实验三公畜精液的稀释及低温保存
实验三 公畜精液的稀释及低温保存 一、目的
1、熟悉精液稀释液的配制方法;
2、掌握低温保存的技术。
二、材料
精液、玻棒、玻片、小试管、试管架、烧杯、三角烧瓶、温度计、量筒、注射器、特种铅笔、电炉、铝锅、小天平、纱布、药棉、胶圈、软木塞、蒸馏水、柠檬酸钠、葡萄糖、新鲜牛奶、新鲜鸡蛋、医用中性石腊油或白腊、75%酒精棉球、精密试纸、显微镜、冰箱或冰壶、青霉素、链霉素等。
三、方法和步骤
(一)稀释液的配制
1、牛奶稀释液(猪、牛均可用)
(1)将新鲜牛奶用2,3层纱布滤入消毒过的烧杯，然后加盖隔水煮沸消毒10min，取出冷却。
(2)待牛奶冷却后，用消毒过的玻棒将奶皮去掉。
(3)按每mL牛乳加青霉素和链霉素各1000 IU，混合均匀即成。
2、蛋黄、葡萄糖稀释液(供猪用)
(1)用小天平秤取2.5g葡萄糖置于消毒过的烧杯中，然后加入蒸馏水50mL。待葡萄糖完全溶解后，加盖隔水煮沸后消毒10min，然后取出冷却备用。 (2)将鸡蛋洗净抹干并用75%酒精消毒。待酒精完全挥发后。用消毒过的镊子从蛋的中间将蛋壳打成两段(注意不要将蛋壳打碎)然后互相倾倒直到蛋白流尽为止，流出的蛋白装在小烧杯内，而蛋黄留在蛋壳里或者倒出装在消毒过的培养皿里，然后用消毒过的注射器穿过蛋黄膜吸取蛋黄。注意不要吸取蛋黄膜。
(3)按比例吸取蛋黄加入于上述消毒冷却好的葡萄糖液中(蛋黄与葡萄糖液的比例为1:4)。并将注射器反复抽打(即吸入和压出，直至蛋黄完全溶解于葡萄糖液中为止。抽打时，要注意注射器连接针头的一端不要离开液面，以免形成许多气泡。
(4)按每mL蛋黄葡萄糖液加入青霉素和链霉素各1000 IU，充分混合均匀便成。
3、蛋黄柠檬酸钠液(供牛用)
(1)用小天平秤取2.9g柠檬酸钠(二水)置于消毒过的烧杯申，并加入蒸馏水100mL溶解后，加盖隔水煮沸消毒10min，取出冷却，备用。
(2)用消毒过的注射器吸取蛋黄(方法与配制蛋黄葡萄糖液同)。 (3)量取冷却后的柠檬酸钠液37.5mL装入另一消毒过的烧杯中，然后加入蛋黄12.5mL混合均匀(混合方法与蛋黄葡萄糖液同)。
(4)按每mL蛋黄柠檬酸钠液加入青霉素和链霉素各1000 IU混合均匀即成。 (二)精液的稀释与分装
l、将精液和稀释液同置于室温中存放10min左右，使其温度一致。 2、检查精子的活率，要求活率在0.7以上者，方可作稀释保存用。 3、用清毒过的注射器吸取少量的稀释液冲洗贮精瓶。
4、用消毒过的注射器将精液量入贮精瓶。
5、按稀释比例将上述三种稀释液分别沿瓶壁缓慢加入精液中，并轻轻摇动使其混合均 匀。
6、取稀释后的精液一滴于载玻片上镜检精子活率。
7、稀释后的活率如合格，即可按一定的剂量进行分装，每组稀释液分装7管。 8、每管加入消毒过的医用中性石腊油于精液面上，约l,2mm厚度。 9、贴上标签，注明畜别、公畜号、精液号数、稀释液种类和日期等。
(三)降温与保存
将分装好的精液每组一支扎成一捆(用胶圈扎紧)，放在冷水盆中然后放入冰箱中保存。 (四)精液保存效果的测定
每天取出一捆，逐管进行活率检查，直至精子全部死完为止，检查结果记录于
表
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中。 四、作业
l、将原精液的性状检查结果填入下表。
采精日期 公畜号数 射精量 颜色 混浊度 密度 活力 PH值 备注
2、将保存的精子活率检查结果记入下表。
检查时间
精子活率
稀释液种类
牛乳
蛋-葡液
蛋-柠液
3、根据上述检查结果计算精子活率0.5的保存时间，精子存活指数及精子总存活时间，比
较其保存效果。
4、配制稀释液和稀释精液时应注意哪些问题,
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