实验六放线菌的形态观察
实验六 放线菌的形态观察
一、实验目的
1(掌握配制合成培养基的一般方法。
2(学习并掌握观察放线菌形态的基本方法。
3(初步了解放线菌的形态特征。
二、实验原理
1(高氏I号培养基
高氏I号培养基是用来培养和观察放线菌形态特征的合成培养基。此合成培养基的主要特点是含有多种化学成分已知的无机盐，这些无机盐可能相互作用而产生沉淀。因此，在混合培养基成分时，一般是按配方的顺序依次溶解各成分，甚至有时还需要将二种或多种成分分别灭菌，使用时再按比例混合。此外，合成培养基有的还要补加微量元素。
2(放线菌
放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰氏阳性细菌。常见放线菌大多能形成菌丝体，紧贴培养基
表
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面或深入培养基内生长的叫基内菌丝，基内菌丝生长到一定阶段还能向空气中生长出气生菌丝，并进一步分化产生孢子丝及孢子。有的放线菌只产生基内菌丝而无气生菌丝。
在显微镜下直接观察时，气生菌丝色暗，基内菌丝较透明。孢子丝依种类的不同，有直、波曲、各种螺旋形或轮生。在油镜下观察，放线菌的孢子有球形、椭圆、杆状或柱状。能否产生菌丝体及由菌丝体分化产生的各种形态特征是放线菌分类鉴定的重要依据。
为了观察放线菌的形态特征，人们设计了各种培养和观察方法，这些方法的主要目的是为了尽可能保持放线菌自然生长状态下的形态特征。本实验应用插片法。
3(插片法
将放线菌接种在平板上，插上灭菌盖玻片后培养，使放线菌菌丝沿着培养基表面与盖玻片的交接处生长而附着在盖玻上。观察时，轻轻取出盖玻片，置于载玻片上直接镜检。这种方法可观察到放线菌自然生长状态下的特征，而且便于观察不同生长期的形态。
三、实验器材
1(.菌种:青色链霉菌( S. glaucus )，弗氏链霉菌( S. fradiae )。 2(培养基:高氏I号培养基。
3(仪器或其他用具:培养皿，盖玻片，载玻片，盖玻片，接种环，镊子，显微镜等。
四、实验
步骤
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1(配制高氏I号培养基(200mL)。
按配方称取高氏培养基各组分，先用少量冷水，将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其他成分，溶化后，补足水分至200mL，调节pH，121?灭菌20min。
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2(倒平板。
取融化并冷至大约50?的高氏I号培养基倒平板，倒平板时尽量使培养基厚一些，凝固待用。
4(接种。
无菌操作，用接种环挑取菌种斜面培养物在平板上划线接种，划线要密。 5(插片。
以无菌操作用镊子将灭菌的盖玻片以大约与培养基成45?角插入平板内，并与划线垂直，每个平板插入3个盖玻片。
6(培养。
将平板倒置，28?培养一星期。
7(镜检。
用镊子小心拔出盖玻片，擦去背面培养物，然后将无菌的一面朝上放在载玻片上，直接镜检。观察时，宜用略暗光线;先用低倍镜找到适当视野，再换高倍镜观察，必要时可用油镜观察。
【附】
高氏I号培养基配方:
可溶性淀粉 20g KNO 1g 3
NaCl 0.5g KHPO 0.5g 24
MgSO 0.5g 4
FeSO 0.01g 4
琼脂 20g 水 1000mL pH 7.2~7.4 配制时，先用少量冷水，将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加热，边
?灭菌20min。 搅拌边加入其他成分，溶化后，补足水分至1000mL。121
五、实验结果
1(表格:各种菌丝形态特征
项目 基内菌丝形态 气生菌丝形态 孢子丝形态
紧密螺旋形 青色链霉菌 较长，疏松，多分枝 毛状
弗氏链霉菌 略短，较密，多分枝 厚絮状 直条状
2.图片:青色链霉菌及弗氏链霉菌菌丝
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青色链霉菌(示菌丝)(10×100，油镜)
弗氏链霉菌(示菌丝)(10×100，油镜)
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六、思
考题
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1(镜检时如何区分放线菌基内菌丝、气生菌丝及孢子丝,
答:基内菌丝比较亮比较粗、较透明;气生菌丝比较黑比较细、色暗;孢子丝依种类的不同，有直、波曲、各种螺旋形或轮生，末端有时有孢子脱落。 2.为什么高氏1号培养基要加入酚， 马丁氏培养基加入链霉素,
答:高氏一号加的酚是显色用的，不是抑制剂，目的是区分目标菌。 马丁氏加链霉素是抑制剂，抑制非目标菌的生长的，使得目标菌(真菌)得到选择性生长。
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