巯基乙酸对中华蟾蜍红细胞核异常的影响

巯基乙酸对中华蟾蜍红细胞核异常的影响 张红梅 ()菏泽学院生命科学系动物学重点实验室 ,山东菏泽 274015 摘要 :试验以健康的中华蟾蜍为实验动物 ,研究注射巯基乙酸对红细胞核异常的影响 。试验结果 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明 ,在一定 的范围内 ,巯基乙酸可引起蟾蜍微核细胞率和核异常细胞率遗传指标发生明显变化 ,随着巯基乙酸浓度的增加和作 用时间的延长 ,蟾蜍红细胞微核和核异常率呈现先上升后下降的规律性变化 。 关键词 : 巯基乙酸 ; 核异常 ; 中华蟾蜍 ( ) 文章编号 : 1000 - 7083 2009 03 - 0431 - 04 中图分类号 : Q959. 5; R99 文献标识码 : A Effec t of Th iog lyco l ic A c id on Nuc lea r An om a l ie s of Ery throcy te s in B u fo ga rga r iza n s ZHAN G Hong2m e i ()D ep a rtm en t of L ife Sc ience s, H eze Co llege, H eze, Shandong P rovince 274015, Ch ina A b stra c t: The influence on e ryth rocyte s nuc le i in hea lthy B ufo ga rga rizans afte r in jec ted w ith th ioglyco lic ac id wa s stud2 ied. The re su lts showed change s in the m ic ronuc leu s and nuc lea r anom a lie s of e ryth rocyte s we re ob se rved a t d iffe ren t toxin concen tra tion s and expo su re tim e s. The re su lts ind ica ted tha t th ioglyco lic ac id can cau se obviou s change on he red ita ry in2 dex, such a s the ra te s of m ic ronuc leu s and nuc lea r anom a lie s in a ll e ryth rocyte s. W ith the inc rea se in th ioglyco lic ac id con2 cen tra tion and the la sting tim e of func tion, the ra te s of m ic ronuc leu s and nuc lea r anom a lie s in a ll e ryth rocyte s in B ufo ga rga2 rizans inc rea sed a t first and dec rea sed afte rwa rd s. Th is change wa s regu la r. Th ioglyco lic ac id in ce rta in do sage s showed ob2 viou s he red ita ry toxic ity to e ryth rocyte s of B ufo ga rga rizans. Thu s the po llu tion of th ioglyco lic ac id to wa te r can no t be ig2 no red. Key word s: th ioglyco lic ac id; abno rna l nuc leu s; B ufo ga rga rizans ( )巯基乙酸 Th ioglyeo licae id, TGA 又称硫代乙醇 ,雌雄混合 中华蟾蜍由菏泽医学专科学校提供 酸 、硫醇代乙酸 、氢硫基乙酸 ,是一种重要的精细化 共 40只 。 1. 2 试验药品工产品 , 广 泛 应 用 于 化 学 工 业 以 及 化 妆 品 。随 着 ( ) 日本 MANHO KO 公司生产的巯基乙酸 TGA ,TGA 在工业生产及日常生活中的广泛应用 ,关于它 纯度 99 %以上 。的毒性问题也越来越多受到人们的关注 。目前 ,国 1. 