“思壮”虫草菌丝体胶囊免疫功能评价

“思壮”虫草菌丝体胶囊免疫功能评价 “思壮”虫草菌丝体胶囊免疫功能评价 ,高剂量思壮虫草菌丝体胶囊具有增强小鼠细胞免 疫功能,而3种剂量均能明显增强小鼠体液免疫功能和单棱巨噬细胞吞噬功能,且有剂量反应关系,由 此证明”思牡虫草苗丝体腔囊有明显的免疫调节作用 关键词:虫草菌丝体,免疫功能 中图分类鲁:Q9399I文南I标识码:A文章编 号:0253—2654(2000)0I_o0I9-04 EVALUATIoNoNIMMIrNn?vFUNCTIoNoFSRoNG C0RDYCEPSMECYLIUMCApSULES FANMeiZttenLIChun-RuLIZengZhJ (曲riculturalUniversity,HaJbi230036) LI3ZhongMingSHIGenYongCHENXin-Xia (Sanitationand~tiepldemicStatenofJiangsuProvince,Nanjing210009) Abstract:Micewere陀a陀dwithmyceliafromSTRONGCORDYCEPSMYCELILTC!CAPSLJ~ESfc ommemi~l nam曲atdosesof45.450.atld900ragmycelia/tgforl5,30daysfortestsofdelayed-?eypehypersensifivily (tYI?H)inducedby2-dinitrofluorobenzene(D】),ser~rth~emolysfo,andca rbonclearanceThex~suLtsshowed thatthemediumandhighdc~esenhancedcellularimmuni~ofmicesignifican dy,andu1]dosesenhanced significantlyhumora]immureb?andphagocytosisbyuninuclealemacropha geswithobviousdosedependenceAll theseresultssuggeststhatthecapsuleareofsubstanfiulimmunoregulation]~ ncliom Keywords:Cordy~:eps,Mycelia,lmmumb.funcdon 虫草是一大类昆虫病原真菌,据清水大典 (1994)的统计,全球已报道的虫草种类约400种, 我国现已记载80种左右.国际公认对于虫草认识 起源于中国,日本学者小林义雄认为,中国在3000 年前即可能对虫草就有某种程度的认识”.. 在真菌学发展史上,尽管很早就对一些虫 草有了某种程度的认识,但主要集中于标本采 集,描述,鉴定以及中药上对少数种作为滋补和 治疗药物直接使用. ?由安徽省教育委员会重点科研项目和安徽省自然科学 基金项目共同资助 收稿日期:19981228,修回日期:l995_5 ? 2O?微生物学通报 基于虫草类真菌在医药保健方面的作用口], 同时,由于一些化学合成药品对人体及环境所造 成的污染,因而对虫草的市场需求量愈来愈大. 现代的一些研究表明口?,虫草人工发酵 的菌丝体的主要药理药化成分基本类似于虫草 生药.其中虫草多糖为虫草菌丝体的主要有效 成份之一,虫草菌丝体中除含有虫草多糖外,还 有氨基酸,微量元素,D甘露醇和麦角甾醇,核 苷类,维生素类,硬脂酸等物质. 我国虫草研究多集中于冬虫夏草【ret B】,蛹虫草[cm#i?(vui11)FL】,大团囊 虫草[cophioglossoides(Ehr,)FL],黑槌虫 草[CgracilisDur.&M0nL],古尼虫草【c gunnii(Berk.)Berk.]等. 大量的研究表明:不同种类的虫草甚至同 一 虫草上分离出的不同菌株,或同一虫草的不 同产地,有效成分常有所不同,其药效或功能也 不相同本文报道利用一种”思壮虫草菌丝体 胶囊所进行的免疫功能测定结果 1材料与方法 1.1材料 试验所用”思壮虫草苗丝体胶囊,系由一 种虫草上分离的地顶孢霉fAcremDHiumte,,卜 cola(Miller&a1)W.Cams](新纪录种)人 工发酵的菌丝体制成 1.2方法 1.2.1细胞免疫功能试验——二硝基氟苯诱导 小鼠迟发性变态反应(DTH):选取18,22g健 康雌性昆明小鼠4O只,将小鼠按体重随机分人 45,450和900mg/kg3个剂量组和1个对照组, 每组1O只动物.