GB T4789.26-2003 食品卫生微生物学检验 罐头食品商业无菌的检验

GB/T 4789.26-2003 前 言 本 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 对GB/T 4789. 26-1994《食品卫生微生物学检验 罐头食品商业无菌的检验》进行修订。 本标准与GB/T 4789. 26-1994相比主要修改如下: — 按照GB/T 1. 1-200。对标准文本的格式和文字进行修改。 — 修改并 规范 编程规范下载gsp规范下载钢格栅规范下载警徽规范下载建设厅规范下载 原标准中的“设备和材料” 本标准自实施之日起，GB/T 4789. 26-1994同时废止。 本标准的附录A为规范性附录，附录B是资料性附录。 本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。 本标准起草单位:轻工食品发酵工业科学研究所、天津进出口商品检验局、中国疾病预防控制中心 营养与食品安全所、福建省食品卫生监督检验所。 本标准主要起草人:陈希浩、张思传、郝士海、白竟玉、刘仁汉、刘乃恕、商保英。 本标准于1989年首次发布，1994年第一次修订，本次为第二次修订。 GB/T 4789.26-2003 食 品 卫 生微 生 物 学检 验 罐 头食 品 商 业 无 菌 的检 验 范围 本标准规定了罐头食品商业无菌检验的基本要求，操作程序和结果判定。 本标准适用于各种密封容器包装的，经过适度的热杀菌后达到的商业无菌，在常温下能较长时间保 存的罐头食品。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T 4789.12食品卫生微生物学检验 肉毒梭菌及肉毒毒素检验 GB/T 4789. 28-2003 食品卫生微生物学检验 染色法、培养基和试剂 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3. 1 罐头食品的商业无菌 commercial sterilization of canned food 罐头食品经过适度的热杀菌以后，不含有致病的微生物，也不含有在通常温度下能在其中繁殖的非 致病性微生物，这种状态称作商业无菌。 3.2 密封 hermatical seal 食品容器经密闭后能阻止微生物进人的状态。 3.3 胖听 swell 由于罐头内微生物活动或化学作用产生气体，形成正压，使一端或两端外凸的现象。 3.4 泄漏 leakage 罐头密封结构有缺陷，或由于撞击而破坏密封，或罐壁腐蚀而穿孔致使微生物侵人的现象。 3.5 低酸性罐头食品 low acid canned food 除酒精饮料以外，凡杀菌后平衡pH值大于4. 6、水活性值大干。.85的罐头食品，原来是低酸性的 水果、蔬菜或蔬菜制品，为加热杀菌的需要而加酸降低pH值的，属于酸化的低酸性罐头食品 3.6 酸性罐头食品 acid canned food 杀菌后平衡pH值等于或小于4.6的罐头食品。pH值小于4.7的番茄、梨和菠萝以及由其制成的 汁，以及pH值小于4. 9的无花果都算作酸性食品。 179 GB/T 4789.26-2003 4 设备和仪器 4.1 冰箱,00C -40C; 4.2 恒温培养箱:30℃士10C ,36℃士10C,55℃士10C; 4.3 恒温水浴锅:460C 110C 4.4 显微镜:lox一100 X。 4.5 架盘药物天平:0 g-500 g，精度0. 5 g, 4.6 电位pH计。 4.7 灭菌吸管:1 ml,(具。.01 MI一刻度),10 ml,(具。. 1 mL刻度) 4.8 灭菌平皿:直径90 mm, 4.9 灭菌试管:16 mmX160 mm, 4. 10 开罐刀和罐头打孔器。 4. 11 白色搪瓷盘。 4.伦 灭菌镊子。 5 培养基和试剂 5. 1 5,2 5.3 5.4 5.5 5.6 5.7 5.8 革兰氏染色液;见GB/T 4789. 28-2003中2.2. 厄肉培养基:见GB/T 4789. 28-2003中4. 67, 澳甲酚紫葡萄糖肉汤:见第A.1章 酸性肉汤:见第A. 2章; 麦芽浸膏汤:见第A.3章; 锰盐营养琼脂:见第A.4章; 血琼脂:见GB/T 4789.28-2003中4.6. 