【doc】葡萄糖及胰岛素对巨噬细胞清道夫受体BⅠ表达的影响

【doc】葡萄糖及胰岛素对巨噬细胞清道夫受体BⅠ 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 达的影响 葡萄糖及胰岛素对巨噬细胞清道夫受体B? 表达的影响 ? 442?生筮鲞筮5期ChinJEndocrinolMetab.October2007.Vol23.No.5 葡萄糖及胰岛素对巨噬细胞清道夫受体BI表达的影响 彭扬张锦李慧李莉孟馨杨艳敏潘作东何平 ?基础研究? 【提要】用不同浓度葡萄糖和(或)胰岛素处理U937巨噬细胞,研究其对巨噬细胞 清道夫受体(sR) BI表达的影响,结果表明基础生理水平胰岛素促进巨噬细胞sR—BI蛋白表达,而 胰岛素浓度达到100 IxU/ml以上时,sR-BI表达反而下降.胰岛素水平的变化对sR—BImRNA表达无显 着影响.葡萄糖与胰 岛素水平同时升高对巨噬细胞sR—BI明显的下调作用也许与代谢综合征同时存 在2型糖尿病患者动脉粥 样硬化发生较早,发展迅速有关. 【关键词】葡萄糖;胰岛素;巨噬细胞;清道夫受体BI EffectsofglucoseandinsulinonexpressionofscavengerreceptorclassBtypeIinU937macro phages PENGYang,ZHANGJin,LIHui,LILi,MENGXin,YANGYan—min,PANZuo— dong,HE.'Department ofGeriatrics,SecondHospitalAffiliatedtOChinaMedicalUniversity,Shenyang110004,C hina Email:pengyangsy@yahoo.com.c/t 【Summary】 U937macrophageswereculturedwithvariousconcentrationsofglucoseand/orinsulinf0r24 h.Cellmembranescavengerreceptor(SR)-BIproteinandmRNAweredetectedbyWesternbl otandRT.PCR. TheresultsshowedthatbasalphysiologicalinsulinlevelspromotedSR—BIproteinexpressionofmacrophagesand highconcentrationofinsulinsignificantlydownregulatedSR-BI.butthetranscriptionofSR —BImRNAdidnot change.Highglucoseandhi 【shinsulinacceleratesatherosclerosisthroughsynergeficallydownregulatingSR—BI proteinexpression,whichmaycauseearlyonsetandrapidprogressionofatherosclerosisinth epatientswith metabolicsyndromeandtype2diabetesmellitus. 【Key word word文档格式规范word作业纸小票打印word模板word简历模板免费word简历 s】Glucose;Insulin;Macrophages;ScavengerreceptorBI (JEndocrinolMetab,2007,23:442444) 胰岛素抵抗常与高血糖及脂代谢紊乱相伴随,与动脉粥样 硬化(AS)密切相关J.生理水平胰岛素具有抗AS作用J,然 而高胰岛素又会加速AS的发展L]J.研究发现巨噬细胞清道夫 受体(SR)在AS发生,发展中起到重要作用,本研究通过观察 不同浓度葡萄糖及胰岛素对巨噬细胞SR-BI表达的影响分析 他们对SR—BI介导胆固醇酯外流量的影响,从而进一步探讨 高血糖和(或)高胰岛素血症致AS的可能机制. 一 ,材料与 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 1.材料:(1)巨噬细胞:U937细胞株(中科院上海细胞所). (2)试剂:佛波酯(PMA,美国Sigma公司),人胰岛素(丹麦 NovoNordisk公司),兔抗人sR—BI多克隆抗体(美国Novus), Trizol,AMV,Oligo(DT)15,RNase抑制剂(美国Promega),-Taq 酶(日本TaKaRa),SR—BI引物(北京奥科). 2.方法:(1)细胞培养及诱导分化:U937细胞在RPMI一 —3天传代1次,传2—3代后的 1640培养液中常规培养,每2 U937细胞用于实验.诱导分化时加入含100nmol/LPMA的 培养液孵育48h用于以下分组实验.(2)实验分组:?葡萄糖 组(GLU):葡萄糖的终浓度分别为:5.6,11.1,16.7和33.3 mmol/L;?