将样品按设定的剂量用双蒸 2000年27fI1 水配制成所需的浓度,每日经口灌胃,灌胃容积 为20mL/kg体重,对照组灌双蒸水.连续灌胃 15d后,每只小鼠腹部去毛,范围3×3cm.用 微量注射器取1%二硝基氟苯(DNq=B)丙酮麻 油溶液501~L,均匀涂抹在剃毛区内致敏.致敏 后5d,各组小鼠右耳均匀涂抹1%DNFB丙酮麻 油溶液10pL,左耳均匀涂抹无DNFB丙酮麻油 溶液1OpL作对照,涂抹后,各组小鼠按原样继 续灌胃.抗原攻击后24h,颈椎脱臼处死小鼠, 剪下左右耳壳,用打孔器于同一部位取下直径 8mm的耳片,称重,以小鼠左右耳片重量之差 作为肿胀度,同时取小鼠的胸腺及脾脏称重, 以每10g小鼠的脾重(mg)和胸腺重(mg)作为 脾指数和胸腺指数,计算菌丝体胶囊对DNFB 所致的小鼠耳廓超敏反应的影响. 1.2.2体液免疫功能试验——血清溶血素试验: 采用半数溶血值(HC)测定法,供试动物和处理 均同前.连续灌胃15d后,每鼠腹腔注射经生理 盐水洗涤过的2%(v/v)压积绵羊红细胞(SRBC) 02mL致敏.免疫5d后,小鼠摘眼球取血,2000 r/min离心10rnin,收集血清取血清用SA缓冲 液稀释200倍,将稀释后的血清1mL置试管内, 依次加入l0%(v/v)SRBC0.5mL,补体lmL(用 SA缓冲液代替).置37?恒温水浴中保温30min 后,冰浴终止反应,2000r/min离心1Omin,然后 各管分别取上清液lmL,都氏试剂3mL于试管 内;同时另取3支试管,每管加1O%(v,v)SRBC 0.25mL,加都氏试剂至4mL,充分混匀,放置 10min后,于540rma处以对照管作空白,分别测定 各管光密度值,按下式计算各鼠的样品HC HCso=丽删o 1.2.3单核一巨噬细胞功能试验——小鼠碳廓 清试验:试验动物及处理均同前.连续灌胃15d 后,将每只小鼠按每102体重尾静脉注射1:3稀 释的印度墨汁0.1mL,注入后立即计时,并分别 于第2和第10rain用抗凝过的平口毛细管从小 鼠眼眶内眦静脉丛取血0.025mL,加入到盛有 2mL0.1%碳酸钠管中.于波长600nm处测吸 光度(0D)值并用颈椎脱臼处死小鼠,取肝, 2000年27f1)微生物学通报2l 脾称重.由于碳颗粒的清除速率与其剂量呈指K值,按公式a=k×体重/(肝重+脾重)求 数函数的关系,即吞噬速度与血碳浓度呈正比,出小鼠吞噬指数a值= 以血碳浓度的对数值为纵坐标,取血时间为横 坐标,按公式K:0gOD1一lgOD2)/(乜一t1)2结果与分析 求出吞噬速率(K),再用小鼠的肝,脾重量校正2.1细胞免疫功能试验——二硝基氟苯诱导 表1思壮虫草菌丝体胶囊对小鼠耳廓迟发性超敏反应的影响 ?与对照组相比P<0o1 小鼠迟发性变态反应(DTH) “思壮虫草菌丝体胶囊对DNFB所致的小 鼠耳廓超敏反应(H)的影响结果见表1. 由表1结果可知:各剂量组小鼠的耳廓肿 胀度均高于阴性对照组,且随剂量增加而增加, 结果经方差分析及两两比较统计学处理,与阴 性对照组相比,中,高剂量组有显着性统计学差 异(<0.01),通过二硝基氟苯(DNFB)诱导小 鼠迟发性变态反应(DlTH),思壮虫草菌丝体 胶囊在45,450(相当于成人每日每公斤体重推 荐摄人量的l0倍)和900rag/kg剂量时,各剂量 组小鼠的脾指数和胸腺指数与阴性对照组相比 无统计学差异(口<0.01),并随剂量的增加而增 加.提示中,高剂量思壮虫草胶囊有明显增强 DNFB引起的小鼠迟发性超敏反应作用,表明 中,高剂量思壮虫草菌丝体胶囊具有增强小 鼠细胞免疫功能 2.2体液免疫功能试验——血清溶血素试验 “思壮虫草菌丝体胶囊对小鼠血清溶血素 水平的影响结果见表2. 表2思壮虫草菌丝体胶囊对血清溶血素水平的影响 ?与对照组相比P<005,P<O.ol 由表2可见,通过血清溶血素试验,思壮” 虫草菌丝体胶囊在45,450(相当于成人每日每 公斤体重推荐摄人量的10倍)和900mg/体 重剂量时,各剂量组小鼠血清半数溶血值 (HC)均高于阴性对照组,且随剂量增加而升 高;结果经方差分析及两两比较统计学处理,与 对照组相比,各剂量组均有显着统计学差异 <005,P<0.01).表明思壮虫草胶囊有 明显增强小鼠血清溶血素反应的作用,即有明 显增加小鼠的体液免疫功能. 2.3单核一巨噬细胞功能试验一小鼠碳廓清试验 试验结果见表3 由表3可见,通过小鼠碳廓清试验,”思牡 虫草菌筵体胶囊在45,450(相当于成人每日每 公斤体重推荐摄人量的10倍)和900mg/kg体 重剂量时,各剂量组小鼠的单核一巨噬细胞吞噬 指数均高于阴性对照组,且有剂量一反应关系 表3思壮虫草菌丝体胶囊对小鼠碳廓清的影响 ?