【论文】Fascin 蛋白在乳腺导管上皮内肿瘤及浸润性导管癌中的表达意义

【 论文 政研论文下载论文大学下载论文大学下载关于长拳的论文浙大论文封面下载 】Fascin 蛋白在乳腺导管上皮内肿瘤及浸润性导管癌中的表达意义 中国科技论文在线 Fascin 蛋白在乳腺导管上皮内肿瘤及浸润性导管癌中的表达意义 姜英 常晓燕 陈杰 中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院病理科 北京 100730 E-mail:xhblk@163.com 摘要: 目的 探讨 fascin 蛋白在乳腺导管上皮内肿瘤及浸润性导管癌中的表达。 方法 运用免疫组化方法检测 30 例普通导管上皮增生(UDH)、30 例平坦上皮不 典型增生(FEA)、15 例导管上皮不典型增生(ADH)、30 例导管原位癌(DCIS) 中 fascin 蛋白的表达并与 30 例伴有淋巴结转移的浸润性导管癌(IDC)和 30 例不伴有淋巴结转移的浸润性导管癌(IDC)的免疫组化结果进行比较。结果 在 UDH、FEA 及 ADH 组中，fascin 蛋白无阳性表达，在 DCIS 组阳性表达率为 6.67% (2/30)，在 IDC 组中阳性表达率为 15%(9/60)。fascin 蛋白表达与一些临床病 性(P=0.044)、PR 阴性(P=0.042)和肿瘤分级(P=0.028)相关，而 理因素如 ER 阴 与病人年龄(P=0.821)、病变部位(P=0.903)、肿物大小(P=0.371)、淋巴结转移 (P=0.071)无相关性。 结论 在乳腺癌的发生过程中，fascin 蛋白表达看来是 一迟发事件，通常在癌中表达，有可能成为靶向治疗的一个新靶点。 关键词: 乳腺导管上皮内肿瘤;UDH;FEA;ADH;DCIS;IDC;fascin 中图分类号:R730.3 1.引言 fascin 基因编码产物为分子量 55Kda、能与 F-肌动蛋白结合的细胞骨架蛋 白，于上个世纪 70 年代由 Bryan 等人从海胆卵母细胞的胞质中发现[1]，并于 20 世纪 90 年代从人类畸胎瘤中克隆，定位于染色体 7p22[2]。以往研究发现 fascin 蛋白在多种上皮来源的肿瘤细胞中有高表达，而在 DIN 中的表达尚无报道，本 研究拟探讨 fascin 蛋白在 DIN 及浸润性导管癌中的表达情况。 本课题得到高等学校博士学科点专项科研基金(项目编号:20060023013)及国家自然科学基金 (项目编 号:30471970)的资助。 1 中国科技论文在线 2 材料与方法 2.1 材料 30 例普通导管上皮增生，30 例平坦上皮不典型增生，15 例导管上皮 不典型增生，30 例导管内癌，60 例浸润性导管癌石蜡包埋组织来自北京协和医 院 1999—2006 年间手术切除标本，15 例正常乳腺组织取自癌旁乳腺组织，60 例浸润性导管癌中不伴有淋巴结转移癌的 30 例，伴有淋巴结转移癌的 30 例。 2.2 方法 所有标本经10%福尔马林固定，常规脱水、石蜡包埋,连续切片,厚度4 μm。所用抗体fascin-1单克隆抗体(克隆号为55K-2)、ER 及 PR ,均购自Dako 公 司。免疫组化染色用EnVision 法，使用Dako Cytomation 免疫组化自动染色机 进行染色。 2.3 结果判定 胞浆内出现棕黄色颗粒为阳性表达，fascin 蛋白表达根据阳性 肿瘤细胞的百分数分级: < 5 %为( - ) 5%-25%为(+)，26%-75%为(++)，> 75% 为 ( +++) 。以反应性增生的淋巴结为阳性对照，以 PBS 代替一抗作为阴性对 照，血管内皮细胞作为内对照。 2.4 统计学分析 fascin 表达水平和临床病理因素的相关性用microsoft office excel 2003进行χ2 检验分析。 3 结果 3.1 在正常乳腺组织的导管上皮、UDH、FEA 组及 ADH 组中，fascin 蛋白无阳 性表达，在 DCIS 组中阳性表达率为 6.67%(2/30)，两例均为高度 DCIS，fascin 蛋白表达均为散在(+)，在 IDC 组中阳性表达率为 15%(9/60)，其中无淋巴结 转移和有淋巴结转移的 IDC 组中分别为 23.3 %( 7 /30)和 6.7 %( 2/30)，可 见在 DCIS 和 IDC 中 fascin 蛋白表达水平呈增高趋势。3 例原发癌无 fascin 蛋 白表达，而淋巴结中的转移癌 fascin 蛋白表达(+)，其中1例 Bloom-Richardson 分级为 III 级，2 例为 II 级，2 例原发癌 fascin 蛋白表达(+)，而淋巴结中的 转移癌 fascin 蛋白表达(++-+++)，2 例 Bloom-Richardson 分级均为 III 级，表 明淋巴结中的转移癌较原发癌有更强的侵袭性。