中药聪耳胶囊干预老年性耳蜗螺旋神经节和疆孔神经损害的实验研究

中药聪耳胶囊干预老年性耳蜗螺旋神经节和疆孔神经损害的实验研究 中药聪耳胶囊干预老年性耳蜗螺旋神经节 和疆孔神经损害的实验研究 2007年第22卷第6期中华中医药杂志(原中国医药学报)?355? 中药聪耳胶囊干预老年性耳蜗螺旋神经节和 疆孔神经损害的实验研究* 宣伟军,丁大连. (华中科技大学同济医学院,武汉430030;广西中医学院第一临床医学院,南宁530001; CenterforHearingandDeafnese,StateUniversityofNewYorkatBuffalo,USA) ? 论着? 摘要:目的:观察中药健耳?号胶囊化裁方——聪耳胶囊对C57小鼠老年性耳蜗螺旋神经节和疆孔神经 损害的干预影响并探讨其作用机制.方法:刚出生的C57BL/6J小鼠40只,随机分为对照组和聪耳胶囊组各 20只.对照组小鼠为常规饲料喂养;聪耳胶囊组小鼠常规饲料喂至出生后两个月时,以聪耳胶囊溶液代替日 常饮水;至7月龄时两组同时终止实验.制作耳蜗切片,在光镜下定量观察比较各组小鼠耳蜗螺旋神经节细 胞密度以及疆孔内神经纤维数量.结果:对照组小鼠耳蜗底回螺旋神经节细胞数量明显减少,存活者呈现异 常的形态学改变,疆孔内神经纤维数量也有所减少.聪耳胶囊组小鼠蜗轴(特别是底回)内的螺旋神经节细胞 密度以及疆孔内的神经纤维数量则减损较轻,其中两组动物的神经节细胞数量呈现极显着差异(P<0.001). 结论:?中药聪耳胶囊与其源方健耳?号胶囊一样,均可延缓C57BL/6J小鼠老年性耳蜗神经系统损害.? 中药聪耳胶囊的药理学效应可能在于对相关基因活性表达的调控而阻断了细胞凋亡通路.?小鼠老年性耳 蜗损害系由底回开始然后向顶回逐渐蔓延发展.?小鼠老年性听觉周边神经系统的损害可能首先发生螺旋 神经节,然后再蔓延到听神经纤维. 关键词:老年性耳聋;聪耳胶囊;机理 ExperimentalStudyonInterveningEffectsofCongErCaps~einAge-induced DegenerationinSpiralGanglionNeuronsandAuditoryNerveFibersintheCochlea XuanWeijun’DingDalian (TonjiMedicalCollege,HuazhongUniversityofScienceandTechnology,Wuhan430030; GuangxiCollegeofTraditionalChineseMedicine,Nanning530001; CenterforHearingandDeafneso,StateUniversityofNewYorkatBuffalo,USA) Abstract:Objective:AtraditionalChinesemedicine(TCM)transformedfromJianEr?,CongErcapsule wasstudiedinprotectionagainstage—induceddegenerationincochlearspiralganglionneuronsandaud itorynerve fibersinC57BL/6Jmice.ApossibleprotectivemechanismWasalsodiscussed.Methods:40neonatalC57BL/6J micewererandomlydividedinto2groupswithanaverageof20animalsineachgroup.Theanimalsincontrolgroup werefedwithregularmousefeedstuffandregularwaterafterablactation,whileanimalsinexperimentalgroupwere fedthesamemousefoodafterablactation,butdrinkthemedicalsolutionofCongErcapsuleinsteadofregularwater fromtwomonthsofage.Animalswereterminatedat7monthsofage.Thecochleawereremovedandprocessedfor