抗核小体抗体的检测与临床应用进展

抗核小体抗体的检测与临床应用进展 抗核小体抗体的检测与临床应用进展 卖用医技杂志2OO7年2月第14卷第4期(旬刊)JPMT,Febmary.2007.'Co1.14.No.4(I翳uedEveryTenD?521? 神偷伤害,提高我国出生人口素质. 参考文献:' 【1]喻唯民.积极开展新生儿筛童工作【J].中华检验医学杂志, 2001,24(6):325-32"7. ,胡小波,曹小英,等.苯丙酮尿症的新生儿筛查及方法 [2】蔡宗友 比较[J].中国优生与遗传杂志,2OO2,lO(4):95-96. 【3]顾学范.遗传性代谢痛的新生儿筛童【J].中国实用儿科杂志, 2OO4,l9(1O):586-589. (收藕日期:2006-10-07l 抗核小体抗体的检测与临床应用进展 韦俐 (镇江市第一人民医院,江苏镇江212002) 【摘要]核小体是染色体的功能亚单位,是DNA与组蛋白形成的复合体,存在于细胞核中.在系统性红斑狼疮 (SLE)发生中,核小体是主要的自身抗原,抗核小体抗体是SLE的早期的指标之一.许多文献认为抗核小体抗体是诊 断SLE很好的标志.它优于抗dsDNA,敏感度高,且有很高的特异度.抗核小体抗体主要应用ELISA法检测,由于核 小体抗原纯化制备方法的不同,抗核小体抗体的检测方法也由第一代发展到第二代.随着抗原纯化技术的提高,极大 提高了抗核小体抗体对SLE的特异性,已开始应用于临床常规检测. 【关键词】核小体;自身抗体;系统性红斑狼疮 [中图分类号]RM9【文献标识码]B【文章编号】1671-.~88(2007}04-0b'21-03 核小体是染色体的功能亚单位,是DNA与组蛋白形成的 复合体,存在于细胞核中.传统的观点认为,dsDNA,抗【l8D— NA抗体复合物在狼疮肾炎发病机制中起主要作用,但是游 离,裸露的DNA在血液循环中并不存在….有人从系统性红 斑狼疮(SLE)患者外周血中检测到核小体,证实DNA是以核 小体的形式存在于外周循环中【2J,确定了外周血中游离的核 小体是细胞凋亡所产生的寡聚核小体,并认为在SLE发生 中,核小体是主要的自身抗原,并且这种核小体的免疫原性很 强,驱动辅助T细胞进行自身免疫应答,诱导产生抗核小体抗 体(anti.nucleosomeantibodies,AnuA)o有实验 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明,AnuA仅 对天然的核小体以及核小体亚结构(H2A?H2B)DNA起作用, 而并不与其中的DNA或组蛋白起反应,且AnuA的形成又先 于抗dsDNA抗体和抗组蛋白抗体的产生,因而AnuA可能是 SLE的比较早期的指标.近年来,虽然国内对AnuA研究尚 少,但其对SLE的诊断价值在国际上已成为一个热门话题, 认为AnuA是诊断SLE很好的标志,它优于抗dsDNA,敏感度 高,且有很高的特异度,AnuA主要应用跚sA法检测.近 年由于抗原纯化技术的提高,极大提高了'AnuA对SLE的特 异性,已开始应用于临床常规检测.本文将针对核小体及其 自身抗体的检测方法,分离纯化技术,临床特异性以及近期新 的研究进展进行一综述和讨论. l核小体的结构 核小体(nucleosome)是真核细胞染色质基本重复结构的 亚单位,对于细胞核中DNA的组成非常重要.在电子显微镜 下,核小体呈"串珠"状,染色质原纤维就象一条串珠,由紧密 排列的核小体组成.