缺氧缺血性脑病新生儿血清神经元特异性烯醇化酶、髓鞘碱性蛋白与

缺氧缺血性脑病新生儿血清神经元特异性烯醇化酶、髓鞘碱性蛋白与 河北医科大学 硕士学位论文缺氧缺血性脑病新生儿血清神经元特异性烯醇化酶、髓鞘碱性 蛋白与游离钙浓度的关系 姓名:王红英 申请学位级别:硕士 专业:儿科学 指导教师:孙素真 20070301 中文摘要缺氧缺血性脑病新生儿血清神经元特异性烯醇化酶、 髓鞘碱性蛋白与游离钙浓度的关系 摘 要 目的:新生儿缺氧缺血性脑病(,,,,,,; ,,;,,,,;,,;,,,,,,,,,,吼,，,)是指在围产期窒息缺氧导致脑的缺氧缺血性损伤，临床上可出现一系列中枢神经系统异常的表现。病情重，病死率高，可导致智力低下、癫痫、脑性瘫痪等神经系统后遗症，是足月儿围产期脑损伤的最常见原因。早期发现、早期干预越来越受到人们的重视。传统的脑脊液检查无法评价脑损伤及其严重程度，,,、,,，往往需要病变相对明显时价值较大。因此，早期客观的生化指标对,，,的诊断、预后及治疗均有帮助。本研究通过测定,，,患儿生后,,、,,、,,神经元特异性烯醇化酶(,,,,,, ,,,;,,,; ,,,,,,,，,,,)、髓鞘碱蛋白(,,,,,, ,,,, ,,,,,,,，,,,)与血清游离钙(,,,，)的水平变化来探讨,,,、,,,、,,,，在,，,临床诊断、分度、病情判断中的价值，更好地指导临床工作，从而降低病死率，减少神经系统后遗症。 对象及方法:实验组,，,患儿,,例均为,,,,年,,月至,,,,年,月于邯郸市第一医院薪生儿科住院患儿，所有病例符合,,,,年长沙会议制订的《新生儿缺氧缺血性脑病诊断 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 》，根据意识障碍、肌张力改变、原始反射异常、惊厥等临床表现及;,检查结果分为轻度,,例，中度,,例，重度,,例。其中轻度,，,组平均胎龄,,(,,,,,(,,周，平均体重,(,,?,(,,,,，男,,例，女,例;中度,，,组平均胎龄,,(,,? 中文摘要,(,,周，平均体重,(,,?,(,,,,，男,,例，女,,例;重度,，,组平均胎龄,,(,,，,,(,,周，平均体重,(,,?,，,,,,，男,,例，女,,例。对照组选用同期出生在我院产科的正常新生儿,,例，平均胎龄,,(,,?, ,,周，平均体重,(,,?,(,,,,，男,,例，女,,例。实验组和对照组胎龄、体重、性别在统计学意义上无显著性差异。实验组和对照组分别于生后,,、,,、,,取静脉血,,,，静置,,分钟后，,,,,,,,离心,,分钟，分离血清，并分置于,,,,,,,,,管中，一,,?冰箱保存待测。实验前将样品置于室温中复融，混匀，再次,,,,,,,离心,,分钟，取血清测定。避免反复冻融，除去溶血标本。采用放射免疫分析法测定,,,含量，双抗体夹心酶联免疫法测定,,,，日本产,,,,,,,型血液电解质分析仪测定,,“，均严格按照说明 书 关于书的成语关于读书的排比句社区图书漂流公约怎么写关于读书的小报汉书pdf 操作规程进行。所有数据均采用,,,,,,(,统计分析软件进行处理。显著水平为,,,(,,，数据采用均数?标准差(又～,)。检验前各项数据进行正态性检验和方差齐性检验。各组间和各时间点的数据比较采用重复测量设计资料方差分析。 结果:四组胎龄、体重、性别比较无差异，,值均,,(,,。用,,,,,,,,,,(,,,,,,,方法进行正态性检验，各组数据均符合正态分布，经方差齐性检验方差为齐性。四个检测组组间生后,,、,,、,,同一时间点血浆,,,、,,,、,,,，含量有显著性差异(,,,(,,)，同一时间点四个检测组之间两两比较，生后,,、,,血浆,,,、,,,、,,,，含量有显著性差异(,,,(,,)，生后,,对照组与轻度,，,组血浆,,,含量无显著性差异(,,,(,,)，生后,,对照组与轻度,，,组、对照组 与中度,，,组、轻度,，,组与中度,，,组之间血浆,,,含量无 中文摘要显著性差异(,,,(,,)，生后,,对照组与轻度,，,组之间血浆,,,，含量无显著性差异(,,,(,,)，其余两两比较，均有显著性差异(,,,(,,)。