生物分离工程期末复习题

生物分离工程期末复习题PAGE\*MERGEFORMAT20填空题1..根据吸附剂与吸附质之间存在的吸附力性质的不同，可将吸附分为物理吸附、化学吸附和交换吸附；2.比表面积和孔径是评价吸附剂性能的主要参数。3.层析操作必须具有固定相和流动相。4.溶质的分配系数大，则在固定相上存在的几率大，随流动相的移动速度小。5.层析柱的理论板数越多，则溶质的分离度越大。6.两种溶质的分配系数相差越小，需要的越多的理论板数才能获得较大的分离度。7.影响吸附的主要因素有吸附质的性质，温度，溶液pH值，盐的浓度和吸附物的浓度与吸附剂的用量；8.离子交换树脂由网络骨架（载体），联结骨架上的功能基团（活性基）和可交换离子组成。9.电泳用凝胶制备时，过硫酸铵的作用是引发剂（提供催化丙烯酰胺和双丙烯酰胺聚合所必需的自由基）；甲叉双丙烯酰胺的作用是交联剂（丙烯酰胺单体和交联剂甲叉双丙烯酰胺催化剂的作用下聚合而成的含酰胺基侧链的脂肪族长链）；TEMED的作用是增速剂（催化过硫酸胺形成自由基而加速丙烯酰胺和双丙烯酰胺的聚合）；10.影响盐析的因素有溶质种类，溶质浓度，pH和温度；11.在结晶操作中，工业上常用的起晶 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 有自然起晶法，刺激起晶法和晶种起晶法；12.简单地说离子交换过程实际上只有外部扩散、内部扩散和化学交换反应三步；13.在生物制品进行吸附或离子交换分离时，通常遵循Langmuir吸附方程，其形式为14.反相高效液相色谱的固定相是疏水性强的，而流动相是极性强的；15.等电聚焦电泳法分离不同蛋白质的原理是依据其等电点的不同；32.基本的离子交换过程由外部扩散、内部扩散和化学交换组成；33.吸附包括将待分离的料液通入吸附剂中，吸附质被吸附到吸附剂表面，料液流出和解吸四个过程组成；34.大孔网状吸附剂有非极性，中等极性和极性三种主要类型；35.亲和吸附剂表面连接的“手臂链”的作用是降低空间位阻的影响；36.分子筛色谱（凝胶色谱）的主要应用是脱盐、生物大分子的分离；37.电泳系统的基本组成有电泳槽、电源、灌胶模具、外循环恒温系统、凝胶干燥器、电泳转移装置、电泳洗脱仪和凝胶扫描和摄录装置；38.电泳后，样品的主要染色方法有考马斯亮蓝和银染法；39.电泳过程中，加入溴酚兰的目的是指示蛋白的迁移位置；40.固体可分为晶体和无定形固体两种状态；41.结晶的前提是溶液达到过饱和状态；结晶的推动力是过饱和度；42.根据晶体生长扩散学说，晶体的生长包括溶质通过扩散作用穿过靠近晶体表面的一个滞流层，从溶液中转移到晶体的表面、到达晶体表面的溶质长入晶面，使晶体增大，同时放出结晶热和结晶热传递回到溶液中三个过程；43.影响晶体生长的主要因素有杂质、搅拌和温度；44.IEC操作多采用线性梯度洗脱和逐次洗脱。45.HIC（疏水性相互作用层析）主要采用降低流动相离子强度的线性梯度洗脱法和逐次洗脱法；IEC（离子交换层析）主要采用增加流动相离子强度的线性梯度洗脱法和逐次洗脱法。46.由于温度升高使分子和原子的热运动加剧，结合部位的静电作用、氢键及金属配位键的作用会减弱，疏水性相互作用会增强。47.电泳是荷电（电解质）溶质在电场作用下，发生定向泳动的现象。48.电泳分离是利用电解质在电场中泳动速度的差别进行分离的。49.亲和层析的洗脱方法有特异性洗脱法和非特异性洗脱法。50.荷电溶质在电场中受到电场力和黏性阻力的作用。51.不连续凝胶电泳的凝胶层由浓缩层和分离层组成。52.不连续凝胶电泳的上层起浓缩作用，下层起分离作用。53.当微小晶体的半径时，则微小晶体会自动溶解；当微小晶体的半径时，则微小晶体会自动生长。53.结晶是从液相或气相中生成形状一定、分子（或原子、离子）有规则排列的晶体的现象。54.结晶是内部结构的质点元作三维有序规则排列的形状一定的固体粒子，而沉淀是无规则排列的无定形的粒子。55.离子交换操作一般分为和两种；56．离子交换分离操作中，常用的洗脱方法有（pH梯度）和（离子强度（盐）梯度）。57.简单地说，离子交换过程实际上只有（外部扩散），（内部扩散）和（化学交换反应）三步；58.离子交换操作一般分为（动态）和（静态）两种；59.根据晶体生长扩散学说，晶体的生长包括（溶质借扩散作用从溶液中转移到晶体的表面）、（溶质长入晶面放出结晶热）和（结晶热传递回到溶液中）三个过程；60.影响晶体生长速度的主要因素有（杂质）、（搅拌）、（过饱和度）和（温度）。选择题1.凝胶过滤层析中，流动相的线速度与HETP关系。A.无B.线性减少C.线性增加D.