aseriesofmodiolussections.ThedensityofspiralganglionneuronsinRosenthal’scanalindifferentturnswas counted,andtheauditorynervefibersinhabenulaperforataatbasalturnandapicalturnwerealsoquantifiedrespec— tively.StatisticalcomparativeanalysisWasperformedbetw~nthetwogroups.Results:Densityofspiralganglion neuronsincochlearbasalturnincontrolgroupWassignificantlyreduced.Insurvivalganglionneurons,anobvious degenerationWasobservedincontrolgroup.Thenumberofauditorynervefibersincochlearbasalturnalsode- creased.Incontrast,CongErcapsuletreatedanimalshadanincreaseinsurvivalganglionsandauditorynervefibers, *广西自然科学基金资助项目(No.桂科自0447082) 通讯作者:宣伟军,广西南宁市明秀路广西中医学院159号信箱,邮编:530001,电 话:0771—3102263,E-mall:xuan.5352100@hotmail.tom ? 356?中华中医药杂志(原中国医药学报)2007年第22卷第6期 especially,asignificantdifferencewasseenindensityofspiralganglionneuronsinthebasalturnbetweenthetwo groups(P<0.001).Conclusion:? CongErcapsuleCanprotectagainstage—induceddegenerationincochlearneu? ronsinC57BL/6Jmice,whichissimilartoourpreviousfindinginJianErI1.? Weassumethepossibleprotec? tivemechanismofCongErcapsulemightberelatedtoaninterveningapeptoticgeneexpressionorablockinapop? toticpathwaysinaging.? Age-relateddamageinperipheralauditorynervesystembeginsinthebaseofthecochlea andprogressestowardstheapex.? Age-relatedperipheralspiralganglionneurondegenerationmaybeearlierthan destructionofauditorynervefibersinhabenulaperforata. Keywords:presbycusis;congercapsule;mechanism 中药聪耳胶囊与其母方中药健耳?号胶囊都是 笔者临床治疗感音神经性耳鸣,耳聋的有效验方,只 是其治法和适应证有所不同.其中笔者曾经就健耳 ?号胶囊具有显着对抗老年性耳蜗神经系统损害的 作用作了报道…1.为探索由其化裁而来的另一配 方聪耳胶囊防治老年性耳聋的效应和机制,笔者仍 以幼年即开始发生老年性耳蜗损害的C57BL/6J小 鼠为模型,观察其对该系小鼠老年性耳蜗神经系统 损害是否也有拮抗作用. 材料 关于××同志的政审材料调查表环保先进个人材料国家普通话测试材料农民专业合作社注销四查四问剖析材料 与方法 1.实验动物及分组刚出生的国产健康C57 BL/6J小鼠40只,由中国医学科学院实验动物研 究所提供,许可证号:SCHK(京)20040001,雌雄不 拘,断奶后随机分为对照组和聪耳胶囊组各20只. 