黄曲霉素的
检测
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方法
食品中黄曲霉毒素的检测方法，现状及发展方向 1 食用油中黄曲霉毒素的分析检测方法
目前检测黄曲霉毒素的方法主要有薄层色谱法 (TLC)、高效液相色谱法(HPLC)、以酶联免疫为基 础的免疫分析、免疫亲和分析法如微孔板酶联免疫吸附分析法(EusA)以及生物传感器法等。
1,1薄层色谱法(TLC)
TLC法是传统的检测AFB 最常用方法,是应用 最早、最广的分离、分析技术,曾是我国测定食品及 饲料中AFB,的国家
标准
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方法之一,其原理是,样品 经提取、浓缩、薄层分离后,在365 Bin波长的紫外光 照射下,黄曲霉毒素B】、B2产生紫色荧光,G 、G2产 生绿色荧光,然后根据其在薄层板上显示的荧光的 最低检出量来定量。其优点是,所用的试剂、设备简 单,费用低廉,容易掌握,适用大量样品的分离、筛 选,一般的实验室均可开展,属于定性和半定量的功 能。为了提高薄层层析法的精度,还建立薄层扫描 等其他的方法来确定黄曲霉毒素,它是薄层层析法 的仪器化,样品的处理和层析条件与薄层层析法相 同,只是在标准品的设定和结果判定上有所不同。 如卢艳杰等介绍了一种简单、微型、低功率的光度检 测器用于定量薄层板上的AFT,该装置简单、便宜可 代替薄层扫描仪等其他测定AFT含量的设备,最低 检测限可达1 rig,符合欧洲对AFT规定的限量。卢 艳杰等介绍了过压薄层色谱法(OPLC)结合光度计, 成功地对多种食品中的黄曲霉毒素B】、B2、G】和G2 进行测定,同时该方法还适用于样品的提纯和分离, 一次可对十个样品进行分析,做到快速、有效、低耗 地定量食品中AFT[引。该法的局限性与不足之处 在于薄层色谱法检测AFT的操作步骤多,样品前处 理烦琐,并且提取和净化效果不够理想,提取
液中杂质较多,因而在展开时影响斑点的荧光度,导致灵 敏度下降。灵敏度低、重现差、操作烦琐、时间长且 安全性差等缺点,已越来越不适用现代分析的要求。
1,2高效液相色谱法(HPLC)
高效液相色谱法具有高效、快速、准确性好、灵 敏度高、重现性好、检测限低、定量准确的特点,可同时分离多种黄曲霉毒素,操作简便,适于大批量样品的分析。倪梅林等_6J以C18柱为固定相,以水+异丙醇+乙腈(80+12+8)为流动相,用荧光检测器进行检测,其激发波长365 Bin,发射波长450 nn3,样品用甲醇和水混合液进行萃取,随后进行衍生化处理,处理后溶解于流动相,进行液相色谱测定。该法的最低检出限为1,0 kg。对浓度为25 t~g,mL(相当于样品5,0 g,kg)的样液进行10次检测,测定精密度分别为,G1,l1,84,,B】,4,28,,G2,13,41,,B2,14,20,。李培武等介绍了利用cI 键合硅石作为基质固相分散提取法(MsPD)的吸附剂,以乙腈为洗脱剂,HPLC结合荧光检测器对花生中的四种AFT进行测定,回收率为78,,86,,相对标准偏差是4,一7,,检测限范围达0,125,2,5 ng,g。高效液相色谱法是目前国内测定黄曲霉毒素使用最多、也是比较权威的方法,灵敏度高、精度高、能同时分析多种黄曲霉毒素类型,但该法的样品前处理相对复杂,检测周期长、程序复杂、所需试剂繁多、操作时需要专门的技术人员,难以满足现代检测快速、简捷、现场化的要求。
1,3免疫分析法
免疫化学分析法(Immunochemical Methods)是以抗原抗体的免疫化学反应为基础进行抗原抗体含量测定的方法。该法具有高度的特异性、灵敏性、快速
简便、分析费用低、重现性好、短时间内能处理大量样品和易于普及等优点。用于黄曲霉毒素测定的免疫分析法主要有酶联免疫吸附法(EIJSA)、放射免疫测定(RIA)、流动注射免疫测定法(n—IA)等。
1,4金标试纸法
金标试纸法是利用单克隆抗体而设计的固相免疫分析法,可一步式检测AFT。一步式AFT快速检测纸法可在5—10 min完成对样品中AFB 的定性测定,具有简单、快速、灵敏度高等特点,无须仪器设备配合测定,检测既可在实验室中进行,也可在农场、饲料混合车间等进行实地测定,对黄曲霉毒素定性检测准确度在85,以上,灵敏度为4 ng,mL,可测出样品中20 ng,g的黄曲霉毒素_1 。Sun Xiu lan等合成一种对AFB 具有特异性的抗体金标探针,纳米金标探针用于免疫色谱法对AFB 分析,完成一个样品分析所需要的时间少于10 rnin,比ELISA少6 10 min,在标准品的对照下,最低检测限可达2,5 ng,mL。 1,5生物传感器法
生物传感器是将生物技术和电子技术相结合以生物学组件作为主要功能性元件,能够感受规定的被测量,并按照一定规律将其转换成可识别信号的器件或装置,一般由生物识别元件、转换元件及机械元件和电气元件所组成。利用分子间特异的亲和性制备的亲和型生物传感器为免疫传感器[12]。生物传感器具有高选择性、响应快,操作简单、携带方便和适合于现场检测等优点,对生物传感器检测黄曲霉毒素的研究是各国科学家积极探索的热点课题。
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