核小体的核心含有成对出现的四种核心 组蛋白(histone)H2A,H2B,H3和I"I4,8个带正电荷的组蛋白 分子(H2A,H2B,H3和I-I4各2个分子)形成组蛋白八聚体, 146个双螺旋DNA碱基对环绕其两周,呈扁圆形,分别由2 个H3和H4分子组成的四聚体复合物,构成核小体核心颗粒 的内部(如图1左).H2A.H2B二聚体位于核小体的表面,此 结构m占据核小体顶部位置,通过50bp一60bp的DNA链 与相邻核小体连接,Hl参与螺旋DNA的聚合和解离(如图 1B). 图1A圈1日 圈l核小体的基本结构f圈IA为核小体核心囊粒} 近年研究表明,核小体是SLE的主要自身抗原,可能与 SLE发病及病理变化直接相关.SLE患者细胞凋亡异常导致 的核小体过度释放,可能是本病免疫异常的主要诱发环节之 一 .核小体及其特异性自身抗体除了在致病机制方面成为近 年来SLE研究的最活跃的领域,抗核小体抗体在临床中对 SLE诊断和治疗的作用也得到重视.临床研究提示,抗核小 体抗体与SLE疾病活动性及狼疮性肾炎的发生明显相关,可 能是SLE的特异性抗体之一. 2A哪AI抗核小体抗体.以下简称A哪A)的临床意义 2.1AnuA的定义与回顾AnuA被定义为与组织蛋白暴露 在染色质的部分发生反应的抗体,在染色质内找到的DNA结 构,或者一个由天然组织蛋白?DNA复合物构成的表位,特别 要排除的是抗体与非组织蛋白的反应和隐藏在染色质内的组 织蛋白表位的反应,以及与DNA结构如-A,C以及z构型的 反应.这些在染色质中均不存在,因此,并不是所有组织蛋白 和DNA活性的抗体都具有抗.染色质活性.染色质作为 ELISA中的抗原最有用的构型是脱?H1染色质和核小体核心 粒子.在这两种情况下,天然染色质通过微球菌核酸酶消化 溶解.HI和非组织蛋白被除去.再用0.5M牛理盐水在中性 ? 522?2007年2月第l4卷第4期(旬 刊)JPMT.February.2007,Vo1.14,No.4(IssuedEveryTen pH条件下而得染色质.核小体核心粒子由包裹在天然组织 蛋白(H2A,H2B,H3,H4)八聚体DNA组成.多元核小体核 心粒子,DNA链未被核酸酶切断时,叫做Hl?修饰染色质.在 过去的几年里已经开始重新关注AnuA.A删A是首批被发现 的自身抗体之一,因为它们是组成引起红斑狼疮的细胞排列 构造的大多数抗体.许多研究资料表明了这种抗体辅助 诊断系统性红斑狼疮和药物引起的狼疮(DIL)的临床应用, 并且从某种意义上来说,A肌A的定量曾是在临床实验室所进 行的最普遍的免疫学实验之一.AnuA在过去的IO年里曾有 过许多的名字:红斑狼疮因子,抗核小体,抗DNP以及抗一 (H2A.H2B.DNA),这些自身抗体可在近乎75%的系统性红 斑狼疮患者身上找到,并且有达100%的患者是由药物引起 的,它们也可在20%,50%的I型自身免疫型肝炎患者身上 找到. 2.2An?A的临床意义在80%的MRL/IprDIL小鼠中可产 生核小体特异性抗体,该自身抗体产生早,先于其他抗核抗 体,与肾小球肾炎有关.SLE患者多克隆核小体特异性自身 抗体的抗原反应与鼠类SLE模型表现相似,核小体在SLE中 作为主要自身抗原近年已得到证实.靶器官中免疫复合物的 沉积和炎性介质(包括补体)的大量活化是引起SLE全身性 组织炎症损伤的基本机制之一.核小体会成为多克隆B细 胞活化剂,这可能与SLE疾病的起始阶段有关;但更重要的 是,核小体是SLE中致病性T辅助细胞识别的自身抗原,不 仅引起同源B细胞产生核小体特异性自身抗体,而且引起抗 DNA抗体和抗组蛋白抗体的形成.文献报道,AnllA在抗ds- DNA碉性的sl童患者中有很高的阳性率(达60%, 65%)',因lIl}们对SLE患者更具有诊断价值.最近有 涯据表明,除了传统的致病性抗双链DNA抗体及其抗原抗体 复合物外,核小体和组蛋白成分的自身抗体及其抗原抗体复 合物,在SLE钧发病机制中起关键作用,尤其是在DIL肾炎 致病机制上意义重大L.