3 试验 设计 领导形象设计圆作业设计ao工艺污水处理厂设计附属工程施工组织设计清扫机器人结构设计 内外有关 TGA 毒 性 的 研 究 表 明 TGA 属 于 高 毒 类 试验采用两因素四水平设计 ,第 1 组为对照组 , () 宋春华 ,甘卉芳 , 2002 ,它不仅可引起皮肤及其附 其余 3 组为试验组 , 分别经皮肤染毒低剂量 5 m g / () 属器官的损伤 尹立红等 , 2003 ,导致细胞 DNA 损 kg、中剂量 25 m g / kg、高剂量 125 m g / kg的 TGA。试 (() 伤 浦跃朴等 , 2003 , 破坏皮肤屏障 、免疫毒性 尹 验的 3 d、6 d、9 d、12 d分别取样 。) 立红等 , 2003 ,有证据表明 TGA 还具有生殖毒性 , 1. 4 血液样品的采集 、处理与生化指标测试(可引起睾丸和卵巢组织 的病 理 改变 宋春 华 , 甘卉 实验动物采血前禁食 24 h,双毁髓后打开胸骨 ) 芳 , 1990 , 可 明 显 加 快 体 外 非 洲 蟾 蜍 卵 母 细 胞 柄 ,从心脏采血 。 GVBD 的发生和第 1 次减数分裂的启动及体外成熟 血液涂片的制备 涂片于清洁载玻片上 。每只 () 率 夏蕾等 , 2007 。本研究以中华蟾蜍为研究对象 , 蟾蜍各制 3张血液涂片 ,晾干 。甲醇固定 15 m in,再 探讨 TGA 对其红细胞微核和核异常的影响 ,为进一 ( 用 16 % Giem sa 染液 pH 6. 8 , 0. 2 mo l /L 的磷酸盐 步研究 TGA 毒性提供试验依据 。 )缓冲液稀释 染色 ,水洗 ,自然晾干 ,血涂片置于在带 1 材料与方法有数码采集头 Mo tic D igita l M ic ro scop e DMB SER IES 1. 1 试验材料 收稿日期 : 2008 206 230 修回日期 : 2008 208 221 油镜下观察 。 2 试验结果 血液涂片的显微观察 每张涂片 随机 拍 摄 10 2. 1 TGA 对中华蟾蜍微核率的影响 个视野 ,记录每个视野内的红细胞总数和微核细胞 数 。随机观察 2000个以上红细胞 ,观察指标为微核 TGA 对于中华蟾蜍微核率的影响 : 染毒剂量对 () 和核质外击 、核质内凹 、核碎裂 、无丝分裂 、无核 、双 于微核率的影响效果显著 表 1 ,图 1 。 3 d 时各处 ( ) 核 、核固缩等各种类型的核异常 ,并统计其微核及核 理组与对照组相比差异极显著 P < 0. 01 , 多重比 ( )( ) 异常的细胞率 ,结果均以千分率 ‰表示 。 较显示低 、中剂量组之间差异显著 P < 0. 05 , 高剂 ( ) ( ) 微核细胞率 ‰=带有微核的细胞数 /观察的 量组与低 、中剂量组之间差异极显著 P < 0. 01 ; 6 细胞总数 ×1000 d、9 d和 12 d时各处理组与对照组相比差异极显著 ( ) () ( ) 核异常细胞率 ‰=核异常 微核除外 细胞P < 0. 01 , 多重比较显示高 、中剂量组之间差异不 ( ) 数 /观察的细胞总数 ×1000 总核异常率 =微核率 +核显著 P > 0. 05 , 高 、中剂量组与低剂量组之间差异 ( ) 异常率 总核异常率较全面地反映了细胞核受损极显著 P < 0. 01 。 伤的程 染毒时间对于微核率的影响表明 :对照组 、低剂 度 ,对判定诱变剂的遗传毒性最具说服力 。量组和高剂量组染毒时间对于微核率影响效果不显 ( ) 1. 5 数据的整理与统计分析著 P > 0. 05 ; 中剂量组染毒时间对于微核率影响 ( ) 调用 SPSS13. 0 的 U n iiva ria te 软件 包 进行 双向 效果极显著 P < 0. 01 ,染毒 6 d、9 d与 3 d 之间差 ( 方差分析和 L SD 多重比较 。数据 以平 均 数 ? 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 异极显著 ,染毒 6 d和 9 d、12 d 之间差异不显著 P () ) 差表示 。 > 0. 05 ,但有下降的趋势 表 1 ,图 2 。 表 1 TGA 对中华蟾蜍微核率的影响 Ta b le 1 The effec t of TGA on the m icron uc leu s ra te s of B u fo ga rga r iza n s ( x ?s, ‰) 处理时间 对照组 低剂量组 中剂量组 高剂量组 F P Trea ten ttim e Con tro l group Low do se group M ed ium do se group H igh do se group AB aB bC44. 