中国汉族人Rh血型系统D阴性表型的分子机理研究

中国汉族人Rh血型系统D阴性表型的分子机理研究 中国汉族人Rh血型系统D阴性表型的分子 机理研究 ? 输血研究? 山东医药2006年第46卷第1o期 金鸡辞旧,瑞犬迎新,值此佳年盛世,山东省血液中心与《山东医药》携手合作?共同推出 "输血研究"栏目.本栏目旨在贯彻党和国家的卫生工作方针政策,坚持临床与基础结合,理 论与实践结合,普及与提高结合,充分展示血液领域取得的新成果,新技术,新理论,新经验, 反映国内外最新的输血研究动态,为各级各类医疗卫生机构和输血工作者,提供一个促进学 术交流和信息传播的平台.我们热切希望和广大作者,读者一道精诚合作,并肩耕耘,为全面 提高我省输血医学科研水平,促进输血事业发展做出贡献. 山东省血液中心党委书记李信业 中国汉族人Rh血型系统D阴性表型的分子机理研究 徐群.,乔文本.,李京..吕红娟.,孙波.,刘德春.,张建业 (1山东大学医学院,山东济南250012;2山东省血液中心) 为确定中国汉族人Rh血型系统D阴性表型个体Rh基 因的遗传机制,我们采用聚合酶链反应一序列特异性引物 (PCR—SSP)方法扩增RhD基因第2,3,4,5,6,7,9,10外显子 以及Rh基因内含子4.以评价和探明中国汉族人RhD基因 的基因结构. 资料与方法:l3l例RhD阴性个体均为汉族,无亲缘关 系.采用标准血清学方法检测Rh表现型,抗血清购自美国 Gamma公司采用盐析方法从全血中制备基因组DNA.RhD 和RhCE的基因定型采用PCR—SSP方法.根据已发表的序列 (GenBank登录号为M34015,X63094,X63097) 设计 领导形象设计圆作业设计ao工艺污水处理厂设计附属工程施工组织设计清扫机器人结构设计 Rh基因 特异性引物,扩增Ce,CE,ce和cE等位基因IRh内含子4; RhD外显子2,3,4,5,67,9,10.引物8F和8R依据PCR产 物的大小用于鉴定RhD和RhCE内含子4.所有PCR反应中 都含有引物HGHF(5'-GCCTTCCCAACCATTCCCTT一3) 和HGHR(5一TCACGGATTTCTGTTGTGTTTC一3).用于 扩增长度为429bp的内对照质控带PCR反应体系中含有 0.1,0.5g基因组DNA.10mmolTrisHCl(pH8.3). 50mmolKCI,1.5mmolMgClz.0.001(w/v)明胶.0.2mmol dNTPs,l~mol引物和0.5U的TaqDNA聚合酶(美国 Promega公司生产).反应总体积为1Ol.样品首先于95?变 性5rain,然后进入3O个循环PCR反应.热循环仪为美国PE 公司9600型.循环参数为:95?30s,60?30s,72?90s.最后 于72?延伸5min. 结果;?血清学实验:用单克隆抗.D抗体检测RhD表现 型.若没有凝集,再进行抗球蛋白试验和吸收/放散实验以排 除弱D型和Du型.13l例RhD阴性供血者的Rh表现型用 血清学和PCR两种方法加以确定.检测结果为:6O例ccee, 58例Ccee,5例ccEe,5例CcEe.3例CCee.?PCR扩增:用 68 以DNA为基础的PCR—SSP方法进行RhCE和RhD的基因 定型.所有RhCE基因定型结果均与血清学结果一致.在131 例Rh阴性供血者中.65例表型为ccee或ccEe,16例表型为 Ccee和2例表型为CcEe(63.36)的个体既未检测到内古子 4,也未检测上述8个外显子l24例表型为Ccee或CCee和2 例表型为CcEe(19.85%)的个体既存在内古子4也存在所有 外显子.其余22例表型为Ccee,CCee和CcEe(16.79)的个 体中.11例缺失外显子3,4,5,6,7和9,11例缺失外显子3, 4,5,6,7,9和1O在所有表型为ccee和部分表型为Ccee的个 体中,RhD外显子完全缺失.说明存在两种常见的单倍型,即 dce和dCe值得注意的是,携带至少一种RhD外显子的个体 表型均为Ccee或CCee.这似乎表明在中国汉族人中存在另 外一类RhD阴性单倍型,其携带一个正常的Ce等位基因和 一 个无功能的RhD基因. 讨论:自从RhcDNAs第一次被描述以来,人们已付出许 多努力来阐明Rh血型抗原的分子机理.Rh基因座位的结构 模型首先是在高加索人群中确立的,早期研究证实几乎所有 RhD阴性高加索人缺失RhD基因.这个发现不仅可以最终 解释为什么预期的Rhd抗原从未被发现,而且使以DNA为 基础的PCR-SSP技术应用于患新生儿溶血病(HDN)的胎儿 RhD定型.然而,后来的研究却表明RhD阴性个体可能有不 同的遗传背景.这些不同的遗传机制包括基因缺失(D一阴性 表现型),基因转换(C/c多态性)和错义突变,Rh基因表现为 丰富的多样性.在所有的种族中都存在许多基因重组的例子. 1994年人们在表型为Ccee的RhD阴性个体中发现了三种 RhD基因多态性;一种缺失D基因.