衣原体抗原
广州金域医学检验中心 文件编号: LAB-TOP-MY105
作业指导书 沙眼衣原体抗原 生效日期:2006/06/06 GUANGZHOU KINGMED 作业指导书 版本:第2版 MEDICAL LABORATORY 第1页，共3页 CENTRE
1(实验原理:
本实验基于酶联免疫实验(ELISA)原理。用抗衣原体LPS抗体包被微孔，将标本及兔抗衣原体LPS(脂多糖)抗体加入微孔中，若标本中存在LPS，则与抗体形成Ag-Ab复合物，后者会以粘附在微孔上，未结合的物质被冲洗掉。在微孔中加入辣根过氧化物酶标记的抗兔IgG抗体，其与微孔粘附的兔抗体结合，最后与加入的酶底物反应，使微孔呈兰色，之后加入的终止液使微孔呈黄色。测得的吸光值便定性的反映了标本中衣原体抗原的浓度.
2(试剂盒组成:(由Trinity Biotech公司出产)
包被板: 96T
标本处理液(红色) 1瓶(100ml)
抗体试剂(蓝色)(含兔抗LPS IgG) l瓶(14m1)
阴性质控剂(Negative Control ) 1瓶(1m1)
阳性质控剂(Positive Control ) l瓶(1m1)
酶结合物(HRP Enzyme-antibody Conjugate) l瓶(14m1)
浓缩洗涤液(绿色) l瓶(100m1)
底物A(含尿素-过氧化氢) l瓶(15.5m1)
底物B(含四甲二坤) l瓶(15.5m1)
终止液(Stop Solution) l瓶(26m1) 3(试剂储存和稳定性:
试剂应在2-8?保存，未用的包被孔应放置防潮剂密封保存。 4(标本采集、储存及拒收
标准
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:
4. 1样本类型:男性主要有尿道拭子样本、尿液样本和直肠拭子样本，眼部采集眼结膜样本。女性主要有子宫拭子样本、阴道拭子样本及眼结膜样本。婴儿主要为眼部和肺部感染，可采集眼结膜和喉咙拭子样本。不可以使用血清或者血浆检测。 4. 2取样拭子要求:一般不能使用含有棉花纤维、木质、竹质、玻璃成分或者胶水粘贴的拭子，不要使用玻璃采样管，最好使用专用的拭子及采样管。 4. 3取样:男性尿道:将拭子直接插入尿道内2-3cm。转动10秒后停留10-20秒。放入到采样管中。若采样部位有异常分泌物，应先进行淋球菌检查。 4. 4女性宫颈:先用一支大采样拭子擦去宫颈口表面黏液，将该棉签丢弃。用另一拭子插入同一位置，转动10秒后停留10-20秒后放入采样管内。注意整个采样过程避免与阴道壁接触～～若样本黏液过多或者带血应该尽量重新取样。 4. 5尿液采样要求:第一，采样前至少两小时患者没有排尿;第二，只采集最初的10-15ml尿液。尿液使用专用的采样管。
4. 6标本保存条件:采样管内提前加入1ml样本处理溶液，采集后的拭子放在带塞的采样管内置入2-8?C冰箱内可以保存1-3周。
5(操作步骤:
5(1实验前的准备:
5(1(1将试剂从冰箱中取出并平衡至室温。
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MEDICAL LABORATORY 第2页，共3页 CENTRE
5(1(2将浓缩洗涤液按l:20稀释(100ml洗涤液+2l蒸馏水)，摇匀。 5(2 标本准备:
5. 2. 1宫颈,尿道及眼结膜标本:在标本管中加入1ml的标本处理液. 5. 2. 2男性尿液标本:取4ml到试管中2000转/分离心15分钟,在尿渣中加入1ml标本处理液.
5. 2. 3摇匀阳性质控,阴性质控,立即吸取100ul到相应标记试管(含1ml标本处理液)中.
5. 2. 4将标本及阴性,阳性质控置于已预热水浴箱(95-100?)中15分钟,之后置于室温冷却10分钟.冷却后尽量将拭子内所有液体全部挤出,弃除棉签. 5(3 实验过程:
5(3(1根据需要准备包被孔，做标记，每次设阴，阳性质控各一孔。将未用的包被条立即密封并放回冰箱。
5(3(2在所有微孔中加入1OOUL的抗体剂;在标本孔中加入1OOUL的病人标本，在质控孔中分别加入1OOUL的质控剂。
5(3(3将微孔置于37+2?孵育90分钟。
5(3(4倒掉包被孔中的液体，用己稀释的洗涤液洗板5次，最后一次洗板务必完全移去包被孔中的残留液体，并避免气泡产生。
5(3(5每孔中加入100UL的酶结合物，加样时应避免气泡产生。 5(3(6置于37+2?孵育30+1分钟。
5(3(7洗板，按步骤5(3(4操作。
5(3(8每孔中加入底物100UL(先加入50UL底物B，再加入50UL底物A)。 5(3(9振荡摇匀微孔板，置于37+2?孵育30+1分钟。
5(3(10在所有微孔中加入终止液100UL终止反应，混匀微孔条，5分钟后1小时内读取吸光值。
5(3(1l用酶标仪在450nm波长比色，如果用双波长比色法，参考波长应选择600-650nm。
6(质量控制
6(1每次要做阴性,阳性质控。
6(2计算阴性质控值平均值,若阴性质控值与阴性质控值平均值之差>0.050,则应弃用此阴性质控值
6. 阴性质控应?0(200(450nm),阳性质控与阴性质控之差应?0.800(450nm). 7(结果解释:
7(1计算:
7(1(1 标本OD值=抗原孔吸光度值
7(1(2 CUTOFF值=阴性质控平均值+0.20
7(1(3 ISR值=标本OD值?CUTOFF值
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7(2结果分析:
ISR值 结果 解释
?O(75 阴性 未检测到沙眼衣原体抗原 0.75-1.00 可疑 本实验为初筛试验,建议采样后复查或
用其它试验确证(如DFA,PCR)并结合临
床进行综合判断.
?1.00 阳性 本实验为初筛试验,建议用其它试验确
证(如PCR)和结合临床进行综合考虑. 8(注意事项:
8(1为了获得较高的结果重复性，应严格按作业指导书操作:加样应准确且不能产生气泡;孵育时间、洗板时间与温度应严格控制;保证反应板的清洁，同时确保每次加试剂后充分混匀。
8(2在洗板和加样过程中不要刮到包被孔，洗涤或加试剂过程应连贯，不能有停顿。洗板时应确保每孔的洗液量一致，最后一次洗板应拍干。
8(3此试验只能起到辅助诊断的作用，对于阳性,可疑结果通常应经过其它试验确认,常用确证试验有DFA及PCR,EIA阻断试验。
9(正常参考范围:阴性
1O(检验结果报告范围:阴性，阳性(可疑结果报阴性，报告单建议与解释栏中 注明:沙眼衣原体抗原检测结果处于临界范围。)
11(已测样本的保存:
已测样本于2-8?保存2周后按医用垃圾处理。
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