卵黄琼脂:见GB/T 4789. 28-2003中4. 68 6 检验步骤 6. 1 审查生产操作记录 工厂检验部门对送检产品的下述操作记录应认真进行审阅。妥善保存至少三年备查。 6.1.1 杀菌记录:杀菌记录包括自动记录仪的记录纸和相应的手记记录。记录纸上要标明产品品名、 规格、生产日期和杀菌锅号。每一项图 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 记录都应由杀菌锅操作者亲自记录和签字，由车间专人审核签 字，最后由工厂检验部门审定后签字。 6. 1.2 杀菌后的冷却水有效氯含量测定的记录。 6. 1.3 罐头密封性检验记录:罐头密封性检验的全部记录应包括空罐和实罐卷边封口质量和焊缝质量 的常规检查记录，记录上应明确标记批号和罐数等，并由检验人员和主管人员签字。 6.2 抽样方法 可采用下述方法之一。 6.2. 1 按杀菌锅抽样 低酸性食品罐头在杀菌冷却完毕后每杀菌锅抽样两罐,3 kg以上的大罐每锅抽一罐，酸性食品罐 头每锅抽一罐，一般一个班的产品组成一个检验批，将各锅的样罐组成一个样批送检，每批每个品种取 样基数不得少干三罐。产品如按锅划分堆放，在遇到由于杀菌操作不当引起问题时，也可以按锅处理。 6.2.2 按生产班(批)次抽样 6. 2. 2.1 取样数为1/6 000，尾数超过2 000者增取一罐，每班(批)每个品种不得少于三罐。 6.2.2.2 某些产品班产量较大，则以30 000罐为基数，其取样数按1/6 000;超过30 000罐以上的按 18Q GB/T 4789.26-2003 1/20 000计，尾数超过4 000罐者增取一罐。 6.2.2.3 个别产品产量过小，同品种同规格可合并班次为一批取样，但并班总数不超过5 000罐，每个 批次取样数不得少于三罐。 6.3 称量 用电子秤或台天平称量，1 kg及以下的罐头精确到lg,lkg以上的罐头精确到2g。各罐头的质 量减去空罐的平均质量即为该罐头的净重。称量前对样品进行记录编号。 6.4 保温 6.4. 1 将全部样罐按下述分类在规定温度下按规定时间进行保温见表I. 表 1 样品保温时间和温度 罐 头 种 类 温 度/℃ 时 间/d 低酸性罐头食品 36土1 10 酸性罐头食品 30士1 10 预定要输往热带地区((40℃以上)的 低酸性食品 55士1 5- 7 6.4.2 6.5 保温过程中应每天检查，如有胖听或泄漏等现象，立即剔出作开罐检查。 开罐 取保温过的全部罐头，冷却到常温后，按无菌操作开罐检验。 将样罐用温水和洗涤剂洗刷干净，用自来水冲洗后擦干。放人无菌室，以紫外光杀菌灯照射 30 min. 将样罐移置于超净工作台上，用75%酒精棉球擦拭无代号端，并点燃灭菌(胖听罐不能烧)。用灭 菌的卫生开罐刀或罐头打孔器开启(带汤汁的罐头开罐前适当振摇)，开罐时不能伤及卷边结构。 6.6 留样 开罐后，用灭菌吸管或其他适当工具以无菌操作取出内容物10 mL(g)-20 mL(g)，移人灭菌容器 内，保存于冰箱中。待该批罐头检验得出结论后可弃去。 6. 7 pH测定 取样测定pH值，与同批中正常罐相比，看是否有显著的差异。 6.8 感官检查 在光线充足、空气清洁无异味的检验室中将罐头内容物倾人白色搪瓷盘内，由有经验的检验人员对 产品的外观、色泽、状态和气味等进行观察和嗅闻，用餐具按压食品或戴薄指套以手指进行触感，鉴别食 品有无腐败变质的迹象。 6.9 涂片染色镜检 6.9. 1 涂片 对感官或pH检查结果认为可疑的，以及腐败时pH反应不灵敏的(如肉、禽、鱼类等)罐头样品，均 应进行涂片染色镜检。带汤汁的罐头样品可用接种环挑取汤汁涂于载玻片上。固态食品可以直接涂片 或用少量灭菌生理盐水稀释后涂片。待干后用火焰固定。油脂性食品涂片自然干燥并火焰固定后，用 二甲苯流洗，自然干燥。 6.9.2 染色镜检 用革兰氏染色法染色，镜检，至少观察五个视野，记录细菌的染色反应、形态特征以及每个视野的菌 数。与同批的正常样品进行对比，判断是否有明显的微生物增殖现象。 6. 