人绒毛膜促性腺激素与表皮生长因子的相互调节作用

人绒毛膜促性腺激素与 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 皮生长因子的相互调节作用 人绒毛膜促性腺激素与表皮生长因子的 3 相互调节作用 11 11 潘菊芬陈钊黄焕军宏王 () () 及绒毛膜促性腺激素 均具有种间同源性的特点, 运用小鼠体内试验 根据表皮生长因子 摘 要E GF hC G 及人绒毛组织体外培养模型两种手段, 研究 与 在体内的相互调节作用。结果表明一定剂量范围内的 E GF hC G 可促进小鼠 的合成与释放, 同样 也可增强人绒毛组织的分泌。提示: 与 之间可能存在某 hC G E GF E GF E GF hC G 种正反馈作用。 关键词 表皮生长因子 人绒毛膜促性腺激素 神经内分泌免疫网络 中图号 r12575Q 2 B ID IR EC T ION A L R E GU L A T ION B E TW E EN HU M A N CHO R IO N IC GON A DO T RO P IN A N D E P ID ERM A L GROW T H FA C TO R W a n g H on g , P a n J uf en , C h en Z h a o, H u a n g H u a nj u n (), , 300070D ep a r tm en t of Im m u n ology T ia nj in M ed ica l U n iv e rs ity T ia nj in () ’ A bstrac t It s w e ll k now n th a t bo th endo c r ine ho rm o ne h um an cho r io n ic go nado t rop in hC G and cy to k ine () 12 ƒep ide rm a l g row th fac to r E GF h ave sp ec ie s hom o lo gy be tw een h um an and m iceW e u sed BA L B c m ice fo r o b se r () , v ing th e effec t o f hC G o n m ice E GF m E GF p ro duc t io n in subm ax illa ry g land s and re lea se to b loo dand u se h u2 1m an cho r io n ic t issue cu ltu re fo r o b se rv ing th e effec t o f m E GF C G sec re t io nT h e re su lt s show ed th a t hC G o n th e 752150 ƒƒ7 , do se ranged o f IU dayp e r m o u se fo r day s in jec t io n enh anced th e p ro duc t io n and re lea se o f E GF in m ice 221and th e enh ancem en t w a s abo lish ed by u sing an t iΒo r an t iin tac t hC G M cA b to b lo ck hC GhC G sec re t io n a lso in2 2120ƒ1 15c rea sed by cho r io n ic t issue cu ltu re st im u la ted by E GF o n th e do se ranged o f p gm lIt is sugge sted th a t th e se 1m igh t be an po sit ive feedback re la t io n sh ip be tw een E GF and hC G , , Key words Ep ide rm a l g row th fac to rH um an cho r io n ic go nado t rop inPo sit ive feedh ack 人体内的神经内分泌调节网络是通过神经肽、, 但关于调节对一些内分泌腺的分泌也有调节作用1, 2 分泌或 对其合成产生的作用的报道尚 激素、细胞因子之间的相互作用来实现的。人绒 hC G hC G ( 少。鉴于 与 的作用都十分复杂, 尚有许多 毛 膜促性腺激素 , hC G E GF h um an cho r io n ic go n ado t rop in ) 未揭示的内容, 本工作探讨了在生理状态下两者相 是妊娠时母体绒毛膜滋养层细胞分泌的一种 hC G 互调节分泌的关系, 旨在为内分泌免疫调节网络的 糖蛋白激素, 其主要功能是营养黄体以维持妊娠。