磷酸水解法制备复合氨基酸及铁锌氨基酸口服液的研究

磷酸水解法制备复合氨基酸及铁锌氨基酸口服液的研究 磷酸水解法制备复合氨基酸及铁锌氨基酸 口服液的研究 中国生化药物杂志chj?JournalofBiochemicalPharmaceutics1999年第2O卷第4 期l93 raisetheabilitytotoleratehypoxiaandfatue,increasetheweightsofimmuneorganandenhancethephagocytosis ofretieuloendotheliuminnormalmice,itcouldalsoincreasethenumberofperipheralbloodleukocytesandthe spleenindexandpromotemarrowntlelearcellprofiferationinimmunosuppresaivemicebyeyclophosphamide. Conclusion:Themixedfur1gipolysaccharidesgranuleshavetheeffectstoenhanceimmunefunctionandraise leukocytesinorganism. KeywordsFungipolysaccharide,Deepfermentation,Hypoxmtolerance,Fatigueendurance,Immunefunction -'l(1 磷酸水解法制备复合氨基酸及铁锌氢基酸口服液的研究 林元藻万发i陈耕夫罗少洪钾7? 一——Q%7 摘要目的I建立一种制备氨基酸口服辛葭的新方法.方法:采用猪血作为复舍氪基 酸的主要来源,对猪血蛋 白的磷酸水解工艺进行了研究.结果:猪血水解液中含有17种氪基酸,其中必需氪 基酸7种;与盐酸水解法和硫 酸水解法比较,磷酸水解法制备的氧基酸口眼液稳定性和口礴均右较大改善结讫 磷醴水解法是削备鲁氧基 酸较好的方法通过添加铁,锌,牛磺酸和中草药制备的氪基酸口服液更具有营养价 值. 词籼'燮'醣一硪辞 目前,固为人体缺铁,缺锌和复合氨基酸供给 不足所引发的诸如消化不良,贫血,厌食,生长发育 障碍等非常严重,在第三世界国家和地区的婴幼儿 和妊娠妇女中尤为多见儿童容易发生的低蛋白血 症和营养不良则是蛋白质或氨基酸供给不足所 致I1]利用各种天然蛋白质资源,将其降解制备 的氨基酸或冲剂,是当今国内外十分流行的一种营 养保健品,但就其降解蛋白质的方法和科学配方而 言仍然值得入探讨.本研究以磷酸水解法用猪血制 备复合氨基酸,同时添加有机铁,有机锌和牛磺酸 及数种相关维生素,并辅以数种助消化,健脾开胃 的中草药制成口服液,结果良好,现 报告 软件系统测试报告下载sgs报告如何下载关于路面塌陷情况报告535n,sgs报告怎么下载竣工报告下载 如下 I材料和方法 1.1材料与试剂 猪血粉,为屠宰场新鲜猪血经干燥制得,鲜血 每l0kg可得血粉约2kg;葡萄糖酸亚铁,葡萄糖酸 锌,广东制药厂;山楂,神曲,麦芽,中药店售;其它 材料均为分析纯或生化试剂. 昆明杂种小鼠,中山医科大学动物室. 作者单位610224广州.广东药学院生化教研室(林元藻 陈耕夫,罗步洪)I广东太阳神集团药业公司(75-发达) 收精日期19990223 1.2万法 1.2.1复合氨基酸液的制备工艺每lkg猪血 粉加10m01/LHsPO(pH4.2,4.4)4L,90"(2, 95?水解6h,1l2?,115c水解20min,用石灰乳 调pH至6.3,6.5,过滤.沉淀另加适量水洗涤一 次,过滤,浓缩至1/2体积,合并二次滤液,加8 (9/)括性炭,微沸30mth,过滤,得复合氨基酸液. 1.2.2中药浸膏的提制(按配制1L口服液投料) 取山楂250g,神曲40g,麦芽40g,加6倍量水 煎煮1.5h,再加4倍量水煮1h,过滤合并二次滤 液,静置24h,浓缩至1/2体积,加95%乙醇调节 含醇量达60,静置24h,过滤.再加一倍量水稀 释,静置24h,过滤,减压浓缩至膏状(乙醇回收). 