同时测定两个成分，故采用278 nm作为检测波长。
3(2 经试验供试液用流动相超声10、15、20 min的结果与超声30 min的结果没有明显差异，为节省试验时间和保证样品守全提取，采用超声15 min。
3(3 在筛选色谱柱时，曾选用不同牌子的C18柱进行试验，如:HYPERSIL BDS C18柱，SUPELCO LC-18DB C18柱，以及迪马公司Diamonsil C18柱，结果表明，迪马公司Diamonsil C18柱分离性能较好，理论板数据按褪黑素计算为3 700，褪黑素与维生素B6的分离度为5.0。
3(4 本文采用HPLC法同时测定了梦驼铃片中褪黑素和维生素B6的含量，操作简便，精密度好，结果准确可靠，能更好地控制成品质量。
参考文献:
,1,付良青，骆传环，舒融. 质谱学报，2000,21(3-4):103.
,2,国家药典委员会(中华人民共和国药典:一部,S,(北京:化学工业出版社，2005:667.
,3,顾鹏，罗鹏,罗,等. 功能因子梦驼铃(Melatonin褪黑素)的HPLC分析检测方法研究,G,.//现代仪器. 2000:138.
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