近 3, 4 理论提供一些实验依据, 为临床实践中调整妊娠时 年来研究表明 还参与免疫调节作用, 某些hC G 的免疫平衡、保证胎儿正常发育以及促进创伤愈合, 3辅助治疗肿瘤等提供理论参考。根据 与 E GF hC G 样多肽 肿瘤也能分泌 , 反映其生理作用的复hC G 的种间同源性的特点, 本研究利用纯系小鼠及人绒 ( 杂 性。表 皮 生 长 因 子 , ep ide rm a l g row th fac to r毛组织体外培养模型为工具, 观察在两者相互作用 ) 是颌下腺细胞分泌的一种细胞因子, 其生物学 E GF 下, 生理性分泌相应激素或细胞因子的规律。 效应十分广泛, 至今仍在继续揭示中, 现在已知它可 促进表、间、内皮及包、被膜细胞的生长、分化、发育, 促进创伤愈合, 影响肿瘤的发生发展等。近年报道它 3 天津市高教局资助项目1 天津医科大学免疫学教研室, 天津 300070 下 培 养 3后, 取 上 清 用 法 测 上 清 中 CO 2 d EL ISA 1 材料与方法 含 量。?双 抗 夹 心 法 测 培 养 上 清 中hC G EL ISA 7 ( 含量, 参考文献 法, 以混合单抗 抗 , hC G hC G Α 111 ) ( 材料日本三共 脏 器 株 式 会 社; 抗 hC G ) , 及抗完整 包被酶标板, 加入上清液样 hC G ΒH C G ( 单抗 本室制备, 经本院同位素研究室分型鉴 hC G 5本反应后, 洗涤; 加入抗 多克隆抗体, 反应后 H C G ) 定, 其中抗 单抗与各有关激素均无交叉反 hC G Β再加入酶标记二抗; 作用一定时间后加 显色, O PD 6 应; 小鼠 粗提品为本室参照法, 自雄鼠颌下 E GF 在490下测值。nm OD 腺提取及鉴定, 经用标准品 比较测定确定其 R IA 115 数据统计学处理 粗提 生物学活性测定 E GF 含量为240人 放射免疫分析药盒 ƒ; E GF p g m lE GF 用方差分析法及最小显著性差法处理; 对 hC G E GF ( ) 中国医学科学院基础医学所; 雄性小鼠ƒBA L B C 生成影响实验用等级相关分析法; 对 分E GF hC G ) 20?2, 北京实验动物中心。gg 泌水平影响用方差分析法进行统计检验。112 对 生成的影响试验 ?将 稀 hC G E GF hC G 释为不同剂量, 即每011分别为300、250、200、 m l 结果2 ( ) ( 150、100和50 , 分别给七组 每组6只雄性 20?IU g 211 对小鼠颌下腺合成储存 的结果及 ( ) ) hC G E GF 2小鼠皮下 腹股沟处注射, 011ƒrg BA L B C m l - 1- 1- 1- 1 合成的 释放入血的结果 由图1可见在一定剂 E GF 只r; 对照组注射生理盐水011r只r, 共dm ld- 1- 1 ) ( 量范围内的 , 150 只, 连续注射75rrhC G IU d 7, 7后 杀 鼠 取 其 颌 下 腺 及 血 清, 血 清 编 号 后d d - 1() 7, 对 产生有增高作用, 其中以150 r只rdE GF IU - 80?冻存备用。?颌下腺称重, 按9ƒ加冷蒸馏 C m lg - 1 () 6 为最佳剂量 < 0101, 超过上述剂量范围 dP hC G 水后冻融、匀浆、离心制成 粗提液, 编号后E GF 对 的产生则无促进作用。图1中还表明: 颌下腺 E GF - 80?储存。?放免法测定: 检测上述小 C E GF R IA 与血清内 含量的变化趋势是一致的, 此结果提 E GF 125 鼠颌下腺及血清内的 含量, 即用标记的抗E GF I 示 既能刺激雄鼠体内 产生及储存于颌 H C G E GF 125 下腺内, 又能促进其释放入血液中。 (() ) 原 2非标记抗原 与特异性抗体进 , IE GF E GF 行竞争结合, 产生抗原抗体复合物, 然后加入第二抗 体使复合物沉淀。离心分离游离相和结合相, 根据已 知 标准含量和结合率的百分数, 绘出标准曲 E GF 线。从标准曲线中可以查出被测样品中 含量, E GF 本法灵敏度215011。ƒp g m l 113 作用的阻断试验 上述试验证明不同剂 hC G 量 对小鼠颌下腺及血清中 水平有不同影hC G E GF 响, 其中150 ƒ011为 发挥作用最明显的剂IU m l hC G 量。为证实上述作用确为 所致, 分别用抗 hC G hC G 雄鼠经注射不同剂量 后颌下腺及血清内 , 抗完整 以及无关腹水等几种单抗分别 图 1亚基hC G E GFΒhC G 含量变化与150 011共同温育30, 之后按方法ƒIU m l hC G m in F ig 1 E ffec t o f d iffe ren t do se o f hC G o n E GF leve l ( ) 1. 