1.2.3铁锌氨基酸口服液的制备工艺(按1L口 服液投料)取蒸馏水适量,加热至80c,加葡萄 糖酸锌7g牛磺酸10g,溶解,加复合氨基酸液使 含复合氨基酸总量约22.2g,加葡萄糖酸亚铁6g, 维生素C磷酸酯镁5g,溶解,加维生素B0.5g,维 生素B20.1g,维生素Be0.5g,加入中药浸膏和单 糖浆,过滤,用新鲜蒸馏水调至全量,过滤,瞬时灭 菌,灌封,消毒即得成品. 1.2.4检测方法总氮测定用微量凯氏定氮法; 氨基酸氮测定用甲醛滴定法;氨基酸组分分析用 Beckman119CL氨基酸分析仪进行检测. 194中国生化药物袭志0lJourrmlBioe/len~]Ptmarnaeeu~es1999年第20卷第4期 2结果 2.1猪血蛋白的水解曲线与得率 按1_2.1项工艺路线以l0mol/LHaPO水解 猪血蛋白,2h后,取水解液5ml过滤,滤液稀释 i00倍,各取im1分别做总氮和氨基氯测定继续 水解,每隔2h重复上述测定得最适水解时间为6 h,见图l.其氨基酸生成率(氨基酸总量/原料中蛋 白总量)为47.3;氨基酸产率(氨基酸总量/原料 量)为35. 瓤 躜 聒 《 图1措血蛋白磷酸球懈曲线 2.2氨基酸组分分析 取复合氨基酸irng溶于pH2.2柠檬酸锂缓冲 液lml中,加磺基水杨酸(SSA)0.5ml沉淀杂质及 未水解蛋白,取上清液0.1ml上氨基酸分析仪进 行检测,结果见表l 表1猪血蛋白的氨基酸含量 氨基酸种类浓度(x~iol/L)氨基酸种类浓度(mmol/L 天冬氨酸52.45甲硫氨酸1.82 苏氨酸.32异亮氨酸384 丝氨酸3720亮氨酸3543 答氨酸66.{5酪氨酸179 脯氨酸Z1.53革丙氨酸143 甘氨酸435赖氨酸2518 丙氨酸5842精氨酸6.52 缬氨酸3793组氨酸750 胱氨酸266色氨酸未j则定 2.3动精实验结果 2.3.1急性毒性试验取小鼠l0只,以铁锌氨基 酸口服液每日灌胃三次,每次30ml/kg体重,连续7 d,观察动物毒性反应,无异常和死亡.铁锌氨基酸 口服液的最大耐受剂量大于每日90ml/kg体重. 2-3?2抗疲劳试验选24只雄性小鼠,随机分成 三组,每组8只.两组灌胃给予铁锌氨基酸口服液 和复合氨基酸液,另一组为对照组,灌胃给予等体 积的i羧甲基纤维素钠(cMc)悬液.末次给药后 24h,将小鼠放入盛有i8C水的大盛水器中,保持 恒温,准确记录小鼠至死的游泳时间结果表明,铁 锌氨基酸口服液能显着增强小鼠的体力,见表2. 表2铁锌氨基酸口飘液对小鼠体力的影响(;士s) 别平 与对照组比较:P<O01.P<OO5 2.3.3耐缺氧能力试验取雌性小鼠24只,随机 均分为三组,每组8只灌胃口服液剂量同2.3.2 项,对照组给予等体积的iCMC悬液.末次给药 后24h,将小鼠放入5D0叫容积的广口瓶中.每只 瓶内预先放入碱石灰(含变色剂)i0g,铺上滤纸, 密塞后记录小鼠存活时间结果表明铁锌氨基酸口 服液能显着提高小鼠的耐缺氧能力,见表3. 表3铁锌氨基酸口服液对小鼠耐缺氧能力的影响(;?) 组别平 与对照组比较;P<O.05 2.4不同酸水解法制备复合氨基酸口服液的稳定 性比较 对用盐酸,硫酸和磷酸水解工艺制备的复合氨 基酸口服液置i?,5U下存放三个月后进行稳定 性试验,结果见表4. 表4不同酸水解工艺制备的复合氨基酸口飘液稳定性比较 盐酸和硫酸水解工艺制备的复合氨基酸口服 液在低温下存放几天后即陆续出现絮状沉淀和混 浊,而且咸,腥,涩味较重,口感很差,而磷酸水解法 制备的复合氨基酸口服液存放数月仍未出现异常, 第4期林元藻,等:磷酸水解法制备复合氯基酸及铁锌氨基酸口服液的研究195 且口感纯正.说明磷酸水解工艺优于盐酸和硫酸水 解法. 3讨论 本产品采用磷酸水解猪血粉提取L一复合氨基 酸,与国内外常用的盐酸法,硫酸法和酶法相比], 具有水解彻底,脱酸容易,成本低,得率高,生产周 期短,所需设备较简单等优点.提取所得的复合氨 基酸含l7种以上,包括人体7种必需氨基酸,且各 种氨基酸含量比例接近人体血模式,其营养价值明 显优于用大豆,明胶为原料提取的复合氨基酸. 