10 接种培养 保温期间出现的胖听、泄漏，或开罐检查发现pH、感官质量异常、腐败变质 进一步镜检发现有异 181 GB/T 4789.26-2003 常数量细菌的样罐，均应及时进行微生物接种培养。 对需要接种培养的样罐(或留样)用灭菌的适当工具移出约1 ML(g)内容物，分别接种培养。接种 量约为培养基的十分之一。要求在55℃培养基管，在接种前应在55℃水浴中预热至该温度，接种后立 即放人55 0C温箱培养。 6.10.1 低酸性罐头食品(每罐)接种培养基、管数及培养条件见表2. 表 2 低酸性罐头食品的检验 培养基 管数 培养条件/℃ 时间/h 厄肉培养 2 36士1(厌氧) 96--120 厄肉培养 2 55士1(厌氧) 24- 72 嗅甲酚紫葡萄糖肉汤(带倒管) 2 36士1(需氧) 96一120 澳甲酚紫葡萄糖肉汤(带倒管) 2 55士1(需氧) 24- 72 6. 10.2 酸性罐头食品(每罐)接种培养基、管数及培养条件见表3, 表 3 酸性雄头食品的检验 培养基 管数 培养条件/℃ 时间/h 酸性肉汤 2 55士1(需氧) 48 酸性肉汤 2 30士1(需氧) 96 麦芽浸膏汤 2 30士1(需氧) 96 6.11 微生物培养检验程序及判定 6. 11. 将按表2或表3接种的培养基管分别放人规定温度的恒温箱进行培养，每天观察培养生长情 况(见图1), GR/T 4789.26-2003 ? ? ? ? ? ?? ? ? ? ????? ? ? ? ? ? ? ? ? ?一???? ?? ?? ? ? ? ? ?? ? ? ? ??? ? ? ? ??? ? 、匕， iH I邢 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ???????? ? ? ? ? ????????? ? ?????? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?? ?? ??? ? ?? ? ? ? ? ? ? ? ?? ? ?? ?? ?? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?? ? ? ? ? ? ? ?? ? ? ? ? ? ?? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?? ? ? ?? ? ? ?? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?? ? ?? ?? ?? ? ? ? ? ? ，? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?? ? ? ??? ? ? ? ? ?? ? ??? ?? ? ? ? ? ? ? ? ? ?? ? ? ? ??? ? ? ? 、L:o i'H I m ? ? ? 坦版恤 城 璐 牛 曹 帷 侧 ? ?? ? ? ? ?? ? ? ? ? ?? ? ?? ?? ? ? ? ?? ? ? ? ? ? ? ? ? ?? ? ? ? ??? ?$1撇 恤明 屏 牛 誉 服 留 ?? ? ? ? ? ? ?? ? ?????? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?? ? ? ? ? ? ? ? ??? ???? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?? ? ?? ?? 1 fi3 GB/T 4789.26-2003 对在36℃培养有菌生长的嗅甲酚紫肉汤管，观察产酸产气情况，并涂片染色镜检。如果是含杆菌 的混合培养物或球菌、酵母菌或霉菌的纯培养物，不再往下检验;如仅有芽胞杆菌则判为嗜温性需氧芽 胞杆菌;如仅有杆菌无芽胞则为嗜温性需氧杆菌，如需进一步证实是否是芽胞杆菌，可转接于锰盐营养 琼脂平板在36℃培养后再作判定。 对在55℃培养有菌生长的澳甲酚紫肉汤管，观察产酸产气情况，并涂片染色镜检。如有芽胞杆菌， 则判为嗜热性需氧芽胞杆菌;如仅有杆菌而无芽胞则判为嗜热性需氧杆菌 如需要进一步证实是否是 芽胞杆菌，可转接于锰盐营养琼脂平板，在550C培养后再作判定。 