2 给4 组 6 只组雄性 小鼠注射; 7后p ro deced by m ice subm ax illa ry g land and re lea sed to ƒƒBA L B C d m ice se rum 检测其颌下腺及血清中 含量, 仍采用 法。E GF R IA 114 对 产生的影响实验 ?人绒毛组 E GF hC G 212 对 作用的封闭试验结果 见图2。 hC G E GF 7 织体外培养模型的建立, 按参考文献法, 取妊娠40 ( ) 150 ƒ011经无关单抗封闭后, 对小鼠颌 H C G IU m l, 60吸宫术人工流产绒毛组织标本经三抗消毒处 d 下腺及血清内 水平的影响与未经封闭者相似E GF 理; 洗涤后, 仔细分离出没有蜕膜组织和血凝块的绒 ) ( 柱, 而用抗 2及抗完整 单 抗 封 闭 AhC G Β hC G 毛, 充分剪碎、过筛网、洗涤、称重后, 悬浮于20%则能阻断 对雄鼠颌下腺和血清内 水 hC G hC G E GF ()平的提高作用 , 柱。由此说明, 给以 后小 B C hC G 2中; 移入24孔 培养板, 51640ƒFC SR PM I Co sta r m g鼠颌下腺及血清内 含量的升高确实是由外源 E GF 孔。?与上述绒毛组织共培养: 将粗提小鼠E GF 性 的作用所致。hC G 液稀释为每毫升120、60、30、15 及715, 分别 E GF p g 加入绒毛组织培养板孔中, 一式三份, 在37 ?1 3 5%2 C 对 绒 毛 组 织 分 泌影 响 实 验 的 结 E GF hC G 233 本工作采用雄性小鼠作为 研究动物模型, E GF 这是因为雌性小鼠在生理条件下体内的 含量 E GF 极微, 不易检出, 而且体内有雌激素尿激素及孕期 升高等多种因素干扰。雄鼠情况与雌鼠者不同,C G 据文献报道正常雄鼠体内 含量是雌鼠的1 000E GF 倍, 且无上述激素的干扰。因此我们采用雄性小鼠而 非雌性小鼠以供 产生变化情况的观察之用。E GF 本文证明 在一定剂量范围内对 的合 hC G E GF 成与释放均有增强作用, 既往报道证明有关激素对 的作用是促进合成还是促进释放可有不用作 E GF 用。如 发现雄激素能促进颌下腺 的合Co h en E GF A : hC G+ ir re lavan t mA b; B: hC G+ an t i2hC G ΒmA b : + 2; : ChC Gan t iin tac t mA bD no rm a l 成与储存但不能促进颌下腺 的释放; 又如E GF 图 2 不同亚类的 单抗封闭 后对鼠颌下腺及血 hC G hC G 报导, 肾上腺素或电刺激颌下交感神经节能 B a r th e 清内 含量的影响 E GF 使颌下腺 浓度下降, 而血浆浓度升高。说明它()2E GF 2 F ig Co ncen t ra t io n o f E GF in subm ax illa ry g land A D () ’2’ and in se rum A D f rom m ice in jec ted by hC G们有促进颌下腺 释放的效应, 而对 合成 E GF E GF 无影响。我们的工作证明外源性 在一定的剂量hC G 果 见图3。可见 可促进 的分泌, 分泌量 E GF hC G - 1 - 1 ( ) 75, 150 只 共7可刺激雄鼠 范 围内 , rrIU d d 的增加基本成剂量依赖性, 但其中略有波动。经方差 的颌下腺合成储存量及血液中释放量的增加E GF 分析证明: 含量在15ƒ,ƒ范围内120E GF p g m l p gm l 由于 具有促进 细胞合成及分泌睾酮 hC G L edyd ig () 的促 分泌作用有显著意义 < 0101。hC G P 的作用, 其储存量的增加, 可能是通过睾酮起作用 的。关于这方面的问题尚待进一步探讨。 近年来他人的研究资料表明, 无论在体或离体 情况下 都能刺激胎盘, 使其 分泌增加。本 E GF hC G 实验证实了外源性 对机体 的释放也有促 hC G E GF 进作用; 与 之间可能存在某种正反馈机 E GF hC G 制, 但反馈的具体环节还不明了。这种正反馈机制对 于维持妊娠与胎儿发育有重要意义: 妊娠母体分泌 增多, 刺激 的合成和释放, 以便促进胎儿 hC G E GF 15ƒ: ; : 7A N o E GFBE GF p gm l 多种组织器官, 尤其是外胚层及中胚层的发育形 : 15ƒ; : 30ƒCE GF p gm lD E GF p gm l : 60ƒƒ; : 120EE GF p gm lFE GF p gm l 图3 体外人绒毛组织培养模型经不同浓度 刺激3 E GF d8后分泌 的水平 hC G 成, 是胎儿发育成熟的一个重要因素; 同时 E GF3 F ig L eve l o f hC G sec re ted by h um an cho r io n ic t issue cu l2 水平升高又能促进足够量的 分泌, 对于营养妊 hC G 3 tu re unde r th e st im u la t io n o f E GF fo r day s 娠黄体和滋养层细胞, 以及维持母体的内分泌平衡 3 讨论有重要作用。