【doc】海藻酸钠-氯化钡微囊对大鼠胰岛体外胰岛素分泌功能的影响

【doc】海藻酸钠-氯化钡微囊对大鼠胰岛体外胰岛素分泌功能的影响 海藻酸钠-氯化钡微囊对大鼠胰岛体外胰岛 素分泌功能的影响 306肝胆外科杂志2003年8月第11卷第4期JournalofHepatobiliarySurgery,Vo1.11,No.4,Aug.2003 海藻酸钠一氯化钡微囊对大鼠胰岛体外胰岛素 分泌功能的影响 左石,孙诚谊,胡韵,刘兴贵 【摘要】目的观察海藻酸钠一氯化钡微囊对大鼠胰岛体外胰岛素分泌功能有无影响.方法以海藻酸钠和氯化钡为材 料,采用气体吹喷制囊法将新鲜分离纯化的大鼠胰岛制成微囊化胰岛,取空微囊, 微囊化大鼠胰岛与未微囊化大鼠胰岛各500 只,分为10份,置于培养板中培养,用放免法测定并比较第2,4,6d培养液中基础胰岛素浓度.结果空微囊组第2,4,6d的 基础胰岛素平均浓度均为0nmol/1/50,微囊化大鼠胰岛组第2,4,6d的基础胰岛素平均浓度为5.179,5.806,5.558nmol/1/ 50只,未微囊化大鼠胰岛组第2,4,6d的基础胰岛素平均浓度为5.441,6.080,5.468nmol/1/50只,后两者差异无显着性意 义(P>0.05).结论海藻酸钠一氯化钡微囊对大鼠胰岛体外胰岛索分泌功能无影响 【关键词】海藻酸钠一氯化钡;微囊;胰岛;体外胰岛素分泌功能 【中圈分类号】R657.5【文献标识码】A【文章编号】1006—4761(2003)03—0306—03 THEEFFECTOFALGINATE—BACL2MICROCAPSULESONTHEINSULINSECRETORYFUNCTIONOFRATISL ETSIN VITROZUOShi,SUNChen—yi,?yYun,ela1.(DepartmentofGeneralSurgery,AffiliatedHospitalofGuiyangMedical College,Guiyang550004,China) [Abstract]ObjectiveToobservetheeffectofAlginate— BaCI2microsapsulesontheinsulinsecretoryfunctionofrat isletsinvitro.MethodsWetookalginate,BariumChlorideandratisletswhichwereisolatedandpurifiedfromratpancreas freshlyasmaterials,andusedair--jetmethodtOmakemicroencapsulatedislets.500hollowmicrocapsules,500microencapsu— latedisletsand500non— microencapsulatedisletswereculturedincultureplaterespectively,50isletsperwel1.Theculture mediawerechangedevery2"day.Tomeasurethebasalinsulinconcentrationintheculturemediumat2".4.6,hdaybyra— dioimmunassaymethodandcomparetheresults.ResultThemeaninsulinconcentrationinthemediaofthehollowmicrocap— sulegroupat2nd,4,6thdaywere0nmol/1/50,themeaninsulinconcentrationinthemediaofmicroencapsulatedisletgroup were5.179,5.806,5.558nmol/1/50,andthatofnon— microencapsulatedisletgroupwere5.441,6.080,5.468nmol/1/50. Therewerenosignificantdifferencesbetweethemicroencapsulatedisletgroupandnon— micr0encapsulatedisletgroup(P:>0. 