高效毛细管区带电泳测定人尿液中尿酸,肌酐和伪尿核苷的含量

高效毛细管区带电泳测定人尿液中尿酸,肌酐和伪尿核苷的含量 高效毛细管区带电泳测定人尿液中尿酸,肌 酐和伪尿核苷的含量 第16卷第2期 77/o--厂77 色谱 1998年3?月CHINESEJOURNALQ旦 | l ;Vo1.16No.2 ;March1998 高效毛细管区带电泳测定人尿液中 尿酸,肌酐和伪尿核苷的含量. / 周继红袁倚盛\//许丹科 (南京军区南京总医院检验科仪器分析室南京210002) 提要报道了采用高效毛细管区带电泳技术直接将人尿液注入毛细管进行尿液中 肌酐,尿酸及伪尿核苷含 量测定的新方法.试验 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明,以磷酸盐(pH6.1)作缓冲液,对人体尿液中肌酐,尿酸及 伪尿核苷进行直接分析具 有较高的灵敏度和较好的重复性. 关?调高效毛细管区带电泳,肌酐,尿酸,伪尿核苷,人尿液 1 嘶8/QI『一31前言? 对尿中尿酸与肌酐的比值,伪尿核苷与肌酐的 比值的测定在某些疾病的诊断及病理研究方面很有 意义[.但一般都只是分别测定尿中尿酸与肌酐的 比值嘲,或者测定伪尿核苷与肌酐的比值嗍,并且 HPLC所用的流动相毒性大,未处理的样品直接进 样,将会使色谱柱受到损伤.我们推荐了一种毛细管 区带电泳的方法,可以同时测定尿液中尿酸,肌酐和 伪尿核苷的含量,尿样只需用水稀释即可直接进样, 结果令人满意. 2实验部分 2.1仪器与试剂 BioFocus2000型全自动毛细管电泳仪(美国 Bio-Red公司),M一50微孔滤膜杯式滤器(天津南开 区腾达过滤器件厂),高速离心机(美国Beckman公 司).磷酸氢二钠,磷酸二氢钾,氢氧化钠(均为分析 纯),肌酐标准品(E.Merck公司,进口分装),尿酸标 准品(Sigma公司,进口分装),伪尿核苷标准品 (Sigma公司),二次蒸馏水(使用前用M一5O微孔滤 膜杯式滤器过滤). 2.2电泳条件 毛细管l50gin×37cm(有效长度30cm,河北永 年光导纤维厂),缓冲溶液:0.033mol/L磷酸盐缓冲 溶液,pH6.1,使用电压15kV,检测波长210nm, Aufsl0.01,进样l207kPa?s压差进样,毛细管柱温 20"C,运行时间10min;柱冲洗:每次进样前分别用 0.5mol/LNaOH,二次蒸馏水,缓冲液各冲洗100s. 2.3样品预处理 取新鲜尿液用滤膜(O.45pm)过滤,离心lOmin (10000r/rain). 3结果 本文收稿日期l1996-10-16,{_}回日期:1996.12—08 II面积与浓度的线性关系 分别将尿酸,肌酐,伪尿核苷用蒸馏水制成浓度 均为lg/L的对照品溶液,放入4C冰箱保存.以3种 标准品的峰面积A对浓度c做工作曲线.它们的线 性范围,回归方程及相关系数r分别是:尿酸2, 80mg/L,C一5.36A+1.18×10一,r一0.996,肌酐2 ~ 80mg/L,C一0.14A+1.61×10一,r一0.996,伪尿 核苷2~80mg/L,c一0.012A~10,,r一0.999.在较 大的线性范围内,峰面积与浓度有较好的线性关系. 3.2精密度 在选定的条件下,测定了人尿液中尿酸,肌酐, 伪尿核苷含量的日内和日间精密度,数据见表1. 衰1方法的精密度(R=7) TablelPre~ionOfmethod(一=7) 3.3回收率 在空白尿液中分别加入已知量的尿酸,肌酐和 伪尿核苷,按前文所述步骤操作,所得结果减去空白 尿液中尿酸,肌酐和伪尿核苷的含量,与相同浓度的 标准品溶液直接测定的结果进行比较,结果见表2. 4样品的测定 三例志愿者的随意尿液经过样品预处理后,取 lOlL稀释至500~L,在上述色谱条件下测定,其中一 例志愿者尿液的分离结果如图1所示. 5讨论 (1)高效毛细管区带电泳法用于尿液中尿酸,肌 酐和伪尿核苷的测定,无需进行特殊的样品预处理, l 2期周继红等;高效毛细管区带电泳测定人蘧生醒!匝塑星董盒量:Z!: 可直接进行定量分析,该法操作简单,重现性好. 寰2尿?,肌酐和伪屎棱苷的国收率 Table2Reeoverlm0farkadd. ereatlnlneandp伽lII—dIne (nIg/L)20.0Added'nIg,LJu'u 定( mg/L)18.8F0uIld'mg/LJ 回收率(%)99. OR ecovery,.' mA 4.96 — 0.05 20.0 21.5 102.0 20.0 18.4 92.2 n.00.0012.OOmin 田1人屎液中屎?,肌酐,伪屎棱苷的电泳田 rig?1目ect咖?h暇qmofarleKid, a胃.tInIneInd嘲l0硼嚏.