对照组内三个时间点血浆,,,、,,,、,,,，含量无显著性差异(,,,(,,)。实验组内三个时间点血浆,,,、,,,、,,“含量有显著性差异(,,,(,,)，实验组内三个时间点两两比较，血浆,,,、,,,、,,,，含量有显著性差异(,,,(,,)。 结论:,(,，,各组,,，,,血清,,,水平均高于对照组，,，,程度越重，,,,水平越高。,,,水平以生后,,最高，,,后开始下降，轻度,，,患儿,,后基本恢复正常，而中、重度,，,患儿仍保持较高水平，说明中、重度,，,患儿生后,,仍有脑损伤持续存在，持续升高明显者提示预后不良;血清,,,在轻度,，,组与对照组比较就有明显升高且出现在生后第一天，说明,,,水平可作为早期脑损伤判断的敏感指标。 ,(重度组,，,患儿,,,,,水平升高最明显，,,其水平下降，但仍高于对照组。重度组,，,患儿,,,水平与中度组、轻度组、对照组相比有显著性差异，生后,,轻、中度,，,组与对照组相比无明显差异，提示,,,于急性期升高明显，且持续时间长的患儿病情较重。 ,(重度,，,患儿,,,、,,,水平均较高，提示脑灰质、脑白质均受损。 ,(生后,,、,,轻、中、重度,，,组血清,,,，浓度较对照组有显著差异，病情越重，下降越明显，生后,,轻度,，,组血清,,浓度恢复正常，而中、重度,，,组仍低于对照组。提示血浆,,,，的测定可初步估测,，,的轻重，显著下降可能预后不良。 中文摘要 综上所述，缺氧缺血性脑病新生儿急性期,,,、,,,均升高，病情重者升高明显，恢复期逐渐下降，可作为早期判断,，,脑损伤程度的生化指标，,，,病情越重，血清,,,，降低越明显。血浆,,,敏感性较高，联合,,,、,,,，检测能更好地判断病情轻重，为临床工作者早期诊治提供依据，必要时延长治疗并早期给予神经系统干预，从而降低病死率，减少神经系统后遗症。 关键词:缺氧缺血性脑病;新生儿;神经元特异性烯醇化 酶;髓鞘碱性蛋白;游离钙。 英文摘要 ,,, ,,,,,,,,,,,, ,, ,,,,, ,,,,,, ,,,;,,,; ,,,,,,,，,,,,,, ,,,, ,,,,,,, ,,, ,,,,, ,,,, ;,,;,,, ,,,,,, ,, ,,,,,,,, ,,,, ,,,,,,; ,,;,,,,; ,,;,,,,,,,,,,, ,,,,,,,, ,,,,;,,,,:,,,,,,; ,,;,,,,; ,,;,,,,,,,,,,, ,, , ;,,,,,,,,,,,, ,,, ,,, ,,,,,,,,;,,,,,,,, ,,,,,,,, ;,,,, ,,,,,, ,,,,,,,,;—,,;,,,,; ,,,,, ,,,,,,(,,,,, ,,,, , ,,,,,, ,, ;,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,, ,,,,,,,, ,,,,,,,,;, ,, ;,,,,;,,(,,,,,,;,,;,,,,; ,,;,,,,,,,,,,, ;,,,, ,,, ,, ,,;, ,,？,,,, ,, ,,,,,,,,,, ,,,,,, ,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,，,,,,,,,,,,,,,,，,,,,,,,, ,,;(,,,,,, ,,,,;, ,,,, ,,,,,,,,;, ,, ,,,,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,, ,,,(,,,,,,,,,,, ;,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,, ;,,’, ,,,,,,,, ,,,,, ,,,,,, ,,, ,,, ,,,,,,,,,(,,,,,,, ,,，,,， ,,, ,,,, ,,,,, ,,,,, ,,,,,,,;,,, ,,,,,,,,(,,,,, ,,,,, ,,, ,,,,;,,,, ,,,,;,,,,, ,,, ,,,, ,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,,，,,