一种部分缺失D基因.而 另一种存在正常的D基因.1997年,1例表型为Ccee的RhD 阴性个体被发现带有全长RhD转录体.其中的一个点突变导 壅医药2006年第46卷第lo期 致了阅读框内形成终止密码子,从而阻止了RhD抗原的表 达.一种新的带有四个核苷酸缺失的RhD基因在1例表型为 Ceee的高加索病人中被发现Daniels等人报道了RhD阴性 非洲人和RhD阴性欧洲人之间的区别,在11例非洲RhD阴 性个体中,3例存在RhD基因外显子2,3,7,1O和内含子4;2 例缺失这些外显子和内含子I6例存在外显子10,但没有外显 子3,7和内含子4.Singleton等人在非洲人中发现一种RhD 伪基因(RHDpsi).在RhD阴性很少见的东方人群中,RhD基 因或者完整缺失的或者部分缺失 东方人RhD阴性表型的比例低于0.5,血清学研究区 分出两类RhD阴性个体,即真正的RhD阴性个体和携带Rh 基因的RhD阴性个体.在本研究中,我们检测了中国汉族 RhD阴性个体RhD基因的第2,3,4,5,6,7,9,10外显子和内 古予4.我们的数据表明大约有36.64的中国汉族RhD阴 性携带一个无功能的RhD基因和一个Ce等位基因,这提示 存在一类新的RhD阴性单倍型.表明在DNA水平上所确定 的Rh单倍型多态性比血清学定型更复杂.人们似乎应考虑 重新定义东方人群和非洲人的RhD阴性血型,但前提条件是 必须搞清楚RhD基因的表达机制和RhD抗原的免疫机制. 许多报道介绍了PCR试验用于分析从胎儿羊水,绒毛膜 和母血中制备的DNA.从而进行产前Rh基因定型的方法. 然而,Rh基因的遗传多样性,尤其是在东方人和非洲人中出 现的情况巳减少了这种方法的临床应用,因为这会产生假阳 性和假阴性的结果在本研究中.我们得出的数据表明现在通 行的用DNA样品进行胎儿产前RhD定型的PCR方法不适 于中国汉族人.这种情况在其他民族中也存在,即一些RhD 阴性母亲带有无功能的RhD基因因此在应用DNA方法进 行RhD基因定型之前,应首先明确不同种族Rh基因座位的 结构模型. (收稿日期:2006—02—05) 日照地区无偿献血者HIV感染状况调查分析 古金龙,张永菩,王惠云,辛本勤,任守江. (1日照市中心血站,山东日照276800;2日照市人民医院) 为了解无偿献血者HIV感染状况,笔者对日照地区2001 , 2004年54758例无偿献血者HIV检测资料进行了统计分 析.现 报告 软件系统测试报告下载sgs报告如何下载关于路面塌陷情况报告535n,sgs报告怎么下载竣工报告下载 如下 检测对象:同期日照市中心血站采集的无偿献血者共计 54758例,其中首次无偿献血者43158例,多次献血者11600 例. ? J 方法:?检测试剂:抗HIV(1+2)ELISA试剂盒购自厦 门新刨科技有限公司和北京金豪制药公司,均经中国药品生 物制品检定所批准检定合格.并在其有效期内使用2Ncu/ ml质控血清购自卫生部门临床检验中心,在实验中做室内质 控用.?检测仪器:意大利产ALISEI2000全自动酶免分析系 统.所有无偿献血者标本均采用新创和金豪试剂进行初复检. 两种试剂结果均阴性判为合格.任何一种试剂出现阳性结果 判为可疑.可疑标本再用该种试剂做双孔复检.双孔均为阴性 判为合格;两孔均阳性或一孔阳性,一孔阴性判为不合格.阳 性标本送日照市疾病预防控制中心HIV筛查中心实验室进 行筛查,筛查阳性标本送山东省疾病预防控制中心确认实验 室用WB法确认,确认阳性判为HlV感染者. 结果:2001~2004年日照地区无偿献血者HlV检测结果 见表1首次无偿献血者43158例,HIV阳性1例,阳性率 000232;多次无偿献血者未发现阳性患者 讨论:近年来.我国HIV感染者和AIDS有逐年增多趋 势.据报道.亚洲地区及我国HIV感染已进入高速增长期.因 此,预防HIV感染形势严峻.而HIV感染的一个重要途径 表12001,2004年日照地区无偿献血者HIV检测 是经血液传播,WHO统计,全球HIV感染中有5,1o经 血液传播,而我国血液传播率也很高.因此,对采集的血液进 行进行严格的初复检,并且初复检一定要使用两个不同厂家 生产的抗HIV试剂进行检测,这也是杜绝HIV经输血传播 的重要手段和途径. 有文献报道.我国某县有偿献皿者HIV感染率为9.1, 高于本调查的无偿献血者HIV感染率0.0018.因此,大力 开展无偿献血,取缔有偿献血是控制经血液传播HIV的重要 途径.从表1结果可以看出,54758名无偿献血者中ELtSA 法检测出阳性标本27例.经WB法确认实验检测1例为阳 性,其余26例为假阳性这是因为ElISA实验灵敏度高,其 特异性低所致.本结果还表明.日照地区54758例无偿献血 者中经确认实验确诊的1例抗一HIV阳性者是首次无偿献血 者.而多次无偿献血者未见HIV感染率.因此.固定的自愿无 偿献血者血液较安全. (收稿日期:20060208) 69