09 0 3 d 0. 15 ?0. 11?0. 11?0. 12?0. 150. 86 1. 20 1. 66 ABC3C 74. 06 0 6 d 0. 16 ?0. 130. 89 ?0. 121. 67 ?0. 151. 62 ?0. 16ABC3C64. 24 0 9 d 0. 15 ?0. 1390. 89 ?0. 121. 58 ?0. 141. 65 ?0. 13ABC3C58. 69 0 12 d 0. 15 ?0. 120. 85 ?0. 121. 54 ?0. 131. 61 ?0. 14 0. 066 0. 037 7. 33 0. 072 \ \ F P 0. 936 0. 964 0. 006 0. 931 \ \ 3 ( ) ( ) ( ) 注 :同行肩标无相同小写字母者差异显著 P < 0. 05, 同行肩标无相同大写字母者差异极显著 P < 0. 01; 同列肩标有 表示差异极显著 P < 0. 01( ) No te: The shou lde r sup ersc rip t in the sam e line w ithou t sam e lowe rca se lette rs a re sign ifican tly P < 0. 05 , and the p eer2shou lde r sup e rsc rip t in the sam e ( ) line w ithou t the sam e sup e rsc rip t cap ital lette rs wa s extrem e ly sign ifican t P < 0. 01 . The p ee r2shou lde r sup e rsc rip t in the sam e tandem w ithou t the sam e ( )sym bo l was extrem ely sign ifican t P < 0. 01 图 2 微核率与染毒时间的关系 图 1 微核率与染毒浓度的关系 F ig. 2 The re lation be tween m ic ronuc leu s and expo sed tim e F ig. 1 The re la tion between m ic ronuc leu s and expo sed do se () 对于核异常率的影响效果显著 表 2 ,图 3 。 3 d、9 d 对中华蟾蜍和异常率的影响2. 2 TGA ( 和 12 d 时各处理组与对照组相比差异极显著 P 0. 05 , 高剂量组与低 、中剂量组之间差异极显 剂量组和中剂量组染毒时间对于核异常率影响效果 ( ( ) ) 著 P < 0. 01 ; 6 d 时各处理组与对照组相比差异极 不显著 P > 0. 05 ; 高剂量组染毒时间对于核异常率 ( ) ( ) 显著 P < 0. 01 , 多重比较显示低剂量组和中剂量组 影响效果极显著 P < 0. 01 ,染毒 6 d与 3 d、9 d、12 ( ) ( ) 9 d、12 d 之间差异显著 P < 0. 05 , 低 、中剂量组与高剂量组 d之间差异极显著 P < 0. 01 ,染毒 3 d 和 ( ) ( ) () 之间差异极显著 P < 0. 01 , 低 、高剂量组之间差异 之间差异不显著 P > 0. 05 表 2 ,图 4 。( ) 不显著 P > 0. 05 。 表 2 TGA 对中华蟾蜍核异常率的影响 Ta b le 2 The effec t of TGA on a bn orm a l n uc leu s ra te s of B u fo ga rga r iza n s ( x ?s, ‰) 处理时间 对照组 低剂量组 中剂量组 高剂量组 F P Treatm en t tim e Con tro l group Low do se group M ed ium do se group H igh do se group ABBC 289. 14 3 d 0 9. 52 ?0. 28?0. 46?0. 47?0. 3617. 85 18. 55 12. 22 AB aB bCa39. 51 ?0. 28 18. 26 ?0. 48 18. 89 ?0. 52 17. 88 ?0. 66 6 d 508. 53 0 ABBC9. 5 ?0. 27 17. 68 ?0. 54 18. 44 ?0. 52 15. 95 ?0. 60 9 d 50. 68 0 ABBC 9. 51 ?0. 29 17. 44 ?0. 58 18. 12 ?0. 49 15. 