在 IDC 中癌组织周边的细胞较中 心的细胞有更强的着色。炎性宿主反应中的树突细胞和纤维母细胞有强弱不等的 fascin 蛋白阳性表达。 3.2 fascin 蛋白表达和临床病理因素的相关性见表1。 2 中国科技论文在线 表 1 fascin 蛋白表达和临床病理因素的相关性 fascin 蛋白表达 例数(%) P 值 临床病理因素 阳性例数(%) 阴性例数(%) 年龄(岁) 0.821 38/60(63.3) 6(15.8) 32(84.2) 〈59 ?59 22/60(36.7) 3(13.6) 19(87.4) 部位 0.903 左侧 34/60(56.7) 5(14.7) 29(85.3) 右侧 26/60(43.3) 4(11.1) 22(88.9) 肿瘤大小 0.371 T1 20/60(33.3) 5(25) 15(75) T2 32/60(53.3) 4(12.5) 28(87.5) T3 5/60(8.3) 0(0) 5(100) T4 3/60(5)0(0)3(100) Bloom-Richardson 分级 0.028 I 6/60(10) 0(0) 6(100) II 31/60(51.7) 2(6.5) 29(93.5) III 23/60(38.3)7(30.4)16(69.6) 腋窝淋巴结转移 0.071 无 7(23.3) 23(76.7) 30/60(50) 有 30/60(50) 2(6.7)28(93.3) ER 表达0.044 阳性 1(4) 24(96) 25/60 (41.7) 阴性 35/60 (59.3)8(22.9)27(77.1) PR 表达0.042 阳性 2(6.3) 30(93.7) 32/60(53.3) 阴性 28/60(46.7) 7(25) 21(75) 3 中国科技论文在线 4 讨论 本研究运用免疫组化方法分析了 fascin 蛋白在乳腺 DIN 及乳腺浸润性导管 癌中的差异表达，结果说明在乳腺癌的多步发生过程中，fascin 蛋白表达看来 是一迟发事件，通常在癌中表达。 fascin 蛋白定位于细胞质张力纤维和细胞膜皱褶边缘的丝状伪足、微棘的核心肌动蛋白束中。人类 fascin 蛋白最初是从宫颈癌 Hela 细胞中纯化出来的， 其 N 端 11-50 之间的氨基酸残基高度保守[3]，其中第 39 位的丝氨酸为蛋白激酶 C 的磷酸化位点，该位点的磷酸化可调节 fascin 蛋白与 F-肌动蛋白的结合活性， 以及细胞膜表面丝状伪足和微棘，与细胞的运动、癌细胞的转移有密切关系[4]， 提示 fascin 蛋白可能在细胞迁移、细胞黏附以及细胞间信息交流等过程中发挥 作用[5]。fascin 蛋白在一些正常细胞中有表达，如淋巴结 T 区指状网织细胞、 被膜下树突细胞、血管内皮细胞、神经元细胞和纤维母细胞表达 fascin-1。淋 巴结滤泡树突细胞与淋巴结周围梭形细胞(间质树突细胞)也有不同的阳性表达。 胸腺、脾和外周血的树突细胞、组织细胞、平滑肌细胞、黏膜鳞状细胞、脾窦的 被覆细胞均有强阳性表达。 在对一系列的肿瘤研究中发现fascin阳性表达的肿瘤往往有较高的组织学 分级或者较高的侵袭性。 Fascin可能在肿瘤的浸润及调整细胞生长方面起作用 [6]，与基质金属蛋白酶的激活有关。 Xie JJ等还发现fascin的表达下降还导致 了C-erbB-2 和β-catenin在蛋白水平的下降[7]。Adsay NV等发现胰腺癌象其他 的恶性进程一样，是一个与癌有关的一系列基因突变产生的基因疾病。fascin 蛋白的高表达与k-ras突变，HER-2/neu，PSCA和MUC5 等可能属于早期改变，而 P16 抑制、MUC1 和cyclin D1 高表达属于中期改变，P53 和DPC4 抑制、BRCA2 突 变和Ki-67 的高表达等属于晚期改变[8]。 以往研究发现，fascin 基因在许多上皮来源的肿瘤细胞系，如宫颈癌 Hela、胃癌 AGS、结直肠癌 LIM 1215 和 SW480、胰腺癌 BxPC3 和 T3H4 中均表达 上调。有研究证明，细胞内 fascin 基因的上调表达会导致细胞膜突起增多，细 胞间连接发生解离，同时细胞的运动也相应增加 8-17 倍。而将 fascin 基因转 染至分化程度高且 fascin 基因低表达的结直肠癌细胞系 SW1222 中，结果伴随 fascin 基因表达的增加，同时还会出现细胞膜表面突起增多，细胞分化程度降 低，细胞增殖旺盛，肌动蛋白骨架重建，细胞运动性增强，在三维基质中细胞侵 4