头孢米诺的血药浓度
检测
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头孢米诺的血药浓度检测技术
[摘 要]目的 探讨人血浆中头孢米诺浓度的反相高效液相色谱法的检测。
方法
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高效液相色谱法，固定相为C18柱， pH4.5 醋酸铵缓冲液:甲醇(85:15) 为流动相， 扑热息痛为内标，检测波长273nm。结果 头孢米诺在 3.71,118.89μg/ ml 检测浓度范围内呈良好线性关系(r =0.9999) ; 高、中、低3 种浓度的日间RSD ?4.90%、日内RSD ?1.73%;平均回收率为74.58 %。最低检测限为3.49μg/ml。结论 方法简便、稳定、准确，适用于临床头孢米诺血药浓度的测定。
[关键词]头孢米诺 血药浓度 检测
中图分类号:S7 文献标识码:A 文章编号:1009-914X(2014)13-0350-01
头孢米诺(Cefminox Sodium) 为头霉素衍生物， 对β-内酰胺酶高度稳定， 对革兰阳性菌和革兰阴性菌有广谱抗菌活性，对呼吸系统及泌尿系统感染有较好的疗效， 且副作用较少。本文建立RP-HPLC谱法测定头孢米诺钠的血药浓度，专属性强，操作较简便，线性关系和精密度均好，结果准确。
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材料
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1.1 仪器
日本岛津液相色谱仪， LC-10AT 泵，SPD-10A 紫外检测器， SePu3000色谱工作站(杭州谱惠科技有限公司)。
1.2 试药
头孢米诺钠对照品( 中国 药品生物制品检定所)，头孢米诺钠样品(海南思迈药业有限公司，批号040501)，扑热息痛原料(汕头金石制药总厂，批号060901) 甲醇(HPLC 级) ，冰醋酸(AR )， 醋酸铵(AR ) ， 三氯乙酸(AR)， 注射用水。
1.3 色谱条件
迪马C18柱(250mm×4.6mm，5μm);流动相为pH4.5 醋酸铵缓冲液(醋酸铵7.7g， 加水溶解， 加冰醋酸6ml加水至1000ml) ?甲醇(v:v=85:15) ， 内标溶液:1.0mg/ml扑热息痛流动相溶液; 流速1.0ml /min; 柱温:室温;检测波长: 273nm。测得头孢米诺空白血浆、标准品、内标品色谱图见图1。头孢米诺保留时间为8.5min，内标物扑热息痛保留时间为16.3min，头孢米诺、内标物与血浆内源物都得到良好的分离。
2 样品的预处理 取血浆200μl，加入内标40μl，振荡，加入10%三氯乙酸溶液100μl，旋涡混匀3min，以13000r/min的高速离心4min，取上清液20ul进样。
2.1 标准曲线的配制
2.1.1 标曲贮备溶液的配制 精密称取头孢米诺标准品10mg，加蒸馏水定溶于10ml容量瓶中，得到1.0mg/ml头孢米诺标准储备液。
2.1.2 内标溶液的配制 精密称取扑热息痛10mg，加少量甲醇溶解，加流动相稀释定容至10ml，作为内标储备液。准确的移取内标液1.00ml，置10ml量瓶中用流动相稀释至刻度，摇匀，即为内标溶液:1.0mg/ml。
2.1.3 血浆标准曲线的配制 以健康人空白血浆加头孢米诺标准液适
量，配制成118.89μg/ml、59.44μg/ml、29.72μg/ml、14.86μg/ml、7.43μg/ml、3.72μg/ml的血浆标准溶液，按样品预处理项下操作，进行分析，以药物浓度对药物、内标峰面积比作线性回归，得回归方程为Y=0.0219+0.0337C，r=0.9999。头孢米诺钠在3.72μg/ml 118.89μg/ml的范围线性关系良好。血浆中的最低检测浓度为3.49μg/ml(S/N=3)。
2.2 精密度试验
准确配制含头孢米诺浓度为118.89μg/ml、29.72μg/ml、7.43μg/ml的标准血浆样品，于同日内及连续3天按样品预处理方法操作，所得结果代入回归方程，分别 计算 日内及日间精密度。
2.3 提取回收率试验
准确配制含头孢米诺浓度为118.89μg/ml、29.72μg/ml、7.43μg/ml的标准血浆样品，按样品预处理方法操作，测得血浆标准溶液头孢米诺峰面积与内标峰面积比A1;另取一定量的头孢米诺钠标曲贮备溶液配制118.89μg/ml、29.72μg/ml、7.43μg/ml的系列标准溶液各5份以同体积进样，测得标准溶液头孢米诺峰面积与内标峰面积比A2。回收率=A1/A2×100% 计算 提取回收率，平均回收率为74.58%。
2.4 稳定性试验
2.4.1 室温稳定性 准确配制含头孢米诺浓度为118.88μg/ml、29.72μg/ml、7.43μg/ml的标准血浆样品，于室温下放置0、2、4、6、24h后按样品预处理方法操作，与0h所测定的浓度相比较，求其偏差。结果
表
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明血浆样品在24h内保持稳定，偏差在-4.95%,2.89%之间。
2.4.2 冻融稳定性 准确配制含头孢米诺浓度为118.88μg/ml、29.72
μg/ml、7.43μg/ml的标准血浆样品，于-20?冷冻24h，取出待完全溶解后按样品预处理方法操作，反复冻融3次，与未冻前相比较，求其偏差，结果表明标准血浆样品冻融条件下可保持稳定，偏差在-2.14%,3.19%内。
2.4.3 长期稳定性 准确配制含头孢米诺浓度为118.88μg/ml、29.72μg/ml、7.43μg/ml的标准血浆样品，于-20?冷冻0、7、14、21天后取出待融完后按样品预处理方法操作，与0天相比较，求其偏差，结果表明标准血浆QC样品在冻融条件下可保持稳定，偏差在-7.68%,4.18%内。
3 讨论
注射用头孢米诺钠(商品名meicilin)，由日本Meiji Cephem公司研发生产，属于头霉素类抗生素，其作用性质与第三代头孢菌素相近 。其对β-内酰胺酶高度稳定，可用于ESBL 治疗 。头孢米诺的紫外光谱在273nm 波长显示最大吸收， 流动相在此波长处无吸收干扰， 因而选取做检测波长。醋酸铵缓冲液pH4.5时柱效最高，经实验发现缓冲液pH4.5时药物的峰形及保留时间较好。内标物采用Haefelfinger法评价，经实验考察所得的高浓度、中浓度和低浓度中头孢米诺钠的峰面积的RSDa，内标峰面积的RSDb以及头孢米诺与内标峰面积比值的RSDQ，RSDa>RSDQ，同时满足RSDb<2rRSDa， 0
参考文献
[1] 韩方璇，黄春新，反相高效液相色谱法测定头孢米诺的血药浓度，论文网，2011.06.
浙公网安备 33021202002483