因此, 本工作通过 对 调节作hC G E GF 用这一侧面的研究, 证明了机体的免疫系统与神经() 利用表皮生长因子 与绒毛膜促性腺激素 E GF 内分泌系统之间的调节互为必要条件, 并且进一步 () 均具有种间同源性的特点, 我们采用人绒毛膜 C G为神经2内分泌2免疫调节网络理论提供了一些实验 促性腺激素与小鼠表皮生长因子作为研究该激素对 依据。 该细胞因子产生分泌过程中的调节作用。与C laze 的 氨 基 酸 序 列 有等 发 现 与 Co h en m E GF h E GF 参考文献18 70% 的同源性, 且均可刺激纤维细胞和角膜上皮. 1 B la lo ck J EA m o lecu la r ba sis fo r b id i rec t io na l comm u2 细胞增殖以及促进新生鼠眼睑早开等。此外, h E GF 2n ica t io n be tw een th e imm une and neu ro endo c r ine sy s2 和 均能与相互的 受体结合, 人与小鼠 m E GF E GF 1, 1989; 69: 1tem sP h y sio l R ev 的 有同源性这已公认。据此本工作利用 C G h E GF 杨贵贞1“神经2内分泌2免疫调节网络”研究之我见1中国 2 与 有许多相似性的特点, 来进行 与 m E GF E GF 免疫学杂志, 1990; 6: 120 相互调节作用的研究。hC G ()下转第248页 a s an o b stac le to adop t ive imm uno th e rap y o f th e P 815 影响机制有待进一步研究。 在影响免疫的因素 V O 1 ,1981; 154 m a sto cy tom a and it s m e ta sta se sJ E xp M ed 里, 本文重点考虑了肿瘤免疫抑制细胞、荷瘤动物及 () 4: 1033 人体内存在的对肿瘤免疫特异 细胞等因素。 许T s , , 18 F u jim o to SG reene M ISeho n A H R egu la t io n o f th e 多肿瘤免疫方法中都要考虑这种因素, 如特异主动9 , 10 11 , 12 1 imm une re spo n se to tum o r an t igen sI imm uno sup 2 肿瘤免疫, 特异被动免疫, 在免疫中, V O 21 , 1976;p re sso r ce lls in tum o rbea r ing ho st sJ Imm uno l 这种因素同样存在。我们认为确实存在抑制细胞, 由 13 () 166 3: 791 于 细胞对环磷酰胺敏感, 本实验中用环磷酰 T s , 1 9 胺抑制 细胞, 使免疫的效果加强, 小鼠的存 D en t L A F in lay JJJ In v ivo de tec t io n and p a r t ia l ch a r2 T s V O 活率大大提高。 ac te r iza t io n o f effec to r and supp re sso r ce ll pop u la t io n s 1in sp leen s o f m ice w ith la rge m e ta sta t ic f ib ro sa rcom a s () B r t J C ance r, 1985; 51 4: 533 参考文献, , , , G reenbe rg PD C h eeve r M A F efe r A e t a lE rad ica2 10 t io n o f d issem ina ted m u r ine leuk em ia by ch em o im 2 李 燕, 陆 虹, 王新江等 1 多种病毒联合免疫治疗中、 1 晚期荷瘤小鼠的初步研究 1 大连医科大学学报, 1995; m uno th e rap y w ith cyc lop ho sp h am ide and adop t ive ly () 17 2: 92 21+ 221 t ran sfe r red imm une syngene ic L y tlym p ho cy te sJ姜勇男, 陆 虹, 王新江, 等 1 病毒免疫治疗老年小鼠 () , 1981; 154 3: 952E xp M ed 2 () 腹水瘤的研究 