岫峰inh,,mmu—肿 1.肌酐,2.伪尿核苷,3.尿酸. (2)实验中选择了缓冲液pH值分别为2.5,6.1, 7.0,8.0.结果发现在缓冲液的pH值为2.5时,尿 酸,肌酐的峰形好,而伪尿核苷峰形扩散很大,为一 平头峰.在缓冲液pH值为7.0,8.0时,伪尿核苷的 峰形好,但肌酐的峰形很差.在缓冲液pH值为6.1 时,尿酸,肌酐的峰形很好而伪尿核苷的峰形也得到 了改善,虽稍有扩散,但不影响定量,亦无杂质干扰. (3)柱冲洗时间的改进:每次进样前分别用 0.5mol/LNaOH,二次蒸馏水,缓冲液冲洗,冲洗时 间从60s增加到100s后,日间误差得到了明显改善. (4)本法灵敏度高,分析速度快,样品用量少,特 别适用于临床检验. 参考文献 1PesceAJ,KaplanLA着.林其燧译.临床化学诊断方 法大全.北京:北京大学出版社,1990.22~28 2MckeonJL,SaunderNA,Murree—AllenKeta1.Am RevRespirDis,1990,142:8-12 3WaalkesTP,AbeloffMD,EttingerDSeta1.Cancer, 1982,50:2457—2461 4ItohK,MizugakiM.IshidaNeta1.ClinicaChemica Acta,1989,305:181—185 5李克.色谱,1993,11(3):185~186 6许丹科,谭力,袁倚盛.分析化学,1993,21(9):993 995 1?cre~tmlne'2?pseudouridine'3?uricacid? DeterminationofUricAcid,Creatinineand PseudouridineinHumanUrinebyHighPerformance CapillaryZoneEIectrOph0resis ZhouJihong,YuanYishengandXuDanke (Genera/HospitalofNanfl'ngCommand,PLA,Nanjing.210002) AbstractAsimultaneousdeterminationofuricacid,creatinineandpseudouridineinhumanu rinebyhi.gh performancecapillaryzoneelectrophoresis(HPCZE)isdescribed.Theurinesampleswerer efrigeratedand filtered?Thenthesamplesweredirectlyintroducedintothecapillaryandaphosphatebuffers olution(pH6. 1)wasemployed.Thecapillaryusedwas36cmX50mi.d.anddetectionwascarriedoutwithaUVmonitor at21Ohm?Thecalibrationcurveshowedagoodlinearityforuricacid,creatinine,andpseudouridineinthe concentrationrangeof2-80mg/Landtheircorrelationcoefficientswere0.996,0.996and0.999respectivety. Withindayforassayingtheurinesamplesofuricacid,creatinineandpseudouridlnewere5. O%,3.O%, and4?4,andthecorrespondingbetweendaydatawere6.5%,5.9,and5.3,respectively.Th recoveriesofuricacid,creatinineandpseudouridinewere99.O%,102..92.2,respectively.Thetota1 timeforseparationanddeterminationwaswithin10min.Thismethodischaracterizedbydirectassav0furine sampleswithoutanypretreatment.TheresultsshowthatHPCZEisasimple,rapid,sensitiveandreliable assaymethod. Keywordshighperformancecapillaryzoneelectrophoresis,creatinine,uricacid,pseudouridine.urine