对照组小鼠食用常规饲料,饮用自来水;聪耳胶囊组 小鼠食用相同的常规饲料至出生后两个月,然后饮 用中药聪耳胶囊溶液以代替日常饮水.各组小鼠长 至7月龄时终止实验. 2.实验药物及喂饲实验中药方剂由女贞子, 何首乌,黄芪,丹参等12味中药组成.将该中药配 方按照中成药胶囊的制作 流程 快递问题件怎么处理流程河南自建厂房流程下载关于规范招聘需求审批流程制作流程表下载邮件下载流程设计 ,制备成胶囊填充药 粉,每克药粉相当于生药材9.26g.按小鼠与成人 用量换算法计算小鼠用量,即为1.75g药粉/kg体 质量/天(相当于16.25g生药),加适量水配兑(一般 为0.05g药粉加5ml水),盛于动物自吸喂养瓶内供 小鼠饮用.在无其他水源供应的条件下,动物基本 可饮下每日内服中药的剂量L2J. 3.耳蜗形态学观察 3.I耳蜗标本制备小鼠断头,体视显微镜下 解剖岩部,取出听泡,在蜗尖钻孔.摘除镫骨,打开园 窗.从蜗尖小孔向耳蜗内灌人4?2.5%戊二醛磷酸 盐缓冲液,然后于固定液内浸泡固定24h.继而用 10%EDTA浸泡脱钙5天左右,直至耳蜗骨壁变软. 3.2制作耳蜗切片耳蜗标本经脱钙和磷酸 盐缓冲液漂洗后,浸入4~C2%四氧化锇磷酸盐缓冲 液2h,梯度酒精脱水,EPON812包埋.超薄切片机 沿蜗轴平行的平面逐渐靠近耳蜗骨性螺旋板,首先 获取耳蜗骨性螺旋板的疆孔切片,然后继续切片直 至耳蜗中轴获取蜗轴螺旋管的中轴切片,片厚 3ttm.切片用1%甲苯胺蓝染色. 3.3耳蜗神经结构的形态学观察在光学显 微镜(型号:ZeissAxioskop)下,取各组7月龄动物标 本,在相应对等间隔切片上进行形态学比较观察. 观察内容包括:?螺旋神经元的形态学变化,各组中 分别随机抽取6只样本,400倍光镜下分别计数耳 蜗底回和顶回螺旋神经节细胞数目.?疆孔内神经 纤维的形态学变化,各组中分别随机抽取6只样本, 1000倍光镜下计数各组顶回和底回疆孔内神经纤 维数量.?耳蜗底回和顶回柯替器的形态学变化. 数码相机(型号:OlympUSDPIO)摄像 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 . 3.4各项观察数据将两组动物耳蜗螺旋神经 节细胞数目和疆孔内神经纤维数量应用SPSS13.0版 统计软件进行统计学分析. 结果 由耳蜗底部切片可见(图1),对照组螺旋神经元 细胞数减少,尤以底回明显,尚存细胞形态也已出现 明显异常,可见不少神经元胞核明显固缩,胞体变小, 细胞间隙扩大,同时伴有鞘膜下积水,提示其已存在 较严重的神经元凋亡现象.服用聪耳胶囊组动物的 螺旋神经元损失则较轻,形态表现相对比较健康.仅 底回细胞轻度减少,少数细胞间轻度水肿,其余细胞 胞体和胞核,鞘膜等部位未见明显异常.螺旋神经节 细胞密度定量统计分析结果见表1.与对照组比较, 聪耳胶囊组底回螺旋神经节细胞密度明显增加(P< 0.001),但顶回对比不显着(P>0.05). 表1两组动物耳蜗螺旋神经节细胞密度 分布比较(个/0.015mm,?s) 注:与对照组比较,…P<0.001. 2007年第22卷第6期中华中医药杂志(原中国医药学报) A对照组耳蜗底回螺旋神经节细胞明显减少, 存留细胞变小,胞核明显固缩,细胞间隙水肿, 鞘膜下积水,细胞凋亡严重 B聪耳胶囊组耳蜗底回螺旋神经节细胞轻度减少, 大多细胞间无水肿,胞体和胞核大小无明显异常 图1两组动物耳蜗螺旋神经节细胞形态比较(4o0倍) 疆孔神经纤维数量观察结果显示见图2,对照 组疆孔内的神经纤维数量有所减少,主要见于底回, 但其损害程度不如螺旋神经节细胞明显,尤以顶回 损害轻微.与对照组比较,见表2,尚未表现出显着 性差异(P>0.05).由上表明,小鼠老年性耳蜗损 害系由底回开始然后向顶回逐渐蔓延发展,同时提 示神经元的凋亡过程比神经纤维退变发生要早.柯 替器观察结果显示,对照组耳蜗毛细胞缺失明显,严 重者可缺如,各种支持细胞也发生破坏,柯替器轮廓 结构明显异常,而服用聪耳胶囊的动物柯替器结构 则基本正常,见图3. 表2两组动物耳蜗疆孔神经纤维数量分布 比较(根/每个疆孔,?s) 讨论 老年性耳聋是机体衰老现象在听觉器官的反 映.