HPLC法测定三拗鱼龙合剂中橙皮苷的含量
王虎 任路路 任莹 许广华 司永 李小伟
安徽省太和县中医院，安徽太和236607
【摘要】目的：建立三拗鱼龙合剂中橙皮苷的含量测定方法。方法：采用HPLC法测定，色谱柱为碳十八烷基硅烷键合硅胶柱；流动相为乙腈-0 4%磷酸水溶液（20∶80）；检测波长：283nm；流速：1 0ml/min；柱温：30℃。结果：橙皮苷在13 91～222 6μg/ml范围呈良好的线性关系，平均回收率100 11%，RSD=1 37%（n=6）。结论：该方法简单、准确，重复性、稳定性良好，精密度高，结果可靠，可作为三拗鱼龙合剂质量控制的方法。
关键词 三拗鱼龙合剂；橙皮苷；HPLC
【中图分类号】R284 1【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517(2015)01-0044-02
三拗鱼龙合剂由鱼腥草、浙贝母、陈皮等药味组成，为太和县中医院医院制剂。具有宣肺平喘、止咳消痰的功效，用于急、慢性支气管炎。作为医院制剂，原标准中无含量测定项。为了更好的控制医院制剂的质量，使本制剂疗效稳定可控，本文采用高效液相色谱法测定陈皮中橙皮苷的含量，该法灵敏度高，专属性好，操作简单，重复性好，可作为三拗鱼龙合剂质量控制的方法。
1仪器与
材料
关于××同志的政审材料调查表环保先进个人材料国家普通话测试材料农民专业合作社注销四查四问剖析材料
1 1仪器安捷伦LC-1220型高效液相色谱仪；紫外检测器；101-1A型数显恒温干燥箱（上海光地仪器设备有限公司）；AL-120型电子天平（瑞士梅特勒-托利多仪器公司）；HS-180型超声波清洗机（宁波海曙金兰教仪科研究所）。
1 2试药三拗鱼龙合剂（批号：20140417、20140712、20140906，太和中医院中药制剂室）；橙皮苷对照品（批号：110721-201316，中国药品生物制品检定所）；乙腈为色谱纯；水为纯化水；其余试剂均为
分析
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纯。
2方法与结果
2 1色谱条件色谱柱：依利特Hypersil ODS（4 6mm×250mm，5μm）；流动相：乙腈-0 4%磷酸水溶液（20∶80）；检测波长：283nm；流速：1 0ml/min；柱温：30℃；进样量：20μl。理论塔板数以橙皮苷计应不低于4000，分离度大于1 5。
2 2对照品溶液的制备精密称取橙皮苷对照品适量，加甲醇-0 4%磷酸水溶液（1∶1）制成每1ml含50μg的溶液。
2 3供试品溶液的制备［1］密量取本品5ml，置25ml量瓶中，加甲醇20ml，超声处理（功率100W，频率40kHz）20min，放冷，用甲醇定容，摇匀，离心（3000r/min，10min），精密移取上清液5ml置10ml量瓶中，用0 4%磷酸稀释至刻度，摇匀，过0 45μm滤膜，即得。
2 4干扰试验按处方比例及生产工艺制备不含陈皮的三拗鱼龙合剂，再按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液按上述色谱条件测定，
记录
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色谱图。结果表明，阴性对照溶液在与橙皮苷对照品相同保留时间处未显色谱峰，故认为无干扰。见图1。
2 5线性关系考察精密称取橙皮苷对照品11 13mg，置25ml量瓶中，用甲醇定容，作为储备液。精密移取储备液5ml，置10ml量瓶中，用甲醇-0 4%磷酸溶液（1∶1）稀释至刻度，摇匀，作为2号对照品溶液；同法制成3、4、5号对照品溶液。分别精密吸取各对照品溶液20μl，按上述色谱条件进样。以对照品的进样量为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），得回归方程：Y＝1 945×10-9X-0 002225532，R＝0 9996。结果表明，橙皮苷在13 91～222 6μg/ml范围内线性关系良好。
2 6精密度试验取“2 5”项下3号对照品溶液，按上述色谱条件连续进样6次，测定峰面积。结果橙皮苷峰面积RSD为0 92%。 结果表明仪器精密度良好。
2 7重复性试验取同一批号（20140417）样品6份，分别按“2 3”项下方法制备供试品溶液，并按上述色谱条件进样测定其含量。结果橙皮苷平均含量为0 4856mg/ml，RSD为1 34%，结果表明方法重复性良好。
2 8稳定性试验取同一批号（20140417）供试品溶液，室温下放置，按上述色谱条件，分别于配制后0、2、4、6、8、12、24 h 进样测定，记录橙皮苷峰面积。结果峰面积RSD为1 76%。结果表明供试品溶液在24h内基本稳定。
2 9加样回收率试验［2-3］取已知含量的同一批号（20140417）样品6份，分别精密加入浓度为0 4452mg/ml橙皮苷对照品溶液 1 0 ml，按“2 3”项下的制备方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定其含量，计算回收率。结果见表1。
2 10样品含量测定取样品3批，按所述方法测定，以外标法计算含量。结果见表2。
3结果与讨论
3 1流动相的选择HPLC法测定橙皮苷含量的文献［4-7］较多，常采用甲醇-水系统和乙腈-水系统。由于峰形较差，常会在流动相中添加一定比例酸改善峰形。试验考察了甲醇-0 4%醋酸水溶液（35∶65）、甲醇-0 4%磷酸水溶液（20∶80）、乙腈-0 4%磷酸水溶液（20∶80）等流动相，发现乙腈-0 4%磷酸水溶液（20∶80）峰形较为满意，且保留时间适宜、分离度良好，故选择此条件作为测定条件。
3 2样品处理分别对样品超声10、15、20、25min后进样考察，结果显示超声20min含量高于15min，而超声25min被测组分含量几乎不再增加，故确定超声时间20min即可。由于定容后样品过滤较困难，试验时间长，故选择离心法除去杂质。且离心后与直接过滤样品的色谱峰面积相比较，无明显差异。样品用甲醇处理后直接进样，色谱峰前沿明显，分离度差。用0 4%磷酸稀释后进样，峰形较为满意。故样品处理后，故加入适量磷酸以调整峰形。
采用HPLC法测定三拗鱼龙合剂的含量，操作简便，结果准确可靠，重现性好，可用于该品种的质量控制和稳定性考察，为三拗鱼龙合剂质量标准的建立提供依据。
参考文献
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(收稿日期：2014 10 12)
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