胰岛素组(INS):培养液中胰岛素的终浓度分别为: 作者单位:110004沈阳,中国医科大学附属盛京医院老年科(彭 扬,李慧,杨艳敏,潘作东,何平),内分泌科(李莉);中国医科大学附属 一 院内分泌科(张锦,孟馨) Email:pengyangsy@yahoo.corn.cn 0,10,20,100,200和400mU/L;?葡萄糖胰岛素组(GLU+ INS):加入含有葡萄糖(5.6或16.7mmol/L)和胰岛素(0,20 或200mU/L)的培养液,以上每组实验重复3次.(3)Western 印迹:处理细胞提取蛋白后测定蛋白含量,SDS—PAGE分离蛋 白,然后转移至硝酸纤维素膜上,室温封闭2h,SR-BI多克隆 抗体(1:800)4?过夜,洗膜后再置于1:500稀释二抗中室温作 用2h,用ECL方法显色,x一片感光,洗片.蛋白条带经扫描后 进行灰度值分析.(4)半定量RT—PCR检测SR—BImRNA:根 据文献设计引物,人SR-BI上游引物为:5-TGACCGGGTG- GATGTCCAGGAAC-3;下游引物为:5'-TGATGATGGAGAATA- AGCCCAT-3(产物696bp,基因库序列号Z22555).内参照B- actin上游引物为:5一ACACTGTGCCCATCTACGAGGGG-3;下游 引物为:5-ATGATGGAGqTGAAGGTACGTGGAT-3(产物 366bp).用Trizol提取细胞总RNA后,用RT-PCR检测SR—B I及内参照B-actin的mRNA表达.PCR总反应体系25;反 应条件为95?预变性5min,然后在95?30S,55?30S,72 ?1min条件下循环35次(B-actin循环25次),最后72?延 伸5min.PCR产物以1.5%琼脂糖凝胶电泳观察,扫描及半定 量分析. 3.统计学处理:实验数据以?S表示,数据处理采用SPSS 10.0统计软件中的单因素ANOVA统计方法并进行SNK检验, P<0.05为差异有统计学意义. 二,结果 堡内分泌代谢杂志2007年10月第23卷第5期 ChinJEndocrinolMetab.October2007.~ol23.No.5 1.分化细胞的形态变化:U937细胞呈圆形,悬浮生长;经 100nmol/LPMA诱导分化48h后,细胞停止增殖.由悬浮生长 变为贴壁生长,且伸展伪足,呈现巨噬细胞外形.经检测大部 分细胞CD14抗原阳性,说明已成功转化为巨噬细胞(数据未 列出). 2.葡萄糖浓度及SR—BI蛋白:以含有5.6,11.1,16.7和 33.3mmol/L葡萄糖的培养液孵育巨噬细胞24h后细胞表面 SR—BI相对表达量分别为100%,(97.5?10.1)%,(94.6? 9.3)%,(89.7?7.8)%,显示随着葡萄糖浓度升高SR.BI蛋 白呈现逐渐减少的趋势,但各组间差异没有统计学意义(P >0.05). 3.胰岛素浓度与SR—BI蛋白及mRNA表达:以不同浓度 胰岛素孵育巨噬细胞24h后,结果显示10,20mU/L胰岛素上 调巨噬细胞SR—BI蛋白表达;100,200和500mU/L胰岛素反 而降低巨噬细胞sR—BI蛋白表达(P<0.01,图1).但各组细 胞SR—BImRNA表达差异无统计学意义(图2). 4.葡萄糖加胰岛素对SR—BI表达调控的协同作用:将含 不同浓度葡萄糖和胰岛素的培养液孵育巨噬细胞24h,显示高 糖高胰岛素组细胞表面SR—BI表达进一步下降(图3). 一 豳{ 莨 ? 皿 嘲 H ? l ? 01020100200400 胰岛素(mO/L) 注:sR—BI:清道夫受体BI;与0mU/L胰岛素组比 较,一P<0.01;与20mU/L胰岛素比较,P<0.01 图1不同浓度胰岛素对U937巨噬细胞SR—BI蛋白表达的影 响(n=3) 一 星30? 0010 20100200400 胰岛素(mu/L) 注:略语同图1 图2不同浓度胰岛素对U937巨噬细胞SR—BImRNA表达的 影响(n=3) 一 甲50 0020200 胰岛素(mu/L) 注:略语同图1;与不含胰岛素的5.6mmol/L葡萄糖组比 较,一P<0.O1;与16.7mmol/L葡萄糖+20mU/ml胰岛素组 比较.P<0.O1 图3葡萄糖和胰岛素对U937巨噬细胞SR—BI表达的影响(n = 3) 三,讨论 本研究应用不同浓度葡萄糖作用于巨噬细胞并未发现对 SR—BI表达有影响,这表明单纯血糖升高可能没有通过明显下 调巨噬细胞SR—BI表达来减少胆固醇酯外流.以往的研究证 实葡萄糖虽然对巨噬细胞PPARa有上调作用,但是对PPAR-,/ 却起到下调作用,这两种受体均在巨噬细胞上表达且对SR—B I表达具有促进作用.因此,认为葡萄糖对不同PPAR的调 节作用可能是SR—BI表达无明显变化的原因.由于单纯葡萄 糖升高可以促进一些致AS因子如CD36的表达,加速脂质在 巨噬细胞内聚集,但抗As因子SR—BI表达无相应升高,不能 代偿地加速胆固醇酯外流,从某种意义上来说可能间接促进了 AS发展. 