对在36℃培养有菌生长的厄肉培养基管，涂片染色镜检，如为不含杆菌的混合菌相.不再往下进 行;如有杆菌，带或不带芽胞，都要转接于两个血琼脂平板(或卵黄琼脂平板)，在36℃分别进行需氧和 厌氧培养 在需氧平板上有芽胞生长，则为嗜温性兼性厌氧芽胞杆菌;在厌氧平板上生长为一般芽胞则 为嗜温性厌氧芽胞杆菌，如为梭状芽胞杆菌，应用厄肉培养基原培养液进行肉毒梭菌及肉毒毒素检验 (按GB/T 4789. 12)。 对在55℃培养有菌生长的厄肉培养基管，涂片染色镜检。如有芽胞，则为嗜热性厌氧芽胞杆菌或 硫化腐败性芽胞杆菌;如无芽胞仅有杆菌，转接于锰盐营养琼脂平板，在550C厌氧培养，如有芽胞则为 嗜热性厌氧芽胞杆菌，如无芽胞则为嗜热性厌氧杆菌。 6. 11.2 对有微生物生长的酸性肉汤和麦芽浸膏汤管进行观察，并涂片染色镜检。按所发现的微生物 类型判定 6.12 罐头密封性检验 对确定有微生物繁殖的样罐均应进行密封性检验以判定该罐是否泄漏，参见附录B, 7 结果判定 7.1 该批(锅)罐头食品经审查生产操作记录，属于正常;抽取样品经保温试验未胖听或泄漏;保温后开 罐，经感官检查、pH测定或涂片镜检，或接种培养，确证无微生物增殖现象，则为商业无菌 7.2 该批(锅)罐头食品经审查生产操作记录，未发现问题;抽取样品经保温试验有一罐及一罐以上发 生胖听或泄漏;或保温后开罐，经感官检查、pH测定或涂片镜检和接种培养，确证有微生物增殖现象， 则为非商业无菌。 GB/T 4789.26-2003 附 录 A (规范性附录) 专用培养墓 A. 1 澳甲酚紫葡萄摘肉汤 A.1.1 成分 蛋白脉 10 g 牛肉浸膏 39 葡萄糖 10 g 氛化钠 59 澳甲酚紫 。04 g(或1.6%酒精溶液2 mL) 蒸馏水 1 000 mL A.1.2 制法 将上述各成分(澳甲酚紫除外)加热搅拌溶解，调至pH7。士。.2，加人澳甲酚紫，分装于带有小倒 置管的中号试管中，每管10 mL,121℃灭菌10min, A.2 酸性肉汤 ? ? ? ??? ? ? A. 2. 1 成分 多价蛋白陈 酵母浸膏 葡萄糖 磷酸氢二钾 蒸馏水 A. 2. 2 制法 将以上各成分加热搅拌溶解 4g 1 000 mL ，调至pH5. 0士0. 2 ,121℃灭菌15 min，勿过分加热。 A. 3 麦芽漫，汤 A. 3. 1 成分 麦芽浸膏 15 g 蒸馏水 1 000 mL A.3.2 制法 将麦芽浸膏在蒸馏水中充分溶解，滤纸过滤，调至pH4. 7士。.2，分装，121℃灭菌15min, 如无麦芽浸膏，可按下法制备:用饱满健壮大麦粒在温水中浸透，置温暖处发芽，幼芽长达到2 cm 时，沥干余水，干透，磨细使成麦芽粉。制备培养基时，取麦芽粉30 g加水300 mL,混匀，在600C-700C 浸溃lh，吸出上层水。再同样加水浸渍一次，取上层水，合并两次上层水，并补加水至1 000 mL,滤纸过 滤。调至pH4. 7士0.2，分装 ，121℃灭菌15 min, A4 锰盐营养琼脂 按GB/T 4789. 28-2003配制营养琼脂，每1 000 mL加人硫酸锰水溶液1 mL(100 mL蒸馏水溶 解3.08 9硫酸锰)。观察芽胞形成情况，最长不超过10 d。 GB/T 4789.26-2003 附 录 B (资料性附录) 罐头密封性检验方法 将已洗净的空罐，经35"C烘干，根据各单位的设备条件进行减压或加压试漏。 B.1 减压试漏 将烘干的空罐内小心注人清水至八、九成满，将一带橡胶圈的有机玻璃板妥当安放罐头开启端的卷 边上，使能保持密封。启动真空汞，关闭放气阀，用手按住盖板，控制抽气，使真空表从0 Pa升到6.8X 10' Pa<510 mmHg)的时间在1 min以上，并保持此真空度1 min以上。倾侧空罐仔细观察罐内底盖卷 边及焊缝处有无气泡产生，凡同一部位连续产生气泡，应判断为泄漏，记录漏气的时间和真空度，并在漏 气部位做上记号。 B. 2 加压试漏 用橡皮塞将空罐的开孔塞紧，开动空气压缩机，慢慢开启阀门，使罐内压力逐渐加大，同时将空罐浸 没在盛水玻璃缸中，仔细观察罐外底盖卷边及焊缝处有无气泡产生，直至压力升至。. 7 kg/cm'并保持 2 min，凡同一部位连续产生气泡，应判断为泄漏，记录漏气的时间和压力，并在漏气部位做上记号