,,,,,,,，,,,;,,, ,,, ,,,,,,, ,, ,,,,,,; ,,;,,,,;,,;,,,,,,,,,,,(,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,～,,,, ,,, ,,, ,，,,, ,，,,, , ,,,,,,,,,, ;,,,,,, ,, ,,,,, ,,,,,, ,,,;,,,; ,,,,,,,(,,,)，,,,,,, ,,,, ,,,,,,,(,,,),,, ,,,,, ,,,, ;,,;,,, ,, , ,,,,,,,, ,,,,,,,, ,,,, ,,,,,,;,,,;,,,,; 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,,,,,,,,,,, ,,, ,,,, ,,,,,,, ,,,,, ,, ,,,,,,, ,,,,;, ,,,,,,,,, ,,, ,,？,,,, ,, ,,, ,,,,,,, ,,,,,,( , 英文摘要 ,,, ,,,,,:,,,,,,;—,,;,,,,; ,,;,,,,,,,,,,,，,,,,,,,，,,,,, ,,,,; ,,,,,,,，,,,,,,—,,,;,,,; ,,,,,,,，,,,,, ,,,, ;,,;,,,( , 研究论文缺氧缺血性脑病新生儿血清神经元特异性烯醇化酶、 髓鞘碱性蛋白与游离钙浓度的关系 刖 吾 新生儿缺氧缺血性脑病(,,,,,,; ,,;,,,,;,,;,,,,,,,,,,,，,，,)是宫内窘迫、新生儿窒息等原因所致的脑部缺氧缺血性病变，是围产期新生儿脑损伤最常见的原因。早期诊断,，,对于降低新生儿死亡率和减轻神经系统后遗症具有重要的意义。但是迄今为止，仍没有可靠、简便的方法来早期预测窒息新生儿是否发生,，,。在,，,早期，需要明确脑损伤程度以指导治疗和神经系统早期干预。近年来，国内外学者在脑损伤生化指标改变方面进行了探讨，先后在脑脊液或血清中发现了一些神经系统损伤的特殊蛋白标志物，但这些物质在,，,临床诊治中的应用还很少。,，,患儿钙通道的开放造成脑细胞的损伤和死亡是公认的致病学说，有些学者发现在脑损伤后常伴有血清,,,，水平的改变。在这些研究的基础上，本文通过测定三组不同程度缺氧缺血性脑病患儿生后,,、,,(急性期)，,,(恢复期)血浆中,,,、,,,、;,,，水平变化，探讨其在新生儿,，,中的作用机制，作为判断病情程度的依据之一，并进一步指导临床工作者早期了解病情，及时救治，从而降低病死率，减少神经系统后遗症 材料与方法,研究对象 研究论文 实验组 新生儿缺氧缺血性脑病,,例，均为,,,,年,,月至,,,,年,月于邯郸市第一医院新生儿科住院患儿，所有病例符合,,,,年长沙会议制订的《新生儿缺氧缺血性脑病诊断标准》,】，根据意识障碍、肌张力改变、原始反射异常、惊厥等临床表现及,,检查结果分为轻度,,例，中度,,例，重度,,例。其中轻度,，,组平均胎龄,,(,,?,(,,周，平均体重,(,,,,，,(,,,,，男,,例，女,例;中度,，,组平均胎龄,,(,,?,(,,周，平均体重,(,,,，,(,,,,，男,,例，女,,例;重度,，,组平均胎龄,,(,,?,(,,周，平均体重,(,,?,(,,,,，男,,例，女,,例。排除先天性畸形，富内感染及遗传代谢性疾病。 对照组 选邯郸市第一医院同一时期产科分娩的要求寄养在新生儿科的健康新生儿,,例，经查体及实验室检查无呼吸、循环及神经系统疾病者。平均胎龄,,(,,?,(, ,周，平均体重,(,,?,(,,,,，男,,例，女,,例。 附:新生儿缺氧缺血性脑病临床分度标准。 轻度:兴奋、抑制交替，拥抱反射活跃，吸吮反射正常，肌张力正常或稍高，可有肌阵挛，无中枢性呼吸衰竭，瞳孔正常或扩大，症状在,,,内消失。 中度: 嗜睡，拥抱、吸吮反射减弱，肌张力减低，常有惊厥，有中枢性呼吸衰竭，瞳孔常缩小，症状在,,,内消失。 重度: 昏迷，拥抱、吸吮反射消失，松软，或间歇性伸肌张力增高，有惊厥，可呈持续状态，中枢性呼吸衰竭明显，瞳孔不对称或扩大，对光反射迟钝，症状可持续数周。,标本的采集及处理 ,, 研究论文 实验组和对照组于生后,,、,,、,,分别静脉血,,,。