35 ?0. 46 12 d 68. 75 0 0. 012 2. 13 2. 07 16. 31 F \ \ 0. 99 0. 15 0. 16 0 P \ \ 3 ( ) ( ) ( ) 注 :同行肩标无相同小写字母者差异显著 P < 0. 05, 同行肩标无相同大写字母者差异极显著 P < 0. 01; 同列肩标有 表示差异极显著 P < 0. 01( ) No te s: The shou lder sup e rsc rip t in the sam e line w ithou t sam e lowe rcase le tte rs a re sign ifican tly P < 0. 05 , and the p ee r2shou lder sup e rsc rip t in the sam e ( ) line w ithou t the sam e sup e rsc rip t cap ital lette rs wa s extrem e ly sign ifican t P < 0. 01 . The p ee r2shou lde r sup e rsc rip t in the sam e tandem w ithou t the sam e ( )sym bo l was extrem ely sign ifican t P < 0. 01 TGA 对于中华蟾蜍总核异常率的影响 : 染毒剂 () 量对于总核异常率的影响效果显著 表 3 ,图 5 。染 ( 毒 3 d时各 处理 组 与 对 照 组 相 比 差 异 极 显 著 P < ) ( 0101 , 多重比较显示低 、中剂量组之间差异显著 P ) < 0. 05 , 高剂量组与低 、中剂量组之间差异极显著 ( ) P < 0. 01 ;染毒 6 d时各处理组与对照组相比差异 ( ) 极显著 P < 0. 01 , 多重比较显示低和高剂量组之间 ( ) 差异不显著 P > 0. 05 , 低 、高剂量组与中剂量组之 ( ) 间差异极显著 P < 0. 01 ;染毒 9 d、12 d时各处理组 ( ) 与对照组相比差异极显著 P < 0. 01 , 多重比较显示 ( ) 低 、中剂量组之间差异不显著 P > 0. 05 , 高剂量组 ( ) 与低 、中剂量组之间差异极显著 P < 0. 01 。 染毒时 间对于总核异常率的影响表 明 : 对 照组 和低剂量组染毒时间对于总核异常率影响效果不显 ( ) 著 P > 0. 05 ; 中 、高剂量组染毒时间对于总核异常 ( ) 率影响效果极显著 P < 0. 01 ,染毒 6 d与 3 d、9 d、 ( ) 12 d之间差异极显著 P < 0. 01 ,染毒 3 d和 12 d、9 ( ) () d之间差异不显著 P > 0. 05 表 3 ,图 6 。 3 讨论 微核和核异常试验是用来检测动物细胞受化学 毒性物质损害程度的一种简便 、快速有效的筛选方法 , 因而被许多国家和国际组织推荐为检测致癌剂 、诱变 剂常用的遗传毒理学方法 ,近年研究者多用鱼类作为 2. 3 TGA 对中华蟾蜍和总异常率的影响 () 研究对象 ,由于两栖类动物的红细胞分裂旺盛 ,其微核 试验的灵敏度高于鱼类 Jayle t et a l. , 1986。 表 3 TGA 对中华蟾蜍总核异常率的影响 Ta b le 3 The effect of TGA on to ta l a bn orm a l n uc leu s ra te s of B u fo ga rga r iza n s ( x ?s, ‰) 处理时间 对照组 低剂量组 中剂量组 高剂量组 F P Trea tm en ttim e Con tro l group Low do se group M ed ium do se group H igh do se group AB aB bC 248. 72 3 d 0 9. 67 ?0. 23?0. 40?0. 54?0. 3818. 72 19. 74 13. 88 ABC3B 39. 67 ?0. 23 19. 14 ?0. 41 20. 56 ?0. 62 19. 50 ?0. 65 6 d 519. 94 0 ABBC9. 66 ?0. 24 18. 57 ?0. 46 20. 01 ?0. 65 15. 86 ?0. 48 9 d 61. 83 0 ABBC 9. 66 ?0. 25 18. 02 ?0. 39 19. 35 ?0. 55 15. 06 ?0. 45 12 d 58. 58 0 0. 017 2. 080 4. 91 14. 67 \ \ F 0. 