呋喃唑酮

呋喃唑酮 呋喃唑酮检测试剂 Nitrofuran(AOZ) 2. 概要 酶标免疫分析定量检测呋喃唑酮残留试剂盒。德国R-Biopharm公硝基呋喃类药物是人工合成的广谱抗生素，它有非常好的抗菌司制造(中文翻译件仅供参考，以试剂盒内附的英文原件为准)。 作用和药动力学的特性，曾经被广泛应用，作为猪、禽类和水产促RIDASCREEN呋喃唑酮检测试剂盒(产品编号:R3701) 生长的添加剂。但在长时间的实验室研究过程中发现，硝基呋喃类 的药物和代谢物均可以使实验动物发生癌变和基因突变，正因为如简介 此才导致此类药物禁止在治疗和饲料中使用。硝基呋喃类药物中呋 竞争酶标免疫法定量测定肉类，蜂蜜，鱼虾，肉(鸡、猪、牛)喃它酮、硝基呋喃托英和硝基糠腙(硝基呋喃腙)在1993年被欧和牛奶中的呋喃唑酮药物残留。试剂盒中包括了所有检测用的试洲(EU)禁用，呋喃唑酮在1995年也被禁用。 剂。该试剂盒有96个试验孔包括标准试验，如果进行定量分析，由于硝基呋喃类药物在体内很快就能被代谢，而在组织中结合必须有微孔板酶标仪。 的代谢产物则能存留较长的一段时间，所以在分析此类药物的残留 时经常要分析其代谢后的产物，管理部门就以检测代谢产物为手段样品处理 达到检测硝基呋喃类残留的目的。具体代谢产物见下 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 硝基呋喃类 代谢产物 均质(牛奶样品需要沉淀) AOZ 呋喃唑酮 转移、提取、离心、浓缩和脱脂 呋喃它酮 AMOZ 硝基呋喃托英 AHD 检测时间 (样品制备以10个样品为例) 硝基糠腙(硝基呋喃腙) SEM AOZ的检测是LC-UV，LC-MS和LC-MS/MS用来检测呋喃唑酮的第1天 大约2小时 最常用方法，酶联免疫方法结合了色谱技术，采用AOZ的特异性抗过夜孵育 大约16小时 体，可以有很高的精确度，更灵敏的反应，不高的技术要求和更短第二天 大约2小时 ? 的检测时间。用RIDASCREEN呋喃唑酮酶联免疫试剂盒可以测定肉 检测过程(与样品数量无关)大约1.5小时 类，鱼虾，肉(鸡、猪、牛)和牛奶中的呋喃唑酮药物残留。 检测下限 3. 测定原理 呋喃唑酮 大约100 ppt 关于艾滋病ppt课件精益管理ppt下载地图下载ppt可编辑假如ppt教学课件下载triz基础知识ppt 测定的基础是抗原抗体反应(双抗体反应)。微孔板包被有针 对呋喃唑酮抗体的抗体。加入呋喃唑酮抗体，酶标记物，标准或样回收率 品溶液。游离呋喃唑酮与酶标记物竞争呋喃唑酮抗体结合位点(竞 鱼虾 大约90-100% 争性酶免疫分析)，同时呋喃唑酮抗体也与微孔板上固定的抗体结肉 大约70-80% 合。没有结合的酶标记物在洗涤步骤中被除去。将酶基质/发色剂蜂蜜 大约102-113% 加入到孔中并且孵育。结合的酶标记物将无色的发色剂转化为蓝色 的产物。加入反应终止液后使颜色由蓝色转变为黄色。在450nm处交叉反应 测量(选择参比波长?600nm)。吸光度值与样品中的呋喃唑酮浓度 呋喃唑酮 < 0.01% 成反比。 硝基呋喃托英 < 0.01% 硝基糠腙(硝基呋喃腙) < 0.01% 4. 提供的试剂 注意 ?每一个盒中的试剂足够进行96个测量(包括标准测定孔)，盒关于呋喃它酮的检测可以用RIDASCREEN Nitrofuran(AMOZ) 中的材料如下 试剂盒(产品编号R3711) 1 X 96孔板(12条 X 8孔) 6 X 呋喃唑酮标准液，1.3ml/瓶 1. 用途 ?0ppt，50ppt，150ppt，450ppt，1350ppt，4050ppt RIDASCREEN 呋喃唑酮检测试剂盒测定肉类，鱼虾，肉(鸡、 1 X 酶标记物(6ml)…….……….…….…….…….…..红色帽 猪、牛)和牛奶中的呋喃唑酮药物残留。 1 X 呋喃唑酮抗体液(6ml)…….