尼美舒利对舌鳞癌Tca8113细胞前列腺素E2释放和生存素表达的影响

尼美舒利对舌鳞癌Tca8113细胞前列腺素E2释放和生存素表达的影响 尼美舒利对舌鳞癌Tca8113细胞前列腺素 E2释放和生存素表达的影响 ? 50?中国药物与l床2008年1月第8卷第1期ChineseRemedies&— Clinics,January— 2008Nd.8,No.1 血黏度和红细胞压积显着降低,差异有统计学意义(P<0.01), 大剂量山楂叶总黄酮可使模型大鼠血浆黏度明显降低(P< 0.05). 3讨论 中医辨证为血瘀证者其临床表现主要为疼痛,肿块,瘀 斑,气虚等证候,病因多由于寒邪,情志,体虚等因素引起的血 行不畅,脉胳不通,心胸痹阻等所致,其与心脑血管循环障碍 关系密切,是引发脑缺血缺氧,脑梗死,脑卒中,心肌缺血,心 肌梗死和微循环障碍的重要诱因.近年来研究表明,血瘀证常 有”浓”,”黏”,”凝”,”聚”的血液流变性异常变化,故通过测定 血液流变性指标的改变是判定血瘀证的主要客观诊断指标之 一[5] .本实验所用急性血瘀证动物模型是依据中医药理论关 于血瘀证的”暴怒”,”寒邪”病因,病机所设计.通过给大鼠皮 下注射大剂量肾上腺素使其激动血管d受体占优,而与B受 体结合扩血管效应相对降低.结果使血管收缩,外周阻力增 加.收缩压和舒张压均明显升高,同时促进糖原及脂肪分解, 使血糖升高,血中游离脂肪酸,乳酸增加,机体代谢增强,组织 耗氧量显着增加来模拟暴怒时的机体状态,再施以冰水浸泡 模拟寒邪侵袭.二者综合作用引发模型组大鼠的全血高,低切 黏度值和血浆黏度值的显着升高,表明本实验方法可迅速复 制出血液流变性呈”浓”,”黏”,”凝”,”聚”状态的急性血瘀证 模型.本文结果表明,大,中,小剂量的山楂叶总黄酮均有能降 低模型组大鼠全血比黏度,血浆黏度,以及红细胞压积的活血 化瘀作用. 参考文献 1纪影实.张晓丹.李红.等.山楂叶总黄酮对脑缺血的保护作用. 吉林大学学报,2005,31(6):879—882 2英董杰,张乃先.张明垒.大果山楂叶黄酮成分研究.沈阳药科大 学学报.1996.13(1):31-31 3陈奇.中药药理实验方法学.北京:人民卫生出版社.1996. 4徐叔云.药理实验方法学.3版E京:人民卫生出版社.2002. 5潘毓宁,潘洪平.吴隐雄,等.八珍汤对老龄大鼠血液流变学改 善作用的研究.广西医学,1997,19(4):581. (收稿日期:2007—08—21) 尼美舒利对舌鳞癌Tca8113细胞 前列腺素E2释放和生存素表达的影响 赵玮武云霞 大量研究已表明,环氧化酶一2(cycl00xygenase2,COX一2) 在大多数正常组织中不表达,而在大多数人类肿瘤中过表 达.与多种肿瘤的发生发展密切相关….本实验通过研究选择 性COX一2抑制剂尼美舒利(Nimesulide,NIM)与人舌鳞癌 Tca8113细胞前列腺素E:(PGE)和生存素(survivin)表达间 的关系,探讨NIM对人舌鳞癌细胞生物学行为影响的可能机 制.为Nimesulide临床应用提供必要的理论依据. 1 材料 关于××同志的政审材料调查表环保先进个人材料国家普通话测试材料农民专业合作社注销四查四问剖析材料 与方法 1.1材料 人舌鳞癌Tea8113细胞株,购自中国科学院上海生命科 学研究院.主要试剂:RPMI一1640培养基(Gibco公司), 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 胎牛血清(中国医学科学院生物 工程 路基工程安全技术交底工程项目施工成本控制工程量增项单年度零星工程技术标正投影法基本原理 研究所灏洋生物公司), NIM(Sigma公司),二甲基亚砜(DMSO)(Sigma公司),兔抗人 survivin多克隆抗体(SantaCruz公司).SP免疫组织化学试剂 盒(北京中山生物技术有限公司),PGE放射免疫试剂盒(苏 州大学医学院血栓室). 1.2方法 1.2.1细胞培养:Tca8113细胞培养于含有10%胎牛血清及 双链霉素的RPMI一1640培养基中,置于37?5%CO:培养 箱内培养,0.25%胰蛋白酶}肖化传代.正常生长状态下的 作者单位:030001太原.