MAdCAM一1在大鼠小肠移植肠管中的表达及其意义
刘志勇 欧阳忠
(赣南医学院第一附属医院，江西 赣州 341000)
[摘要]【目的】通过建立大鼠小肠移植模型。观察粘附素细胞粘附分子一1(MAdCAM-1)在大鼠小肠移植
肠管中的表达及移植肠管的改变。【
方法
快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载
】实验分三组，第1组为同系同基因移植(从LEW鼠到LEW鼠)，第
Ⅱ组为异系同基因移植(从D八鼠到LEW鼠)；第Ⅲ组为使用抗一MAdCAM-1抗体的异糸同基因移植。将
DarkAgouti(DA)鼠的小肠异位移植到Lewis(LEW)鼠中。观察各组移植肠管的形态和组织学变化；’并用免
疫染色检测MAdCAM-1和整合素a4J37在移植肠管中的表达。通过荧光激活细胞分类术来
分析
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移植肠管中
肠系膜淋巴结和肠管Peyefs淋巴结的淋巴细胞漫润情况。【结果】实验组大鼠移植肠管存活期为(7．0士3．3)
d，对照组为(24．6土8．4)d(P
设计
领导形象设计圆作业设计ao工艺污水处理厂设计附属工程施工组织设计清扫机器人结构设计
实验分三组，第1组为同系同基因
移植，从LEW鼠到LEW鼠；第Ⅱ组为异系同基因
移植，从DA鼠到LEW鼠；第Ⅲ组为使用抗一MAd-
CAM一1抗体的异系同基因移植。
在第Ⅲ组中对取出的移植肠管的肠系膜上动脉
注入抗一MAdCAM一1抗体[购于日本SLC(Shizuo—
ka，Japan)，4Pg／g(移植肠管重量)]，保留30min，
然后用生理盐水冲洗。第1组和第Ⅱ组仅用生理盐
水注入。在三组大鼠的腹部均行造瘘手术。
观察移植肠管的存活时间和组织学改变如淋巴
细胞浸润和移植肠管组织结构的毁坏。在术后d6
用一体荧光显微镜观测移植肠管的淋巴细胞浸润，
如CD4+和CD8+T细胞在肠系膜淋巴结和Peyefs
淋巴结中的表达。
1．3观测指标与方法
1．3．1 移植肠管的存活时间
记录
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移植肠管的存
活时间，有无局部缺血及肠黏膜的坏死。通过观测
造瘘口的情况来确定移植肠管的存活时间。
1．3．2组织学改变 切除空肠的末段约5em的移
植肠管作为标本，标本固定在5％缓冲福尔马林液
中并用HE染色(苏木素)，评价其形态学改变，如绒
毛上皮厚度(EVT)，绒毛高度(VH)，和黏膜下层厚
度(ST)。
1．3．3抗一MAdCAM一1抗体、F(ab’)2的提取大
鼠基因的第一个免疫球蛋白结构域的氨基酸序列是
用来结合a487整合素的。这个结构域的DTNL—
GNVQTLPGSR位点是产生抗一肽抗体的肽，用其免
疫兔而产生抗体，抗体通过使用硫磺酸沉淀法和色
谱仪分析而从血清中提取出来，其形式为IgG。得
到抗一MAdCAM-1抗体的F(ab')2形式。
1．3．4抗一MAdCAM一1抗体、F(ab’)2的免疫标记
移植肠管分别用已建立的兔抗大鼠抗体和一个已
知抗体[羊抗鼠MAdCAM一1多克隆抗体，P一20
(SantacruzBiotechnology，California，USA)]在
4℃条件下抚育12h。然后，样本用PBS夜冲洗三
次，用TRITC标记的猪抗兔Ig抗体(Dako，
Gloptrup，Denmark)或HRP标记的抗羊Ig(Cap—
pel，Westchester，PA，USA)在室温下抚育1h。
1．3．5CD4，CD8测定在小鼠的肠系膜淋巴结和
肠管Peyer's淋巴结中获取的淋巴细胞(1×106)用