05).ConclusionsAlginate— BaCl2microsapsuleshavenoteffectontheinsulinsecretoryfunctionorratisletsinvitro. [Keywords]Alginate—BariumChloride;microcapsule;letinsulinsecretoryfunction;rats 胰岛是胰腺的内分泌组织,它能分泌胰岛素,降低血糖 水平,在维持体内血糖的恒定中具有十分重要的作用.1型 糖尿病患者在发病后常需终生依赖外源性胰岛素治疗.自上 世纪70年代至今,动物实验及临床应用均证明,胰岛移植可 逆转糖尿病慢性高血糖状态,阻止或延缓糖尿病慢性并发症 的发生,但由于移植物免疫排斥,胰岛移植物不能长期存活, 远期效果不理想.1980年Lin与Sun首创用海藻酸钠一聚赖 氨酸一海藻酸钠(A—P—A)制成的微囊包裹胰岛进行同种鼠胰 岛移植获得成功[】].实验证明,微囊的半透膜通过免疫隔离 作用抑制受体对移植物的免疫攻击,能有效地延长细胞发挥 【基金项目】贵州省科学技术基金资助课题子项目(合同号D99--2) 【作者单位】贵阳医学院附属医院普通外科,贵阳550004 【收藕日期】2003一O1—27 【惨回日期】2003--05—03 功能和存活的时间.本实验以海藻酸钠和氯化钡为材料,采 用气体吹喷制囊法将新鲜分离纯化的大鼠胰岛制成微囊化 胰岛,分别测定空微囊,微囊化大鼠胰岛与未微囊化大鼠胰 岛培养2,4,6d的培养液中基础胰岛素浓度并作比较.了解 海藻酸钠一氯化钡微囊对胰岛体外胰岛素分泌功能有无影 响. 1材料与方法 1.1主要仪器与试剂 RPMI1640培养液(GibcoUSA),Ficoll一400,胶原酶V 型(均为Sigma产品),胰岛素放免试剂盒(中国原子能研究 所提供),自制微囊发生器,倒置显着微(日本奥林巴斯) 1.2实验动物 健康成年雄性Wistar大鼠,体重220,280g,由本院实 验动物中心提供,以普通级饲养. 1.3方法 1.3.1大鼠胰岛的分离与纯化Wistar大鼠称重后用1 戊巴比妥钠溶液腹腔内注射麻醉.用0.5mg/mlV型胶原酶 肝胆外科杂志2003年8月第ll卷第4期 JournalofHepatobiliarySurgery,Vo1.11,No.4,Aug.2003307 行原位消化,使胰岛脱出.然后用Ficoll间断密度梯度离心 法纯化大鼠胰岛,置于RPMI164O培养液中待用. 1.3.2海藻酸钠一氯化钡微囊的制备取2毫升1.S精制 海藻酸钠液,置入自制微囊发生器双腔喷头内腔,连接好气 路,将微囊喷入氯化钡溶液中,用生理盐水洗涤3次,离心吸 出上清液待用. 1.3.3微囊化大鼠胰岛的制备将新鲜分离纯化大鼠胰岛 1S00个,与1ml1.S海藻酸钠溶液充分混匀,按上述方法 制成微囊化大鼠胰岛. 1.3.4培养液中基础胰岛素测定取同时分离纯化的大鼠 胰岛,一半微囊化,另一半未微囊化,另取等量海藻酸钠一 氯化钡空微囊.三组各取500只,等分为1O份,分别置于24 孔培养板培养,隔日更换培养液.用放免法测定其第2,4,6d 培养液中的基础胰岛紊浓度.分别计算空微囊组,微囊化组 和未微囊化组的平均胰岛紊浓度,并比较3组间培养液中基 础胰岛紊浓度有无显着性差异. 1.4统计学方法 用配对或非配对t检验比较三组间体外分泌胰岛紊功 能的差异有无显着性意义. 2结果 2.1空微囊组培养液中胰岛素浓度 空微囊组没有分泌胰岛紊的功能,第2,4,6d培养液中 胰岛紊的平均浓度均为0nmol/S0只. 2.2未微囊化胰岛素培养液中胰岛素浓度 未微囊化胰岛紊在体外培养中具有分泌胰岛紊的功能, 第2d胰岛紊的平均浓度为S.441nmol/1/S0只,第4d为 6.080nmol/1/S0只,第6d为5.468nmol/1/S0只.见表1. 裹1未徽囊化胰岛组培养液中胰岛蠢浓度(nmol/1/SO只) 2.3微囊化胰岛素培养液中胰岛素浓度 微囊化的胰岛在体外培养液中也具有分泌胰岛紊的功 能,第2d的平均浓度为5.179nmol/1/S0只,第4d为5. 806nmol/1/so只,第6d为S.558nmol/1/S0只.见表2. 从以上结果可以看出,空微囊组培养液中胰岛紊浓度为 0nmol/1/S0只,说明空微囊组没有分泌胰岛紊的功能.