与对照蛆相比ooI 结果经方差分析及两两比较统计学处理,与阴 性对照组相比,各剂量组均有显着性统计学差 异(口<0.01)表明”思壮”虫草菌丝体胶囊有 明显增强小鼠单核一巨噬细胞吞噬功能. 根据卫生部免疫作用评价 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 l,思壮 虫草菌丝体胶囊在3个方面免疫系统测试中, 检测结果均呈阳性,由此判定思壮虫草菌丝 体胶囊具有明显的免疫调节作用 22.微生物学迪 参考文献 清水大典着.原色冬虫夏草圈话.诫文堂新光社,【6] 王 199 国 4 栋 . 主编.冬虫夏草类生态培植应用北京:科学技【7] 王国栋主编.冬虫夏草类生态培植应用北京:科学技 虫真合肥枷科学技…蒲蛰龙李增智主编 .昆虫真菌学合肥:安徽科学技? ;与应用第一卷.北京:学c粱宗琦.中国虫生真菌研究与应用(第一卷). 北京:学? 术期刊出版社.1988,26,35 节丛孢属真菌抗反刍 报2000年27(1】 焦彦朝,粱宗琦刘爱荛.贵州农业科学,I990.(3) 53,58 MiyazakiOikawaN.YamadaHetalPharm Bull,1977,25:3324,3328 KihoTabataUkmS.]-~l-aCelaLCarbohydr Res1986.156:189--I96 CunninghamKHutetnnsonSA,M~lnsonWetal 3ChemSocI9512299,2300 卫生部卫生监督司编.保健食品管理法规汇编.长春: 吉林科学技术出版社.I997,53,75. s8 化菌株的体外筛选 秦泽荣缪作清\,虎张向利刘杏忠陈刚王金洛, _—— 国五:医学院北京100094)?冲国农业科学院生物防治研究所北京100085)~ (北京市农林科学院畜牧兽医研究所北京100085) 摘要:利用食线虫真菌对动物寄生线虫病进行生物防治是寄生虫学当今的研究热点之一.获得能够通 过动物消化道的食线虫菌株是取得成功的前提本文采用模拟反刍动物瘤胃和真胃的消化道作用,对84 株节丛孢屑的食线虫真菌进行了体外抗消化筛选.结果表明:共有23株通过了24h瘤胃渡的处理,通过 率为2738%;16株同时还通过了4h盐酸一 关键词:节丛孢属,食线虫真菌,生物防治 中围分类毒_赢.—.标_ 胃蛋白酶的处理,通过卓为l9.04%. 体外筛选 文章编号:0253-2654(2fJ[)【】)_o1_o22_o3 INVITRoSTRESSSELECTIoNoFDIGESTIVE—RESISTANTSTRAIN 0F HR0正『()豫lFoRTHEB10CoNTRoLoFPARASInCNEMAToDES QINZe—RongMIAOzuo-QingZHOUHu.ZHANG)dang-? LIUXing-ZhongCHENGangWANGJin-Luo (CollegeofVewrinaryMedicine.ChinaAgriculturalUniversi~?,Be@?ing100094) („BiologicalControlInstitute,ChinaAgricMturalAcademy.Beijing100085) (Be@ingAcademyofAgriculture&Forestry.Bering100085) Abstract:Experimentalprocedureswedesignedtoselectnematophagousfungi(Arthrobotryssip.)thatwerl~ abletosttreiveinvitroconditionssimulatingthedigestioninnlm~llandaboma sumofcattle23(27.38%)isolates survivedthe24houmofn朋 enfluid,and16(19.04%1isolatespassedflJll~nfluidandthe~psinHCIsolution Keywords:~matopkagousfm.Arthrobotrys, invitroselection „国家自鼎科学基金资助项目(No39700108) ProjectGrantedbyChineseNationalNaturalScienceFund(No397001081 收蕾臼期:I998一I1吨5,惨回臼期:1999-04-12 . ?川??