山西医科大学第一医院口腔科 Tca8113细胞呈圆形,分裂期细胞呈多边形,单层贴壁生长. 细胞以1×1OL密度接种于12孔板上.且孔内已预置净化处 理后的玻片,24h后换培养液(不含血清及双抗),NIM干预 组分别加入NIM终浓度为25.50,100,200I~mol/L的RPMI一 1640培养基.对照组为仅含等量体积分数0.4%有机溶剂 DMSO的RPMI一1640培养基.继续培养后,分别在24,48,72 h收集细胞培养上清液,存于一20?备用.收集上清液的同时 收集孔内的玻片,经4%多聚甲醛固定20min,自然干燥,.20 ?冰箱内保存待用.各组均设3个复孔. 1.2.2Survivin免疫组织化学法:按试剂 说明书 房屋状态说明书下载罗氏说明书下载焊机说明书下载罗氏说明书下载GGD说明书下载 步骤进行免 疫组织化学染色.方法简述如下:3%HO去离子水消除内源 性过氧化物酶活性.胃蛋白酶抗原修复,山羊血清封闭非特 异性抗体,加入相应的survivin多克隆抗体,浓度为1:400,4 ?过夜,洗涤后加入生物素化二抗,37?孵育15rain.洗涤后 加辣根过氧化物酶标记链霉卵白素,37?孵育15rain.充分 洗涤后二氨基联苯胺(DAB)显色,常规酒精梯度脱水,二甲 苯透明,中性树胶封片.光镜下观察染色结果:survivin表达 阳性结果为细胞的胞质,胞核均有棕黄色阳性颗粒,计算机 图像分析采用HPIAS一1000高清晰度彩色病理图文分析系统 对染色结果进行定量分析,每个标本看1张切片.每张切片 选取阳性颗粒清晰,无非特异性背景着色,并能反映该切片 染色强度的部位为代表性部位,取4个视野在高倍镜(200x) 中国药物与临床2008年1月第8卷第1期 ChineseRemedies&Clinics,January2008,Vo1.8,No.1 下测量阳性细胞的平均吸光度值(A值),取其均值为该标本 的测量结果,用此间接反映survivin的表达量. 1.2_3PGE的检测:放射免疫法(RIA):细胞上清液提取后, 送至山西医科大学第一医院同位素科检测,操作严格按PGE: 放射免疫试剂盒说明书进行. l-3统计学处理 使用GraphpadPrism4.0统计分析软件包处理,比较采 用方差分析(ANOVA)及成组比较配对t检验.P<0.05为差异 有统计学意义.相关系数采用线性相关分析. 2结果 2.1尼美舒利对细胞PGE:释放的影响:RIA法检测显示,实 验组和对照组细胞培养上清液中PGE:基础表达量基本相 同,加入尼美舒利后,上清液中PGE水平下降,随着药物浓 度及干预时间的延长,PGE水平下降更为明显,呈浓度和时 间依赖性.结果见表1. 表lNIM对细胞培养上清液中PGE含量的影响(蜘) 注:与对照组比较P<O.05;与作用24h比较P<O.05 2.2NIM对Tca8ll3细胞Survivin蛋白表达的影响:NIM对 Survivin表达的影响与对PGE表达的影响相类似.Survivin 阳性细胞为胞质,胞核均有棕黄色阳性颗粒.不同浓度NIM 干预后.Survivin蛋白胞质,胞核阳性染色减低,呈浓度时间 依赖性.从显色反应的平均A值分析结果看,NIM处理组细 胞较对照组细胞survivin的表达显着下调(P<0.05).见表2. 表2NIM对Tca8113细胞Survivin表达的影响(;) 注:与对照组比较P<O.05;与作用24h比较P<O.05 2|3PGE2与survivinA值相关性分析:PGE2含量与survivin A值相关系数为0.95(P<0.01),可以认为二者高度相关. 3讨论 随着环境污染的加重和生活习惯的改变,肿瘤发病率逐 年增高,全球范围内口腔癌占所有新发癌症病例的4%,7%, 其中80%为口腔鳞状细胞癌.以我国人口估算,每年有2万, 5万人患病.近年来肿瘤血管生成和细胞凋亡逐渐成为肿瘤 研究领域中的热点内容,人们力求通过它们找到肿瘤治疗的 突破点. COX又称前列腺素内过氧化物酶,是将花生四烯酸代谢 为前列腺素类(PGs)过程中的一个重要限速酶.哺乳动物的 ? 5l? 环氧化酶至少有两种异构形式:COX一1和COX一2.COX一2为 诱导型,在细胞受到各种刺激时,如组织损伤,炎症时表达增 强.