将微 囊化胰岛组与未微囊化组分别培养2,4,6d时培养液中基础 胰岛紊浓度作统计学处理,两组的差异有无显着性意义(P> 0.05). 3讨论 微囊化胰岛移植是把生物材料制成微囊将胰岛细胞包 裹,使移植物与受体免疫系统隔离.微囊的半透膜允许小分 子的营养物质,激紊,代谢产物等自由扩散,阻止免疫细胞, 大分子免疫球蛋白,补体通过,可抑制受体对移植物(胰岛细 胞)的免疫攻击,从而延长移植物存活时间.1980年Lin与 Sun首创用海藻酸钠一聚赖氨酸一海藻酸钠(A—P—A)制成的微 囊包裹胰岛进行同种鼠胰岛移植获得成功[1].之后有关微囊 化胰岛移植的研究相继开展起来.实验证明,微囊的半透膜 通过免疫隔离作用抑制受体对移植物的免疫攻击,能有效地 延长细胞发挥功能和存活的时间.它为解决移植免疫排斥问 题提供了可能,也使I型糖尿病患者异种胰岛移植成为可 能. 微囊化胰岛移植物能否长期存活并发挥生理功能与微 囊免疫隔离作用及微囊本身特征有关[2].理想的细胞微囊化 须具备以下条件:?包裹过程温和,快速,不损伤细胞,尽可 能在生理条件下制备;?包囊材料无细胞毒性,具有良好的 生物相容性;?移植细胞被完全包入微囊内,不突出于微囊 表面;?微囊大小均一,直径适中,利于细胞吸收氧气和营养 物质;?囊壁光滑坚实,具有足够的机械强度.?微囊中的胰 岛能存活且维持胰岛紊分泌功能,并能接受葡萄糖的刺激而 调节自身胰岛紊的分泌;?微囊的膜能为胰岛提供充分的免 疫保护作用,同时还具有良好的生物相容性[3].其中以第6,7 d最为重要.只有不影响胰岛的存活和分泌功能,才能发挥 其降低血糖的作用;也只有为胰岛提供免疫保护作用,才能 延长胰岛发挥功能的时间. 在制囊材料方面,大多采用海藻酸钠一聚赖氨酸制成 APA微囊,对APA微囊的研究也比较多.8O年代末1wata 等开始以琼脂糖作为微囊材料包裹胰岛进行移植].之后各 308肝胆外科杂志2003年8月第11卷第4期 JournalofHepatotn'liarySurgery,Vo1.11,No.4,Aug.2003 种材料制成的徽囊化胰岛移植研究逐渐开展起来,实验证 明,海藻酸钠是一种理想的包囊材料,用其作为基本材料制 成的徽囊生物相容性好,具有免疫隔离作用,能有效地延长 细胞发挥功能的时间.本实验中以海藻酸钠,氯化钡为材料 制成徽囊,制囊方法和材料不同于Lin和SunI】发明的A—P — A徽囊,而是采用改良的Geisen法I5],即将胰岛悬浮于1. 5海藻酸钠液,流经一双腔喷嘴内腔,经外腔气流的吹力滴 入BaCI:溶液中成囊.这种方法在凝胶形成时用BaCLz代替 CaCL:,不使用聚赖氨酸.它简化了制囊步骤,一步固化成 囊Is.6],易于在实验中操作.实验中将空微囊,徽囊化大鼠胰 岛与未徽囊化大鼠胰岛分别培养2,4,6d,然后用放免法测 定培养液中基础胰岛素浓度,结果显示:空微囊组没有分泌 胰岛素的功能,故培养液中胰岛素浓度为0nmol/1/50只, 徽囊化大鼠胰岛组培养2,4,6d的平均胰岛素浓度分别为 5.179,5.806,5.558nmol/1/50只,未微囊化大鼠胰岛组培 养2,4,6d的胰岛素平均浓度分别为5.441,6.080,5.468 nmol/1/50只,经检验两组的差异无显着性意义(P>0.05), 说明徽囊化大鼠胰岛与未徽囊化大鼠胰岛均具有良好的体 外分泌功能,包裹大鼠胰岛的海藻酸钠一氯化钡微囊对胰岛 体外分泌胰岛素的功能无影响.将其用于徽囊化胰岛移植, 不仅能维持微囊内胰岛长期存活分泌胰岛素,而且能为徽囊 内胰岛提供充分的免疫保护作用,减轻免疫排斥反应,为临 床上治疗糖尿病开辟一条新的途径. 参考文献: 1LinF,SunAM.Nicroencapsulatedisletsasbioartifilialendocrine pancreas[J].Science,1980,210:908—910. 2李勇,李通,黄丹珊,等.大鼠胰岛微囊化延长异种移植物在糖尿 病小鼠体内生存期[J].中华嚣官移植杂志,1994,15:173—175. 3ReachG.Bioartificialpancreas口].DiabeticMidicine,1993,10. 105—107.. 41wataH.TakagiT,Amemiya,eta1.Ageroseforabioartificial pancreas[J].BiomedmaterRes.1992,49:396—404. 