目前对衰老机理的解释多种多样,如免疫衰退 学说,神经内分泌学说,自由基学说,蛋白质合成差 错累积学说,以及近年来提出的基因调控学说, DNA损伤修复学说,线粒体损伤学说和端粒假说 等.尽管衰老是生物界的一种自然规律,但随着对 A对照组神经纤维有所减少,主要见于底回 形态不够清晰 B聪耳胶囊组神经纤维基本正常, 密度较大,形态比较清晰 图2两组动物耳蜗疆孔内神经纤维 形态比较(在113130倍镜下计数神经纤维密度) A对照组柯替器结构明显异常,毛细胞及各支持细胞 受损严重,甚至缺如塌陷 B聪耳胶囊组柯替器结构无明显异常 图3两组动物耳蜗底回柯替器形态比较(200倍) 衰老机理研究的不断深入,延缓衰老将成为可能. 老年性耳聋属中医”久聋”,”渐聋”范畴.中医有”耳 为肾窍,耳病皆属于肾”(《秘传证治要诀-卷之十》) 之说,故针对久聋之治疗,中医向来从肾论治为主. 笔者认为,老年人除肾气易衰,肾精不足外,其他脏 腑功能也出现衰退现象,尤其是”后天之本”——脾 中华中医药杂志(原中国医药学报)2007年第22卷第6期 功能的减弱和气血运行不畅不容忽视.耳属清窍, 脾主升清降浊,清阳出上窍,”脾为孤脏……其不及 则令九窍不通”(《素问?玉机真藏论》),说明脾与耳 生理功能的维系以及与耳聋发病机制的重要关系. 脾气虚衰,气血化生不足,一方面血脉不充,耳窍失 养;一方面气虚血瘀,或兼久病必瘀,气血运行障碍, 耳窍不利,以致渐生耳聋.可见气血化生和在血脉 中的运行也是维系听功能的关键,正如《灵枢?邪气 脏腑病形篇》说:”十二经脉,三百六十五络,其血气 皆上于面而走空窍……其别气走于耳而为听.”从现 代医学对中医脏腑功能本质研究观点看3,脾主运化 水湿,化生气血,主统血等功能,广泛涉及物质代谢, 内分泌,免疫,神经,血液等系统功能;.肾主藏精,主 水,同样包含组织细胞代谢功能,内分泌功能和免疫 功能等重要作用.由此推断,若脾肾功能失调,均可 导致组织细胞代谢,内分泌及免疫功能紊乱,内耳微 循环障碍等改变,出现感音神经系统生理生化异常, 细胞和细胞器结构破坏,听觉器官衰老退变,终致听 觉功能逐渐丧失.因此,从中医脾肾瘀兼顾立论,是 我们临床治疗感音神经性耳聋的主要方法之一. 聪耳胶囊具有健脾益肾,活血通窍等作用.本 研究显示,中药聪耳胶囊处理后的7月龄小鼠,其耳 蜗螺旋神经节细胞损害情况比对照组显着减轻,神 经元细胞形态比较完好.虽然以7月龄对照组动物 疆孔内神经纤维数为 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 对老龄性病变进行估计尚 嫌时间过早,其病变发展过程本身还未达到老龄性 螺旋神经节细胞明显退变阶段,但对两组动物底回 病变的统计结果表明,已初步显示出中药聪耳胶囊 效应的显着性意义.由此还提示,耳蜗螺旋神经元 的凋亡过程较耳蜗疆孔神经纤维退变发生得更早, 而且无论是螺旋神经元还是神经纤维,其老龄性病 变的发展均是从底回向顶回过渡,与耳蜗毛细胞老 年性损害规律一致.该中药胶囊则具有对抗 C57BL/6J小鼠老年性耳蜗神经细胞凋亡和神经纤 维退变的效用,表明从脾肾瘀论治对延缓老年性耳 蜗神经系统损害可能具有重要意义.同时还提示, 该类中药对神经元保护效应的重要机制之一,可能 是改善了耳蜗听觉神经系统的血液循环.现代中药 药理研究表明,该方所选药物中,黄芪,女贞子,丹 参,何首乌等,具有提高机体SOD活性和细胞膜 Na.K.ATP酶活性效应,促进抗氧化,增强自由 基的清除,发挥保护细胞膜和线粒体膜的作用;通过 促进核蛋白代谢,提高血cAMP含量,降低血脂,改 善血循环,防治动脉硬化;调节中枢神经系统和机体 免疫功能等,起到延长组织细胞寿命和抗衰老的作 用_4J.有报道表明_5J,应用益气活血中药复方能抑 制实验动物脑缺血后脑组织中Bax基因蛋白的过度 表达,明显降低Bax/Bc1.2比值,抑制脑神经元凋 亡.对老年大鼠T细胞凋亡相关基因表达调控模 式的比较研究发现,补肾复方可显着下调FasL, TNFR.1基因的转录,抑制T细胞过度凋亡_6j6.右 归饮,补.肾益寿胶囊均可下调FasL,TNFR.1mRNA 表达水平,上调Bc1.2,clAP1,clAP2mRNA表达水 平.