近十年来大量研究表明,肿瘤组织中COX一2表达上调是 一 种普遍现象[2].COX一2有可能通过其合成的产物PGs发挥 作用.其中PGE:是PGs中最主要的生物活性成分之一.PGE: 能够诱导各种血管生长因子特别是血管内皮生长因子 (VEGF)的表达从而参与血管形成. Survivin是凋亡蛋白抑制因子(IAP)家族的新成员,于 1997年由耶鲁大学的Ambrosini等首先发现并鉴定.类似 于COX一2,survivin在多种恶性肿瘤中表达稳定上调,而在正 常成人分化成熟的组织中不表达或部分低表达.这种特性使 survivin在肿瘤基因诊断,治疗等方面具有较大的研究价值, 从而受到广大学者关注.据文献[4]报道,survivin表达受到多 种细胞因子的调节,其中包括VEGF,它可显着上调血管内皮 细胞survivin表达,从而保护血管内皮细胞免于凋亡.用有丝 分裂原包括VEGF和bFGF刺激静止的内皮细胞(EC),可诱 导survivin的表达上调l6倍. 本研究选择NIM作为干预药物.NIM属甲磺酰胺类化合 物.对COX一2有选择性抑制作用.可明显减少和预防胰腺, 舌癌等发生的危险性_5..而家族性腺瘤性息肉病患者长期服 用小剂量NSAIDs后,结肠息肉数量和大小均明显降低_7’. 本研究结果表明:NIM处理Tea8113细胞后,细胞培养 上清液中PGE:含量下降,随着时间延长和药物浓度加大, PGE:含量下降更为显着,NIM处理Tca8113细胞24h后,细 胞内Survivn蛋白表达即已下降,且Survivn和PGE:的变化 趋势一致.两者存在高度的相关性.提示我们COX一2可能参 与了Tea8113细胞survivn的表达,而PGE:则可能在该过程 中起着重要的介导作用. 恶性肿瘤的侵袭能力在生物学行为上可以体现在肿瘤 细胞的增殖能力,肿瘤新生血管的发生等多个方面,这几方面 之间可能存在着密切的相互关系.本研究提示,特异性的 COX一2抑制剂能明显减少细胞培养上清液中PGE含量和 survivn蛋白在细胞中的表达,并且survivin和PGE:的表达变 化存在一定程度的相关性.而survivin和PGE蛋白作为反映 肿瘤生物学行为的客观参考指标,与肿瘤细胞的增殖,肿瘤 新生血管的发生发展密切相关. 综上所述,选择性COX一2抑制剂NIM对舌鳞癌细胞有 抑制作用.随着其抑制作用的进一步阐明,选择性COX一2抑 制剂有望成为口腔鳞癌的辅助治疗手段之一. 参考文献 1蒋伟,张成.VEGF和Survivin蛋白表达与鼻咽癌相关性研究. 医学综述,2007,13(9):656—658. 2CostaC,SnaresR,Reis—FilhoJS,eta1.Cyclo-oxygenase2expres— sionisassociatedwithangiogenesisandlymphnodemet~ta- sisinhumanbreastcancel’.JC1inPmhd,2002,55:429--434. 3AdidaC,CmttyPL,McGrathJ,eta1.Developmentallyregulated expressionofthenovelcanceranti—apoptosisgenesurvivinin humallandmOUSedifferentiation.AmJP~hol,1998,152(1):43- ? 52?中国药物与临床2008年1月第8卷第1期ChineseRemedies&Clinics,January墨 孕9. 4CharalambousA,OksM,NchindaG,eta1.Dendriticcelltarget- ingofsurvivinproteininaxenogeneicformelicitsstrongCD4T cellimmunitytomousesurviving.Jlmmunol,2006,177:8410- 8421. 5陈国胜,欧希龙,孙为豪.环氧化酶一2抑制剂治疗胰腺癌机制 研究进展.国外医学肿瘤学分册,2005,32(8):618—621. 6KubatkaP.KalickaK,ChamilovaM,eta1.Nimesulideandmela— tonininmammarycarcinogenesispreventioninfemaleSprague Dawleyrats.Neoplasma,2002,49(4):255. 