核小体的组蛋白成分(氨基末端带 强阳性电荷)可促进免疫复合物与肾小球基底膜阴离子位点 的结合,包括既作为植入抗原使原位免疫复合物得以形成,也 可使含有核小体一核小体特异性抗体的循环免疫复合物得以 沉积.在以上两种情况下,均可使肾小球基底膜的通透性增 加,且产生炎性免疫应答反应.钟清等0研究表明,LN组患 者AnuA阳性率明显高于无肾炎组,AnuA对LN的诊断和监 测具有重要意义.此外,苏茵等也发现AnuA与患者的皮 疹,脱发,ESR增快,CRP增高,补体降低呈显着相关性,其滴 度高低也与SLE疾病活动指数评分呈明显正相关. 2.3AnuA的临床特异性和敏感性有两项关于AnuA重要 评论表明这种抗体对SLE和DIL具有敏感性和特异性,并且 AnuA的存在通常在SLE与肾小球肾炎患者中相联系AnuA 较抗DNA具有更高的敏感性.统计资料表明如果阴阳性分 割点升高,能使抗核小体对狼疮更加敏感.近年来,由于核小 体抗原纯化技术的改进,提高了AnuA对SLE患者的诊断特 异性.研究结果表明,应用ELISA方法检测AnuA在SLE患 者中具有很高的敏感性和特异性.国外报道'J,对sLE患 者进行AnllA检测,起敏感性和特异性分别为56.O%,64. 2%和97.O%,98.8%,国内苏茵等提出,AnuA可出现于 SLE疾病进程的各个时期,对SLE的敏感性高(69.9%),特 异性强(97.9%),可能是SLE的标记抗体之一,但许苛等DI] 报道测定敏感性偏低(55.8%),特异性偏低(95.3%).考虑 与A删A的来源不同,检测人群和疾病活动度不同以及所用 实际不同有关,但是与ds-DNA抗体,抗Sm抗体比较,敏感性 均有了较大的提高,且有良好的特异性,可用于SLE的诊 断],同时,多种商品化检测试剂盒的出现,使该自身抗体应 用于临床SLE等结缔组织病的诊断和鉴别诊断成为可能. 2.4AnuA的检测技术 2.4.1检测AnuA的技术许多不同的技术已被用于检测 An,除了LE细胞试验以外,还有染色质包被的串珠乳胶凝 集试验?,以及免疫沉淀?(用天然组织蛋白重组酸萃取的 组织部分?)和ELISA法都已被使用.早期的研究用"脱氧 核苷蛋白"作抗原【l研制出一种孵育在1M生理盐水中的 染色质中的预备品,但未得到明确鉴定.后期报道已有更好 的方法来鉴定该预备品,并能 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 凝胶电泳后的蛋白质和 DNA的组成?.染色质的类型分析以及阴,阳性判断对于 辅助诊断SLE患者而获取高敏感性和特异性是非常重要的. 第一种研究用于以变性的H2A和H2B作为抗原进行DNA再 造,由血清结合上组织蛋白的变性区域,即天然染色质非暴露 部分?;第二种研究用于整条染色质作为抗原,剩余的Scl一 7O蛋白引起抗Scl-70,血清在此情况下产生弱阳性;第三 种研究用于一个阴,阳性的弱的(低的)判断(硬皮患者血清 呈现弱阳性). 2.4.2第一代与第二代核小体检测技术的比较通过对 SLE组(96例),患者对照组(73例),正常对照组(47例)进 行AnuA和抗dsDNA抗体的检测,采用由德国EUROIMMUN 公司生产的试剂盒和美国Coda公司生产的全自动酶标分析 仪检测[1.