………….….….…..黑色帽 1 X 发色剂/基质(10ml)…….………….…….….…..蓝色帽 ----取出5ml的样品到玻璃离心管中 1 X 反应终止液(14ml) 1N硫酸…….….….…….…..黄色帽----分别加入Carrez I和CarrezII各250ul(配制见5.2)1 X 样品及洗涤缓冲液粉剂:为10mM的磷酸盐粉剂。pH7.4。其----用振荡器充分混合样品后，用冷冻离心机离心3000g/10分钟 中包括0.05%土温20 /4-12?(39-54?)。如果没有冷冻离心机，则先将样品降温 至大约8?(46?)，然后离心 5. 需要的材料但盒中不提供 ----接9.3的描述方法 5.1设备 ----微孔板酶标仪(450nm) 9.3 接上面的方法 ----离心机 ----取1g的均质物或1.1ml的离心上清液(相当于1ml的奶样)，----振荡器 分别加入4ml的蒸馏水， 0.5ml 1M的HCL和100ul 10mM的----旋转蒸发器 2-硝基苯甲醛(在二甲基亚砜)，充分振荡 ----磁力搅拌器 ----在37?过夜孵育(大约16小时) ----50ul，100ul，1000ul微量加样器 ----分别加入5ml 0.1M KHPO，0.4ml 1M NaOH和5ml的乙酸乙酯，24 ----多道移液器 剧烈振荡30秒钟 o----混合器(旋转或超声) ----在室温下(20-25C/68-77?)离心:3000g/10分钟 5.2试剂 ----取出2.5ml的乙酸乙酯上层液到另一个新的容器中蒸干燥 ----2-硝基苯甲醛 ----用1ml的正己烷(或正庚烷)溶解干燥物，用1ml的样品稀释----0.1MKHPO 液适当的混合 24 o----正己烷(或正庚烷) ----在室温下(20-25C/68-77?)离心:3000g/10分钟 ----乙酸乙酯 ----用50ul的下层液体进行分析 ----Carrez I:0. 36 M亚铁氰化钾(?)X 3 HO 2 ----Carrez?:1. 04 M 硫酸锌X7 HO 9.4蜂蜜 2 ----取1g的蜂蜜，放入容量为20-30ml的离心管中，分别加入5ml6. 操作者应该注意之事项 的己烷，100ul 5M的HCL(或500ul 1M的HCL)和4ml的HO，2----标准液含有呋喃唑酮，应特别小心 充分振荡约1min ----反应停止液为1M硫酸，避免接触皮肤 ----室温(20-25?)3000g，离心10分钟 ----不要使用过了有效日期的试剂盒，稀释或搀杂使用会引起灵敏----在-80?冷冻30 min(或—20?冷冻1h) 度的降低 ----除去上层 ----不要交换使用不同批号的盒中试剂 ----在50?水浴下，复溶冷冻层 ----加200ul 10mM的2-硝基苯甲醛(溶于二甲基亚砜)，充分振荡 7. 储存条件 ----在37?过夜孵育(大约16小时)。 o----保存试剂盒于2-8C(36-46?)。不要冷冻。 ----分别加入5ml 0.1M KHPO，0.4ml 1M NaOH和5ml的乙酸乙酯，24 ----无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下 剧烈振荡1min ----将不用的微孔板放进原锡箔袋中并且与提供的干燥剂 ----室温(20-25?)3000g离心10分钟 一起重新密封 ----取2.5ml的乙酸乙酯层到另一个试管中，50-60?氮气流下蒸 干 8. 试剂变质的迹象 ----用1ml的样品稀释液溶解干燥物，剧烈振荡1min 红色的发色试剂有蓝色反应，表明发色剂/基质变质，应当弃之。 ----取50ul 进行分析 0标准的吸光度值小于0.6个单位(A<0.6)时，表示试剂可能稀释倍数: 2 450nm 变质。 