5张胜兰,姜兆顺,邢万佳,等.改良的微囊化新生猪胰岛移植治疗 I型糖尿病8例 报告 软件系统测试报告下载sgs报告如何下载关于路面塌陷情况报告535n,sgs报告怎么下载竣工报告下载 [J].中华器官移植杂志,1998,19:45—47. 6SchrezenmeirJ,KirchgessnerJ,GeroL,eta1.Effectofmicroen— capsulationonoxygendistributioninisletsorgans[J].Transplan— tatlon,1994,57:1308-1314. (本文蝙辑严志明) 肝静脉的应用解剖学研究 丁家明,李惠君,刘群辉 【摘耍】目的为活体近亲肝移植和肝左叶切除术提供解剖学基础.方法在4O例成人尸体肝膈面切除肝实质,显露肝 静脉,观测肝静脉末端直径和距离肝膈面的深度.结果肝左静脉长度3.03士1.1cm;末端直径1.13士0.26cm;距离肝静脉 在下腔静脉汇入口1,3em的深度分别为1.15士0.49cm,1.6士0.59cm,1.91士0.64cm;与镰状韧带问的夹角为3O.29士 12.33..肝中静脉长度5.28士1.14cm;末端直径1.05士0.25cm;距离肝静脉在下腔 静脉汇入口1,4cm的深度分别为1.78 士0.51cm,2.78士0.68cm,3.71士0.69cm,4.16士0.71cm;与镰状韧带之间的夹角为45.O8士1O.15..肝右静脉长度4.67士 1.29cm;末端直径1.33士0.27cm;距离肝静脉在下腔静脉汇入口1,4cm的深度分别为1.02士0.54cm,2.0士0.74cm,2. 81士0.81cm,3.65士0.71cm;肝左,中,右静脉末端游离部长度分别为0.55士0.29cm,0.45士0.16cm和0.54士0.25cm.结 论肝静脉主干在肝实质内的行程是斜行的,其起始部距离肝膈面较深,终末部较浅,肝左,右静脉末端1em均距肝膈面1 cm深,手术中容易显露,但容易损伤.肝左,中静脉在膈面与肝镰状韧带问的夹角分别呈3O.和45.角.肝左,中,右静脉游离部 长度均在0.5cm. 【关?词】肝静脉;肝切除术;肝移植术;应用解剖 【中圈分类号】R322.47【文献标识码】A【文章编号】1006—4761(2003)03—0308—03 THEAPPLIEDANATOMICALSTUDYOFHEAPTICVEINS(DINGJia—ming,LIHui—jun,LIUQun—hui.Departmentof Anatomy,NorthSichuanMedicalCollege,Nanchong637007,China) [Abstract]ObjectiveToprovideanatomicbasisforliving—relatedlivertransplantationandthelefthepaticlobectomy. MethodsThestudywasmadeon40adultscadaverliverspecimens;Thehepaticveinswereex posedbyresectinghepatic parenchymaonthediaphragmaticsurface;Theirterminaldiameteranddepthsfromthediaph ragmaticsurfacewereinvestigat一 【基金项且】川北医学院基础医学基金资助 【作者单位】四川川北医学院解剖学教研室,南充637007 【作者简介】丁家明,男,副教授,研究方向.肝脏应用解剖. 【收藕日期】2003一O2—24 ed.ResultsThelengthofthelefthepaticveinwas3.03士1. 1cm;Theterminaldiameterwas1.13士0.26cm;Thedepthsof 1,3cmfromtheconfluenceofthelefthepaticveinintheinfe— riorvenacavawere1.15士0.49cm,1.6士0.59cm,1.91士0. 64cm,respectively.Theanglebetweenthelefthepaticveinand