983 0. 160 0. 022 0 \ \ P 3 ( ) ( ) ( ) 注 :同行肩标无相同小写字母者差异显著 P < 0. 05, 同行肩标无相同大写字母者差异极显著 P < 0. 01; 同列肩标有 表示差异极显著 P < 0. 01( ) No te: The shou lde r sup ersc rip t in the sam e line w ithou t sam e lowe rca se lette rs a re sign ifican tly P < 0. 05 , and the p eer2shou lde r sup e rsc rip t in the sam e ( ) line w ithou t the sam e sup e rsc rip t cap ita l le tte rs wa s extrem e ly sign ifican t P < 0. 01 . The p ee r2shou lder sup e rsc rip t in the sam e tandem w ithou t the sam e ( )sym bo l was extrem ely sign ifican t P < 0. 01 剂量组核异常率最高 , 分析原因诱变物剂量过高会 导致试验动物中毒 , 细胞的正常分裂活动受到抑制 () 或终止 ,因而微核率反而较低 楼允东 ,吴萍 , 1996 。 不同浓度的巯基乙酸诱发蟾蜍红细胞的核异常率出 现的比率比微核更大 , 也即核异常的细胞数量要比 出现微核的细胞数量多 , 这是由于微核细胞率的高 低不仅取决于诱变剂或纺锤体抑制剂活性的强弱 , () 还取决于细 胞 有 丝 分 裂 的 速 度 薛 开 先 等 , 1990 。 因此微核细胞率与核异常细胞率出现的峰值并不同 步 。在一定染毒浓度范围内 , 蟾蜍红细胞微核细胞 和核异常率与巯基乙酸的染毒时间之间无特定相关 关系 ,整体分析表明染毒 6 d时毒性最强 。 4 参考文献 楼允东 , 吴萍. 1996. 亚硝基脏对泥鳅红细胞微核及核异常的诱发 ( ) [ J ]. 中国环境科学 , 16 4 : 275 ,278. 浦跃朴 , 尹立红 , 韩运双. 2003. 应用大鼠拟皮肤模型评价巯基乙酸 ( ) 的皮肤毒作用 [ J ]. 环境与职业医学 , 02 : 69 ,72. 宋春华 , 甘卉芳. 1990. 巯基乙酸经皮生殖毒性的研究 [ J ]. 工业卫 ( ) 生与职业病 , 16 3 : 141 ,144. 宋春华 , 甘卉芳. 2002. 巯基乙酸小鼠经皮染毒的某些毒性研究 [ J ]. ( ) 中国职业医学 , 29 1 : 65 ,66. 王蕊芳 , 贺维顺 , 吴世芳 , 等. 1996. 昆明水源水和自来水水质致突 变性及化学背景值 ?. 蝌蚪细胞微核和 CHO 细胞染色体 畸变及 ( ) SCE实验 [ J ]. 动物学研究 , 17 4 : 469 ,475. 夏蕾 , 张岭 , 侯少英 , 等. 2007. 巯基乙酸对非洲蟾蜍和小鼠卵母细 ( ) 胞体外减数分裂成熟的影响 [ J ]. 疾病控制杂志 , 11 6 : 595 , 598. 薛开先 , 王苏 , 周平 , 等. 1990. 人体外周血淋巴细胞核损伤指标的 ( ) 比较研究 [ J ]. 遗传学报 , 17 1 : 70 ,74. 微核率的高低与诱变剂的活性 、剂量 、处理时间 尹立红 , 浦跃朴 , 韩运双. 2003. 巯基乙酸皮肤毒性的实验研究 [ J ]. (以及细胞 有 丝 分 裂 的 速 度 等 因 素 有 关 王 蕊 芳 等 ,( ) 卫生毒理学杂志 , 17 4 : 237 ,238. ) 1996。本研究利用中华蟾蜍为研究对象 ,发现蟾蜍 Jayle t A , D ep a ris P, Fe rrie r V , et a l. 1986. A new m ic ronuc leu s te st u2 sing p e rip he ral b lood e ryth rocyte s of the new t P leu rode les wa ltl to de tec t 红细胞微核率和核异常率与巯基乙酸的浓度及作用 ( ) m u tagen s in fre sh2wa te r po llu tion [ J ]. M u ta t R es, 164 4 : 245 ,257. 时间有一定关系 , 具有明显的遗传毒性 。在一定染 毒时间范围内 ,随着染毒浓度的增加蟾蜍红细胞微 核和核异常率呈现先上升后下降的规律性变化 。中