小鼠抗大鼠CD4或CD8免疫球蛋白在4℃温度下
抚育达1h。用PBS液冲洗，用流式细胞测定器进
行荧光激活细胞分类。
1．3．6 MAdCAM一1和整合素a487的表达对于
MAdCAM一1和整合素a4p7标记，用已知的羊抗鼠
MAdCAM一1抗体对移植肠管抚育12h。然后，样
品用PBS液冲洗三次，并用FITC标记的兔抗羊
IgG在室温下抚育1h。
1．4统计学分析统计数据用均数±标准差表示，
并对不同组别用Mann—Whitney检测进行统计学分
析，当Pd0．05，为有统计学意义。
2 结果
2．1组织学变化术后d6的移植肠管可见，第1
组几乎具有正常的黏膜结构(图1A)，第Ⅱ组有显著
的淋巴细胞浸润和绒毛结构的破坏(图lB)。第Ⅲ
组未看到急性排斥反应，黏膜破坏也不显著(图
1C)。
在移植肠管的破坏程度方面，第Ⅲ组即使用抗一
MAdCAM一1抗体组的组织结构与第1组相似。其
存活时间较长，通过组织学观测和评分发现，其毁坏
程度也较轻(表1)。说明使用抗一MAdCAM-1抗体
可以有效阻止移植段肠管的黏膜破坏。
表1 移植肠管的组织学变化(n=5，=±s)
*与第Ⅱ组比较：P
题
快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题
。目前降低小肠移植术后细菌移位的主要方法有：选择性肠道去
污、小肠移植术后应用谷胺酰胺、表皮生长因子等。但是谷胺酰胺、表皮生长因子有增加排斥反应的可能性，选择性肠道去污目前仍然存在争论。蛙皮
素(BBS)是一种与胃泌素释放肽和胃肠神经肽形态和功能都十分相似的14肽，分子量为1619D；具有促进损伤后肠黏膜形态和免疫的修复作用。本实验在
建立改良大鼠小肠移植的动物模型的基础上，通过观察BBS对SBT术后肠黏膜绒毛结构、肠道黏膜免疫损伤的修复，细菌移位率，血浆内毒素水平，死亡
率的影响探讨BBS防治大鼠小肠移植术后移植肠细菌移位的作用及其可能的机制。
方法：1.建立改良大鼠小肠移植的动物模型SD清洁级大鼠92只建立46只大鼠小肠移植动物模型，按移植肠不同处理情况分为两组：双造瘘组：血管
吻合完毕后经典的移植肠T-V式双造瘘(n=2×23)。单造瘘组：血管吻合完毕后移植肠近端结扎，远端造瘘(n=2×23)。观察术后7天内死亡率，术后第7天
处死取病理。2.BBS对大鼠节段性小肠移植术后移植肠细菌移位的影响及其可能机制；SD清洁级大鼠130只移植术后不同处理情况分为三组：1)正常对照
组(假手术组，n=10)行虚拟手术。2)BBS组(BBS+FK506组,n=2×30)小肠移植术后皮下注射BBS(10ug/kg/day)，肌肉注射FK5060.5mg/kg/day。3)移植对照
组(生理盐水+FK506组,n=2×30)小肠移植术后皮下注射生理盐水1.5ml,肌肉注射FK506(0.5mg/kg/day)。术后每1000ml饮用水16万U中加入12.5PODs肠造
瘘口注射活0.3ml×1×1011/L大肠杆菌；14天剖杀取材。检测小肠黏膜固有层PeyerPatches淋巴结CD3+、CD4+、CD8+、CD45RA+细胞的含量，肝脏、肠系
膜淋巴结细菌移位率、量，血浆内毒素水平以及小肠黏膜形态学改变。
结果：1.单造瘘组与双造瘘组4-7天内死亡率分别为36.8％和42.1％，比较无明显差异，P＞0.05。单造瘘组和双造瘘组在绒毛高度、绒毛厚度、陷
窝深度及绒毛面积比较没有明显差异P＞0.05。
2.BBS防治SBT术后肠细菌移位检测结果(1)肠黏膜检测结果①光学显微镜观察移植对照组肠粘膜固有层明显水肿，中性粒细胞浸润，绒毛顶端上皮下
出现囊状间隙，中央乳糜管扩张。上皮细胞变性、坏死、脱落、固有层裸露。BBS组上述损伤明显减轻，仅见少数中性粒细胞浸润，中央乳糜管仍轻度扩