检测下限: 150ppt 9. 样品处理 10. 酶标免疫分析程序 样品应当保存在阴凉避光之处及冷藏保存 10.1 测定之前注意事项 1. 使用之前将所有试剂回升至室温20-25?(68-77?)。 9.1虾，肉样(鸡肉、猪肉和牛肉)，肝脏，鱼和蛋 2. 使用之后立即将所有试剂放回2-8?(36-46?)。 ----用均质器均质样品 3. 在使用中不要让微孔干燥。 ----接9.3的描述方法 4. 在EIA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性，仔 细按照推荐的洗板顺序操作是EIA测定程序中的要点。 9.2 奶样 5. 在所有恒温孵育过程中，避免光线照射，用盖子盖住微孔板。 10.2样品洗涤缓冲液的制备 在试剂盒中提供一包样品洗涤缓冲液的粉剂，一包粉剂溶解于 1升的蒸馏水中，制备好的样品洗涤缓冲液在2-8?(36-46?)下 最多保存4周时间。 10.3包被有抗体的微孔板条 将锡箔袋回至室温后，沿横向边压封线外侧剪开，取出需用数 量的微孔板及框架，将不用的微孔板立即放回原锡箔袋中并且与提 供的干燥剂一起重新密封，保存于2-8?。不要冷冻。 ?10.4测定程序 图1:RIDASCREEN呋喃唑酮试剂盒的回归曲线 1. 将足够标准和样品所用数量的孔条插入微孔架，标准和样品做 两个平行实验，记录下标准和样品的位置。 13. 特异性 ?2. 加入50ul标准或处理好的样品液到各自的微孔中，每个孔加入RIDASCREEN呋喃唑酮试剂盒的特异性通过对相应的物质进行样品或标准时注意更换移液器的吸头。 交叉反应性分析而得到。 3. 加入50ul酶标记物溶液(红帽)到每一个微孔底部，充分混合。 呋喃唑酮…….………….…….….. ….< 0.01% 4. 加入50ul抗体溶液(黑帽)到每一个微孔底部充分混合，在室硝基呋喃托英…….………….…….…< 0.01% 温孵育1小时(20-25 ?/68-77?)，覆盖上薄膜(防止蒸发)。 硝基糠腙(硝基呋喃腙)…….……..< 0.01% 5. 倒出孔中的液体，将微孔架倒置在吸水纸上拍打(每轮拍打3 次)以保证完全除去孔中的液体。 用250ul样品洗涤缓冲液充14. 再现性 入孔中，再次倒掉微孔中液体，再重复两次上述操作。 由三个不同的实验结果确定了精密度，图2显示出6. 加入100ul基质/发色试剂到每一微孔中，充分混合并在室温暗RIDASCREEN?呋喃唑酮试剂盒的精密度情况，获得的标准吸收值的处孵育15分钟。 变异系数(%CV)对相应呋喃唑酮浓度作曲线，可以看到在全部范7. 加入100ul反应终止液到每一微孔中，混合好在450nm处测量围内变异系数如此之低，可以得到很好的再现性。 吸光度值以空气为空白，必须在加入停止液后60分钟内读取光 度值。 11. 结果 所获得的标准和样品吸光度值的平均值除以第一个标准(0标 准)的吸光度值再乘以100，因此0标准等于100%，吸光度值以百 分比表示。 标准的吸光度值(或样品) ----------------------------- x 100= %吸光度值 0标准的吸光度值 ? 图2:RIDASCREEN呋喃唑酮试剂盒的精密度 计算标准的值并绘成一个以呋喃唑酮浓度(ng/kg)为半对数 坐标系统的曲线图，曲线在150-1350ng/kg(ppt)范围内基本趋近15.文献(略) 为直线，相对应每一个样品的浓度(ng/kg)可以从校正曲线上读 出。 注意 为了获得样品中的呋喃唑酮的实际浓度(ng/kg)，从校正曲线 上读出的浓度值必须乘以相对应的稀释系数，稀释系数为2。 12. 灵敏度 ?RIDASCREEN呋喃唑酮试剂盒的平均检测下限约为50ng/kg。对 于肉样(鸡肉，猪肉，牛肉)，鱼，蛋和牛奶检测限大约是100ppt。 肝脏和虾的检测限大约是200ppt。