7TranJ,MasterZ,YuJL,eta1.Aroleforsurvivininchemore- sistanceofendothelialcellsmediatedbyVEGF.ProeNedlA_ cadSciUSA.20o2.99:4349--4354. 8r~,ysanUSAK,MerchantFH,ZhuL,eta1.COX-2.dependent stabilizationofsurvivininnon—smallcelllungcancer.FASEBJ. 2004,18:206—208. (收稿日期:2007一o6-27) 黄芪对广防己急性肾毒性的防治研究 赵怡蕊李荣山刘光珍李志宏陈小清 自从1993年比利时学者报道患者在服用含广防己和厚 朴的中草药减肥治疗后,出现进行性肾损害,后发现是含马 兜铃酸成分所致肾毒性,将此定义为”马兜铃酸肾病”(aristo— lochicacid,nephropathy,AAN)….本项研究旨在探讨中医药 理论中配伍原则中有”相生”,”相佐”,”相使”,”相杀”,”相 畏”等配伍作用,中医理论博大精深,中药之间相互配伍有 君,臣,佐,使不同作用,配伍可使各药物之间正作用相互叠 加,毒副作用相互减轻等,从而达到治疗的目的.黄芪防己汤 是临床利尿消肿常用方剂,且临床效果明显,自AAN提出 后,限制了广防己的临床应用,与将观察黄芪与广防己配伍 后,广防己毒性的改变状况 报告 软件系统测试报告下载sgs报告如何下载关于路面塌陷情况报告535n,sgs报告怎么下载竣工报告下载 如下. 1材料与方法. 1.1实验动物:健康Wistar大鼠,体重180,200g,雌性,由山 西省中医药研究院的动物实验室提供,正常,自由饮食. 1.2药品的制备:广防己采自广东肇庆,由山西省药品检验 所生药鉴定专家鉴定为广防己的根,取广防己生药1000g, 加水3000ml,浸泡1h,第1次煎煮2h,第2,3次各煎1h, 合并煎液,用3层纱布过滤,浓缩至稠膏状,干燥4d,取出冷 却后称重,得干膏量229.8g,粉碎成细粉,置干燥器?L中备 用.黄芪采自山西,由山西省药品检验所生药鉴定专家鉴定 为豆科植物黄芪的干燥根.黄芪与广防己配伍比例分别为5: 5,5:4,5:2,合煎后广防己量与单味广防己量相同.取黄芪 500g,广防己500g混煎;黄芪500g,广防己40Og混煎;黄 芪500g,广防己200g混煎,分别得干膏量169.3,152.0, 136.5g,均分别粉成细粉备用. 1.3动物给药方法:将实验动物随机分为正常对照组,广防己 模型组,黄芪防己组(按比例分3组)分别为复方A组(5-4),复 方B组(5:2),复方c组(5:5),共分为5组,每组10只动物,给 药组将药粉加水配成2.5ml/100g(相当于30g?kg-l?d),每日 给动物灌胃,每日2次(上午9:00,下午16:0o),对照组给予 相同剂量的自来水灌胃2次.实验共进行7d,实验结束后测 定尿蛋白,尿糖,尿潜血,实验结束时留尿液,处死大鼠,取血 及肾组织,肾组织用10%甲醛固定,经脱水,透明,石蜡包埋, 切片后行苏木素一伊红(HE)染色. 1.4观测指标:?肉眼观察动物一般情况,称体重;?检测大 鼠尿蛋白(UPR),尿素氮(BUN),血肌酐(Scr),尿糖(GLU), 血尿13一MG,尿NAG酶,生化指标采取半自动生化分析仪及 酶标仪检测:?肾组织病理切片HE染色光镜下观察不同剂 量组大鼠肾小管及肾小球的损伤情况. 1.5统计学处理:采用SPSS10.0统计学分析软件处理,所有 结果以互+j表示,各组均数问行t检验. 2结果 2.1大鼠行为与体重的变化:见表1. 表1各绾大鼠行为与体重的变化 作者单位:030001太原,山西医科大学第二医院肾病科[赵怡蕊 (现在山西省中医院肾病科),李荣山];山两省中医院肾病科(刘光 珍,李志宏,陈小清) 从表1观察广防己组大鼠一般状况较黄芪+广防己差. 导致脱毛,行动迟缓与死亡,体重减轻较明显(P<0.05),有死 亡现象,证明广防己组肾毒性大,黄芪+广防己组肾毒性有所