结果表明,.EUROIMMUN推出的第二代抗核小体 抗体EIASA检测试剂与第一代比较敏感度差异不大,但特异 性却有了明显提高早期因核小体抗原纯化制备方法存在技 术上的问题,纯化的核小体抗原常含有Hl,Scl-70(DNA拓扑 异构酶I,一种DNA结合蛋白),残留的染色质DNA和其他非 组蛋白等蛋白成分,导致多种结缔组织病患者血清与核小体 抗原交叉反应,尤其是在10%,68%的硬皮病患者中也可检 测出AnuA,使得该抗体作为SLE特异性抗体的临床应用价 值得到了很大的限制;而第二代AnuAELISA试剂在抗原的 制备上有了很大的改进,抗原分离纯化技术提高,纯化的核小 体抗原制品只含核小体单体,不含以上提到的DNA和组蛋白 等杂质成分,可排除硬皮病患者血清假阳性反应,这样就使得 AnuA对SLE的诊断价值得到了充分的发挥,极大提高了An— uA对SLE的特异性.目前已开始应用于临床常规检测. 3Anna的研究新进展以及注意' 目前,国内已有少数医院开展了AnuA的检测,也已发表 了数篇相关报道.有文献报道,以核小体多肽特异性抗原治 疗鼠狼疮模型的研究发现,核小体多肽特异性抗原可以抑制 TH细胞和B细胞的激活,从而为研究SLE的发病机制治疗 带来了新的曙光J.但需要指出的是:AnuA的检测对SLE 的诊断有重要意义,不同的核小体来源,不同的检测人群和疾 病活动度,以及检测试剂,方法等均会带来结果差异.该抗体 与抗Sm抗体不同,并非是SLE标记抗体.虽然已发现AnuA 对诊断SLE的敏感性和特异性比抗dsDNA抗体高,但仍有不 完全一致的结果.我国的情况如何还应进行大样本,多中心 检测从而得到更合理,更准确的结论.SLE的诊断不能仅凭 实用医技杂志2007年2月第14卷第4期(旬刊)JPMT.February.2007,Vo1.14:N0.4(IssuedEveryTenDays)?523? 某一种抗体阳性与否加以肯定或否定,在建立该抗体检测前 首先要明确其临床意义,其次,要避免假阳性或假阴性结果, 如同其他自身抗体的检测一样,临床医师在诊治工作中必须 密切结合患者的临床资料,正确看待检测结果,切勿以实验室 检查代替一切. 参考文献: [1]VanBmggenMC,I(d"snleI~C,BerdenJH.Autoinununityagainstand lupusnephritis[J].AnnalMedIntemem,1996,147(7):485. 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[关键词】医院图书馆;医务人员;服务 [中图分类号】砒97.32[文献标识码】B【文章编号】,1671-f,098{2007)04-0523.02 我院是广东省江门市建设规模最大的集医疗,急救,教 学,科研,预防,保健,康复于一体的三级甲等中医教学医院, 拥有一批临床经验丰富的技术骨干和学科带头人.院图书馆 针对各种读者对象和医疗,教学,科研任务,采取了多项服务 措施,在引导和促进临床科研工作等方面进行了有益的尝试. 1转变服务方式.实行主动服务 我国医院图书馆的工作长期以来一直以被动服务为主, 足不出户地坐等读者.我馆过去也只提供借还图书,代读者 检索等被动单一的服务.随着时代的迅猛发展和科技的进 步,在信息量越来越庞大,信息发布形式越来越趋于多元化的 今天,图书馆的这种被动服务显然已不能满足读者的需求,因 而更谈不上给一线医务人员的优良服务.因此要求新时期的 医院图书馆转变服务方式,变被动服务为主动服务,我馆近年 来通过馆员的主动服务,提高了信息服务水平,密切了与医, 教,研的联系. 2医院图书馆为医疗,教学和科研服务的方法 2.1做好信息收集整理和传递工作国内外最新医疗信息 资料对提高医务人员的医疗水平,科研人员的科研水平和更 新教学人员的知识结构,将起到非常重要的作用.因此,做好 信息收集整理和传递工作,是医院图书馆的重要职责.我院 图书馆的工作人员深入到临床,教学和科研一线,在订购期 刊,书籍和有关其他文献资料时,充分了解各类读者的信息需