而抗凋亡的Bc1.2抑制细胞凋亡机制为抑制 Caspabe活性和线粒体膜释放cytC[,从而启动线粒 体参与细胞凋亡的主要途径.cytC一旦释放即与 细胞凋亡蛋白酶活化因子.1(apoptoticproteaseacti. vatingfactor.1,Apaf-1)结合,在dATP/ATP存在条 件下活化Caspase.9,Caspase-9再激活下游效应Cas. pase(Caspase.3,Caspase-6或Caspase.7),诱导细胞 凋亡_8J.细胞膜细胞凋亡途径则通过FasL和TN. FR.1信号介导去实现.一是FasL为同源三聚体, 可与膜上3个Fas分子结合,并通过其胞内死亡域 (deathdomain,DD)与胞质中Fas相关死亡域(Fas associateddeathdomain,FADD)的DD结合,继而通 过FADD末端DED(deatheffectordomain)与临近 的Caspase一8中的DED结合,使Caspase-8寡聚化, 自身裂解而活化Caspase.8,然后激活下游的Cas. pase.3导致细胞凋亡.二是TNF与TNFR.1结合, 三聚体化的TNFR.1通过DD与衔接蛋白肿瘤坏死 因子受体相关死亡域(TNFR.associateddeathdo. main,TRADD)结合,TRADD的DD再与FADD结 合,下传凋亡信号,活化Caspase.8,然后激活下游的 Caspase-3最终导致细胞凋亡_9I1...因此,这类中 药复方对细胞凋亡信号相关基因表达的调控影响及 其抗细胞凋亡作用,其中很重要的机制有可能是抑 制了Caspase活性,进而阻止Caspase家族的联级效 应.由此推测,这或许也是具有同样健脾益.肾,活血 通窍作用的聪耳胶囊之所以能对抗老年性耳蜗神经 元凋亡和神经纤维损害的重要机制之一.然而,其 具体作用机制尚有待深入研究. 参考文献 [1]宣伟军,黄正团,丁大连.中药健耳?号胶囊对抗 C57BL/6J小鼠老年性耳蜗损害的实验研究.听力学 及言语疾病杂志,2007,15(1):47—50 XuanWeijun,HuangZhengtuan,DingDalian.Experi— mentalstudyoftraditionalChinesemedicine,JianErII capsuleprotectagainstage—inducedcochlearlesionin 2007年第22卷第6期中华中医药杂志(原中国医药学报)?359? 赴加拿大参加”中加中医药学术研讨会”的通知 为深入了解加拿大中医药行业的现状,探讨利用中医药配合康复治疗的方法和作用,与加拿大中医药界学者,专家交流 探索中,西医诊疗的发展道路,并向他们介绍中国有关中医药标准化建设工作.应加拿大大不列颠哥伦比亚省中医药管理局 邀请,中华中医药学会拟与加拿大金桥教育文化交流中心在加拿大共同举办”中加中医药学术研讨会”.中华中医药学会将 于2007年10月21日至10月31月组织学术代表团前往参会. 活动内容:与会两国学者,专家将广泛交流中医及中西医结合教学,科研,临床以及护理方面的体会与经验,走访加拿大 相关政府机构,政府官员,与当地中医药专家会面并研讨有关中医药合作问 题 快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题 .会后还将组织代表团参观温哥华,多伦多等 地的相关医疗机构,并与当地中医药团体进行座谈. 报名方式及参团费用标准:1.报名者请认真填写通知所附的”拟派出国(境)人员情况表”,并 要求加盖本单位或当地中医 药主管部门,中医药学会的公章,于2007年7月31日前寄至(或传真至)中华中医药学会.2.参团费用37500元人民币包 括:报名费2000元人民币,须在报名时交纳;交通及食宿费等35500元人民币.3.交费方式:银行汇款.开户行:中国工商银 行北京和平里支行营业室;账号:0200004209200015436;户名:中华中医药学会,汇款时请注明”赴加拿大会务费”. 报名截止时间:2007年7月31日.联系地址:北京市朝阳区樱花园东街甲4号中华中医药学会国际交流部,联系人:闫 铮米克拉依,邮编:100029,电话:010—64206805,传真:010—64206805,电子信箱:zyyxhgjb@sohu.tom