具体方法为:应用,。头皮针对新生儿手背、足背静脉采血，使血液自行滴入标有刻度的试管中，取血后置,,,,,后，,,,,,,,离心,,分钟，分离血清，并分置于,,,,,,,,,管中， 一,,?冰箱保存待测。实验前将样品置于室温中复融，混匀，再次,,,,,,,离心,,分钟，取血清测定。避免反复冻融，除去溶血标本。,测定方法,(, ,,,的检测 检测原理 该试剂盒采用放射免疫分析技术，测定,,,含量。被检测样品中的,,,与包被球上的,,,抗体结合，再与,,,，(抗,,,结合，形成免疫复合物，测定包被球的,,,值，即可检测样品中的,,,浓度，所用试剂盒购自北京北方生物技术研究所。 所用仪器 ,,(,,,,全自动,一计数仪产自北京核仪器厂。 操作步骤 ,、圆底聚苯己烯试管进行编号。 ,,, 标准管 样品管 ,, ,,, ,,—,, ,,, 样品 , 各加入一粒包被球 研究论文 ,、 摇匀，,,?温育,小时。 第一,, 包被球 步 ,、 吸出反应液，用蒸馏水洗涤,—,次，每管每次 洗涤液不少于,,,，最后一次尽量吸干。 标记物 ,,, ,,, ,,, ,、 摇匀，,,?温育,小时。 ,、 吸出反应液，用蒸馏水洗涤,—,次，每管每次 第二步 洗涤液不少于,,,，最后一次尽量吸干。 ,、 将反应珠用吸入纸吸干后移到一干净试管中， 测定其,,,值。 结果计算 ,)将双管,,,值平均。 ,)各标准点及样品的,,,值减去,,,的,,,值。 ,)以标准物浓度为横坐标，对应的,,,值为纵坐标， 在双对数纸上绘出工作曲线，根据样品的,,,值在工作 曲线上查出相应的浓度值。,(, ,,,的检测 检测原理 ,,,试剂盒采用双抗体夹心,,，,,法，用抗人,,,单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的,,,与单抗结合，加入生物素化的抗人,,,，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的,,,,,,,,,,,,与生物素结合，加入酶底物,,,，出现黄色，加终止液硫酸，颜色变深，在,,,,,处测,,值，,,,浓度与,,值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中,,,浓度。 所用仪器 ,,,,,, ,,,酶标仪 研究论文 操作步骤 ,)建立标准曲线 ,)加样:待测品孔每孔各加入待测样品,,, , ,。 ,)将反应板充分混匀后置,,?,小时。 ,)洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤,,,次，向滤纸 上印干。 ,)每孔中加入第一抗体工作液,,“,。 ,)将反应板置,,”,,小时。 ,)洗板。 ,)每孔加酶标抗体工作液,,, , ,。 ,)将反应板置,,?,小时。 ,,)洗板。 ,,)每孔加入底物工作液,,, ,，, ,，置,,?暗处反应,,,, 分钟。 ,,)每孔加,滴终止液混匀。 ,,)在,,,,,处测吸光值。 结果计算 ,)所有,,值都应减去空白值后再行计算。 ,、以标准品,,、,、,(,、,(,,、,(,,、,(,,、,(,,,、 ,,‖，，,,之,,值在坐标纸上做图，画出标准曲线。 ,)根据样品,,值在该 曲线图上查出相应,,,含量。,, ,,,，检测 由日本产,,,,,,,型血液电解质分析仪吸样后直接读数。质量控制 实验遵循随机对照原则，应用,,,,,,(,统计软件,,,,,,, 研究论文去除奇异值和极值，以减少对实验结果分析的影响。,(统计学处理 所有数据采用,,,,,,(,统计分析软件进行处理。各组数据用均数?标准差(又～,)描述。,组受试对象间的均衡性检验使用单因素方差分析和, ,检验。研究指标在各组间和各时间点间的差别使用重复测量设计资料方差分析，首先对资料进行球对称性检验，当不满足球对称性条件时，使用,,,,,,,,,,(,,,,,,,(,(,)法的球对称系数进行校正，若得到差别有统计学意义时，再进一步两两比较。球对称检验的检验水准,,,(,,，组间和时间点间比较的检验水准,,,(,,。 