1 延边医学院学报, 1994; 17 1: 29180 S 12N o r th R J C yc lop ho sp h am idefac ilita ted adop t ive im 2 11 , , , 1 Boo n T V an SD IV an PA e t a lImm uno gen ic va r ian t s m uno th e rap y o f an e stab lish ed tum o r dep end s o n e lim i2 3 8151o b ta ined by m u tagene sis o f m o u se m a sto cy tom a P 21 na t io n o f tum o rinduced supp re sso r T ce llsJ E xp 21 , 1980;? T lym p ho cy tem ed ia ted cy to ly sisJ E xp M ed () , 1982; 155 4: 1063M ed () 152 5: 1184 G la se r M 1A ugm en ta t io n o f sp ec if ic imm une re spo n se a2 12 1H lavayo va E Svec J A llo gen ic m o d if ica t io n o f ra t sa rco 2 240ga in st a syngene ic SV induced sa rcom a in m ice by de2 4 1 m a ce lls in v it ro by stap h y lo co cca l exo to x inN eop la s2 1p le t io n o f supp re sso r T ce lls w ith cyc lop ho sp h am ide () , 1983; 30 6: 667m a () , 1979; 48 2: 339C e ll Imm uno l 陈 琪, 黄桢祥 1 病毒感染增强肿瘤细胞抗原性的研 , , , , T ilk i A F Sch aaf L N V an A A e t a lR educed tum o r 13 5 () 究 1中华实验和临床病毒学杂志, 1988; 2 1: 13 2g row th af te r low do se ir rad ia t io n o r imm un iza t io n a2 , 1P e r ry L L B a rzaga M E K ine t ic s and sp ec if ic ity o f T and 1 ga in st b la st ic supp re sso r T ce llsP ro c N a t l A cad Sc i 6 B ce ll re spo n se s in re lap sing exp e r im en ta l a lle rg ic en2 () , 1981; 78 3: 1809U SA 1987; 138: 1434 1 ,cep h a lom ye lit isJ Imm uno l ()1997204230 收稿; 1997206207 修回 , 127 D ye E SN o r th R J T ce llm ed ia ted imm uno supp re ssio n 6 1, Savage CR JR Co h en S tan lleyEp ide rm a l g row th fac to r() 上接第 234 页 , and a new de r iva t iverap id iso la t io n p ro cedu re s and b io 2 3 R ick e t t s RM , Jo ne s DB , D iffe ren t ia l effec t o f h um an 1, 1972;lo g ica l and ch em ica l ch a rac te r iza t io nJ B io ch em 2 cho r io n ic go nado t rop in o n lym p ho cy te p ro life ra t io n in () 247 23: 7609 1,duced by m ito gen sJ o f R ep ro duc t ive Imm uno lo gy 邓为民, 潘菊芬 1 细胞因子对人绒毛膜组织 分泌的 hC G 7 1985; 7: 225 影响 1 中国免疫学杂志, 1996; 12: 78 潘菊芬, 邱香果, 刘炳仁, 等 1 人绒毛膜促性腺激素的免 4 11. 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