本研究应用不同浓度胰岛素处理细胞的研究结果显示生 理水平胰岛素使巨噬细胞SR—BI表达增加,而胰岛素浓度达 到100mU/L以上时,SR—BI表达明显下降.通常所说的胰岛 素抵抗是针对胰岛素对糖类的代谢作用不足而言,并未涉及胰 岛素的其他作用.实际上,胰岛素对人体的作用是多方面的, 包括脂类和蛋白代谢,离子和氨基酸转运,细胞周期,细胞增殖 和分化等等.因此,代偿性高胰岛素血症将增强它的某方面作 用,对某些组织和细胞起到刺激甚至超强刺激的作用,已有 研究证实高水平胰岛素可能在血管壁水平促进As发展川. 对多种细胞研究均发现细胞膜SR.BI表达量与其介导胆 固醇酯外流量成正比,所以基础生理水平胰岛素增加巨噬细胞 SR—BI表达说明其介导胆固醇酯外流量增加.然而胰岛素浓 度达到100mU/L以上随着巨噬细胞sR—BI表达下降会导致 细胞胆固醇酯外流随之下降.因此,如果机体长期处于高胰岛 素血症状态,这种高胰岛素水平可能通过降低巨噬细胞sR—B I表达来减少胆固醇酯外流而促进AS发生,发展.另外,本研 究发现胰岛素浓度对巨噬细胞SR—BImRNA表达无显着影 响,此结果与Witt等及Bueeher等对sR.BI的研究结果 相吻合,显然胰岛素对其调节作用也是发生在转录后水平. 本组结果显示单纯高葡萄糖未明显引起巨噬细胞sR—BI 表达变化,但是如果高葡萄糖与高胰岛素同时存在时可以进一 0000 一一咖莨皿随 ??印??022ll?加?印 一一嘲莨《丕E ? 444?2007年lO月第23卷第5期ChinJEndocrinolMetab.October2007.Vol23.No.5 步下调巨噬细胞SR.BI,这一结果与临床研究发现2型糖尿病 患者与健康对照者相比较SR.BI表达水平降低?..的结果一 致.另有l临床研究发现胰岛素敏感性指数及空腹胰岛素水平 与血浆胆固醇酯中脂肪酸的比例正相关…J,但尚未发现高血 糖与之相关的报道,今后可以对临床患者进行这方面的研究. 总之,通过以上结果不难看出,长期高胰岛素血症状态本 身就可以通过下调血管壁巨噬细胞SR.BI表达来减弱胆固醇 酯外流,如果同时存在血糖升高,这种情况将进一步恶化,这也 许是代谢综合征患者同时存在2型糖尿病时AS发生较早,发 展迅速的原因之一. 参考文献 1LaaksoM.Hyperglycemiaandcardiovasculardiseaseintype-2 diabetes.Diabetes,1999,48:937-942. 2FlakollPJ,JensenMD,CherringtonAD.Physiologicactionofinsulin. 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(收稿:2006-08?17) (本文编辑:周凤鑫) 氟伐他汀对高糖环境中肾小球系膜细胞 胞外信号调节激酶活性的影响 李英段惠军张涛张丽红刘茂东王秀芬林琼真 【提要】高糖环境中sD大鼠肾小球系膜细胞胞外信号调节激酶(ERK)活性,转化 生长因子B- (TGF—B.)mRNA水平升高,?型胶原含量增多,氟伐他汀可抑制上述反应,提示 ERK通路的激活参与糖尿 病肾病的发生,发展,氟伐他汀可能通过抑制ERK通路活化及TGF—B.表达发挥 非降脂相关的肾保护作用. 【关键词】肾小球系膜细胞;细胞外信号调节激酶;氟伐他汀 Effectoffluvastatinonextracelluarsignal-regulatedkinaseactivityinglomerularmesangial cellsexposedto IIighglucoseconcentrationL/Ying,DUANHui-jun,ZHANGTao,ZHANGLi?hong,LIUMao—dong, WANGXiu-fen.LINQiong.zhen.DepartmentofNephrology,TheThirdHospitalofHebei MedicalUniversity, Shijiazhuang050051,China Correspondingattthor:DUANHui-fin,Emaif:duanhj@hebmu.edu.cn 【Summary】Whentheomenllarmesangialcellsofratswereculturedinvitroathi【ghglucose concentration.theactivityofextracellularsignal— regulatedkinase(ERK),theexpressionoftransforminggrowth 资助项目:河北省自然基金项目(302532) 作者单位:050051石家庄,河北医科大学第三医院肾内科,河北省肾脏病研究中心 (李英,张涛,张丽红,刘茂东,王秀 芬,林琼真);河北医科大学病理学教研室(段惠军) 通讯作者:段惠军,Email:duanhj@hebmu.edu.an