本口服液参照人体需要和吸收能力及多种缺 乏症0添加有机铁,有机锌和牛磺酸以及与氨基酸 代谢相关的维生素以强化口服液的功能.铁是合成 红细胞主要成分血红蛋白的原料,又是生物氧化和 三羧酸循环多种酶的重要辅助固子,在能量代谢和 清除过氧化物毒性中发挥重要功能].锌是人体的 必需微量元素,迄今已知的含锌酶多达200余种, 其生理功能十分广泛].牛磺酸在脊椎动物中枢神 经系统中是含量最丰富的游离氨基酸之一,是生物 体内重要的内源性抗损伤物质,对细胞具有保护作 用.补充牛磺酸可使脑发育正常,增加学习与记忆 能力].对生长发育期儿童和青少年,铁,锌,牛磺 酸的营养价值尤其重要. 本口服液配以的中草药,其主要成分为山植, 麦芽和神曲.具有健脾,开胃,增强食欲和助消化的 作用,不但强化了口服液的功能,而且使配制的口 服液显天然琥珀色,无须添加色素,更符合口服液 要求. 参考文献 1姜军平,江益良酸水解法生产复合氨基酸工艺改进氮基酸 杂志,1990,(2):5,6 2常紊英.葛可佑,翟凰英.等.我国成人贫血的营养困褒分析 营养1998,20(2):l32,137 3PollRtE.R1tondeficiencyandbehavior"JPedialr.1976. 88i372,373 4陈时行锌的生物功能与健康.生命的化学.1988.8(2):13 , j5 5张在香,沈芳兰,李珏声,等牛磺酸对体外培养人胚脑神经细 胞生长发育和衰老的影响营养.1996.18(dj:386,391 StudiesonthePreparationofAminoAcidsbyPhosphoricAcidHydrolyzationandthe AminoAcidComplexLiqIlorContainingIronandZinc LinYuanzao,WanFada,ChenGenfu,LuoShaohong De~rtmen[Biocl~ustry,GnandongCo!~9ePharmacy(归|捌5l0224) AbslractPurpose;Theaimwastoestablishflnewmethodforthepreparationofaminoacidsandmakeflnew nutritiousaminoacidcomplexilquor.Methods:Aminoacidcomplexwasmadefromporcinebloodpowderby hydrolyzationwithphosphoricacidandtheliquorwaspreparedbyaddingorganicironandzincandotheradditives. Results:Thehydrolysateofporcinebloodpowdercontainedseventeenkindsofaminoaaidsincludingsevenkindsof essentialaminoacids.Thestabilityandtaste0ftheaminoacidcomplexmadebyphosphoricacidhydrolyzation werebetterthanthosemadebyhydrochloricacidorsulphurJcacidhydrolyzation.Conclusion:Thetechnologyof phosphoricacidhydrolyzationinmakingaminoacidcomplexisbetterthantraditionalone.Theaminoacidcomplex containingiron,zinc,taurine,eta,hasbetternutritivevaluethanthesingleaminoacidcomplex does. KeywordsPorcineblood,Aminoacid,Phosphoricacid,Hydrolyzation,Iron,Zinc,Taurine, Liquor