结 果,新生儿缺氧缺血性脑病组与对照组一般资料比较 实验数据全部来自正态总体，胎龄、体重四组间比较用单因素方差分析，性别比较用卡方检验，,值均,,(,,，说明四组间无差别。参见表,，图,(,。,同一时间点四个检测组间资料比较,(,四个检测组生后,,、,,、,,同一时间点血浆,,,含量 比较，生后,,、,,、,,同一时问点血浆含量两两比较。 组间资料比较用重复测量设计资料方差分析。结果表明;四个检测组组间生后,,、,,、,,血浆,,,含量有显著性差异(,,,(,,)，参见表,。两两比较生后,,、,,血浆,,,含量有显著性差异(,,,(,,)，生后,,除对照组与轻度,，,组之间无显著性差异(,,,(,,)外，其余比较均有显著性差异 研究论文 (,,,(,,)，参见表,，图,。,(,四个检测组生后,,、,,、,,同一时间点血浆,,,含量 比较，生后,,、,,、,,同一时间点血浆,,,含量两两比 较。 组间资料比较用重复测量设计资料方差分析。结果表明，四个检测组间生后，,、,,、,,同一时闾点血浆,,,含量有显著性差异(,,,(,,)，参见表,。两两比较生后,,、,,同一时间点血浆,,,含量有显著性差异(,,,(,,)，生后,,对照组与轻度,，,组、对照组与中度,，,组、轻度组与中度组之间无显著性差异(,,,(,,)，其余比较均有显著性差异(,,,(,,)，参见表,，图,。,(,四个检测组生后,,、,,、,,同一时间点血浆,,:，含量比 较，生后,,、,,、,,同一时间点血浆,,,，含量两两比较。 组间资料比较用重复测量设计资料方差分析。结果表明，四个检测组间生后,,、,,、,,同一时间点血浆;,,，含量有显著性差异(,,,(,,)，参见表,,。两两比较生后,,、,,同一时间点血浆;,,，含量有显著性差异(,,,(,,)，生后,,除对照组与轻度,，,组之间无显著性差异(,,,(,,)外，其余比较均有显著性差异(,,,(,,)，参见表,,，图,。, 四个检测组三个时间点之间组内资料比较,(,四个检测组生后,,、,,、,,三个时间点血浆,,,含量比较，三个实验组生后,,、,,、,,各时间点间血浆,,,含量两两比较。 组内资料比较用重复测量设计资料方差分析。结果表明，对照组三个时间点血浆,,,含量无显著性差异(,,,(,,)。实验组一个组内三个时间点血浆,,,含量有显著性差异(, 研究论文,,(,,)，参见表,,。实验组三个时间点两两比较，血浆,,,含量有显著性差异(,,,(,,)，参见表,,，图,。,(,四个检测组生后,,、,,、,,三个时间点血浆,,,含量比较，三个实验组生后,,、,,、,,各时间点间血浆,,,含量两两比较。 组内资料比较用重复测量设计资料方差分析。 结果表明，对照组三个时间点血浆,,,含量无显著性差异(,,,(,,)。实验组一个组内三个时间点血浆,,,含量有显著性差异(,,,(,,)，参见表,,。实验组三个时间点两两比较，血浆,,,含量有显著性差异(,,,(,,)，参见表,,，图,。,(,四个检测组生后,,、,,、,,三个时间点血浆;,,，含量比较，三个实验组生后,,、,,、,,各时间点间血浆,,,，含量两两比较。 组内资料比较用重复测量设计资料方差分析。结果表明，对照组三个时间点血浆,,,，含量无显著性差异(,,,(,,)。实验组一个组内三个时间点血浆,,,，含量有显著性差异(,,,(,,)，参见表,,。实验组三个时间点两两比较，血浆,,,，含量有显著性差异(,,,(,,)，参见表,,，图,。,三个指标的球对称性检验，参见表,。,,,(,,，球对称，不需使用球对称系数校正。,,,(,,，不满足球对称，使用,(,,系数校正。,分别对三个指标的方差分析结果参见表,,,。,,,(,,不同的时间会影响每个组的观测指标，因为有交互作用，所以需要分析单独效应，即:同一时间几个组之间比较，同一个组三个时间点之间比较。,分开各个处理组进行球对称性检验，参见表,,。,,,(,,， 研究论文球对称，不需使用球对称系数校正。,,,(,,，不满足球对称，使用,—, ,系数校正，得到差别有统计学意义时再进行两两比较。 研究论文 附 图芏,,啦摹,,孚蚺西 ,, , ,,,,,,,,,,,抽, ,, ,，,,,.