张，上皮细胞结构尚完整。正常对照组偶见中性粒细胞浸润，中央乳糜管无扩张，上皮结构完整。②移植肠黏膜各组扫描电子显微镜下的病理改变：绒
毛不完整，上皮细胞间隙较假手术组明显增宽，可见多处见上皮细胞脱落，绒毛溃疡形成，杯状细胞文状缘偶而可见或缺失。BBS组：绒毛欠完整，偶见
上皮细胞脱落，绒毛溃疡形成，杯状细胞文状缘较稀疏。正常对照组：绒毛完整，上皮细胞间隙较窄且均匀一致；杯状细胞的文状缘清晰可见较密集。
③图文分析仪结果：移植对照组的绒毛高度、黏膜厚度、陷窝深度、绒毛面积较正常对照组明显降低，仅为正常对照组的50％-60％，比较有显著性差异
，P＜0.05。但是BBS组的绒毛高度、黏膜厚度、陷窝深度、绒毛面积较移植对照组明显增加，P＜0.05。
(2)肠黏膜固有层和Peyer斑中CD3+、CD4+、CD8+、CD45RA+细胞的含量：进行小肠移植的两组的移植肠肠黏膜固有层和Peyer斑中CD3+、CD4+、
CD8+、CD45RA+细胞的含量明显降低，肠黏膜的免疫系统明显受损，与假手术组比较有明显差异，P＜0.05；但是在两组进行小肠移植的动物模型中，应
用BBS组的移植肠肠黏膜固有层和Peyer斑中CD3+、、CD8+、CD45RA+细胞的含量明显高于移植对照组，P＜0.05。而CD4+细胞的含量则没有明显差异
，P＞0.05。表明BBS具有修复移植肠免疫的作用，但是修复的主要是代表非特异性免疫的免疫系统而对特异性免疫则没有明显的作用。
(3)肝脏、肠系膜淋巴结细菌移位率及移位量：在三组动物模型中我们发现BBS组和移植对照组的平均细菌移位量和细菌移位率明显高于正常对照组
，P＜0.05；两组移植动物模型中，应用BBS组的平均细菌移位量和细菌移位率明显低于移植对照组，P＜0.05。表明BBS具有明显降低大鼠小肠移植术后
细菌移位率的作用；而正常对照组也有一定量的细菌移位，表明在正常情况下也有一定量的细菌移位。
7(4)血浆内毒素水平：在三组动物模型中，进行小肠移植的两组大鼠的血浆内毒素的平均含量明显低于正常对照组，P＜0.05，有显著性差异。而两
组进行小肠移植的动物模型中，应用BBS组的大鼠的血浆内毒素的平均含量明显低于移植对照组，P＜0.05，有显著性差异。表明BBS有降低小肠移植术后
血浆内毒素水平的作用。
(5)BBS对小肠移植术后受体死亡率的影响在三组动物模型中，正常对照组没有死亡；而两组进行小肠移植的动物模型死亡率分别为13.3％和
46.7％，应用BBS组的受体的死亡率明显低于移植对照组，P＜0.05，有显著性差异。表明BBS具有降低大鼠小肠移植术后死亡率的作用。
结论：1.近端结扎，远端造瘘的单造瘘动物模型是研究小肠移植术后感染的方便、实用的动物模型。
2.小肠移植术和免疫抑制剂的应用严重损伤了移植肠肠黏膜的机械屏障和免疫屏障。
3.BBS能够通过修复SBT术后肠黏膜机械屏障和免疫屏障的损伤而有效降低细菌移位率和血浆内毒素水平，从而降低受体的死亡率。
4.BBS的应用也许是降低SBT术后感染率和提高受体成活率的新的治疗手段。
10.期刊论文 张宏伟.吴肇汉.Zhang Hongwei.Wu Zhaohan 大鼠同种异体节段性小肠移植并发症的预防 -中华器官
移植杂志1998,19(2)
为减少大鼠小肠移植手术并发症,提高手术成功率,对Monchik和Russell法进行改良,做了32例大鼠节段性异位小肠移植.手术成功率为96.9%,大干
10天生存率为81.25%.最长生存期超过500天.认为充分的液体补充、合理而完善的血管吻合技术、对供体进行有效的保护是手术成功的关键.此外无菌原
则和定期供体冲洗也不容忽视.
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