对数2.GFC中溶质的分配系数在分级范围内随相对分子质量的对数值增大而。A.线性增大B.线性减少C.急剧增大D.急剧减少3.凝胶的分级范围越小，则分离度。A.越大B.越小C.小于1D.小于04.线性梯度洗脱过程中，流动相的离子强度线性增大，因此，溶质的连续降低，移动速度逐渐增大。A.溶解度B.扩散系数C.分配系数D.分离度5.逐次洗脱过程中，流动相的离子强度阶跃增大，溶质的分配系数降低。A.逐渐B.阶段式C.线性D.急剧6.当吸附操作达到穿透点时，应B操作。A.继续吸附B.停止吸附C.停止再生D.停止洗脱7.离子交换的分配系数与离子浓度呈D关系。A.线性增加B.线性减少C.指数增加D.指数减少8.凝胶过滤层析中，流动相的线速度与HETP成C关系。A.无B.线性减少C.线性增加D.对数9.GFC中溶质的分配系数在分级范围内随相对分子质量的对数值增大而B。A.线性增大B.线性减少C.急剧增大D.急剧减少10.凝胶的分级范围越小，则分离度A。A.越大B.越小C.小于1D.小于011.如果亲和作用主要源于静电引力，提高离子强度会D亲和作用。A.增加B.减弱C.不影响D.减弱或完全破坏12.如果亲和作用以氢键为主，提高离子强度会D亲和作用。A.增加B.减弱C.不影响D.降低或消除13.当亲和作用以疏水性相互作用时，提高离子强度会A亲和作用。A.增加B.减弱C.无影响D.完全破坏14.在亲和分离操作中，许多亲和吸附的目标蛋白质用高浓度的盐溶液洗脱，说明D在亲和作用中占主要地位。A.疏水性相互作用B.配位键C.非共价键D.静电力15.C的存在可以抑制氢键的形成。A.氧原子B.氮原子C.尿素和盐酸胍D.NaCl16.电泳分离的机理是B分离过程。A.液—液相平衡B.速率C.分配平衡D.筛分17.凝胶电泳时利用D使分子大小不同的电解质分离的。A.静电作用B.亲水作用C.疏水作用D.分子筛作用18.电解质溶质的迁移率是C下的泳动速度。A.单位时间B.单位溶质质量C.单位电场强度D.单位静电引力19.结晶是利用溶质之间C差别进行分离纯化的一种扩散分离操作。A.浓度B.静电引力C.溶解度D.扩散系数20.若亲和结合作用源于亲和分子与金属离子形成的配位键，则加入可使亲和结合作用消灭。A.NaClB.硅酸铵C.EDTA（乙二胺四乙酸）D.SDS21.微小晶体的溶解度B普遍大颗粒晶体的溶解度。A.低于B.高于C.接近D.等于22.线性梯度洗脱过程中，流动相的离子强度线性增大，因此，溶质的C连续降低，移动速度逐渐增大。A.溶解度B.扩散系数C.分配系数D.分离度23.逐次洗脱过程中，流动相的离子强度阶跃增大，溶质的分配系数B降低。A.逐渐B.阶段式C.线性D.急剧24.具有亲和作用的分子（物质）对之间具有“钥匙”和“锁孔”的关系是产生亲和结合作用的C。A.充分条件B.充要条件C.必要条件D.假设条件25.若亲和结合作用源于亲和分子与金属离子形成的配位键，则加入C可使亲和结合作用消灭。A.NaClB.硅酸铵C.EDTA（乙二胺四乙酸）D.SDS26、结晶过程具有很好的（）。A．自范性B．均匀性C．选择性D．各向异性27、晶体具有自发地生长为多面体的可能性，此性质称为晶体的（）。A．自范性B．均匀性C．选择性D．各向异性28、离子交换树脂对不同离子亲和能力的差别，表现在（）的大小。A．离子价数B．溶液浓度C．离子水化半径D．选择性系数29、离子交换反应的速度主要取决于（）。A．离子大小B．溶液浓度C．交联度D．扩散速度30、一般用分离度R=（）作为相邻两色谱峰完全分离的标志。A．0.9B．1.2C．1.5D．1.831、下列离子交换剂中，离子交换（）并不适合用于生物大分子的分离。A．树脂B．纤维素C．葡聚糖凝胶D．琼脂糖凝胶32、（）的效率是所有分离纯化技术中最高的。A．溶剂萃取B．双水相萃取C．膜分离D．色谱分离33、工业规模的色谱分离大多采用（）分离法。A．柱色谱B．纸上色谱C．薄层色谱D．平板色谱34、选择HPLC方法时首先要考虑的是样品的（）。A．分子结构B．分子大小C．等电点D．溶解度35.利用硅胶做固定相进行吸附柱层析，下列哪种溶剂的洗脱能力最弱（）A.水B.乙醇C.氯仿D.乙酸乙酯36.下列哪种离子与DEAE-纤维素（Cl型）的亲和力最大（）AF-B.Cl-C.Br-D.I-37.下列分离技术中，不能用于去离子水制备的方法有（）A.离子交换柱层析B.膜蒸馏C.渗透蒸发D.电渗析38.根据物质极性大小不同分离的方法是（）A.吸附层析B.离子交换层析C.凝胶层析D.亲和层析39.吸附作用是指物质从   浓缩到固体表面的过程。A、液体     B﹑气体   C﹑流体D.固体40.下列哪种离子交换树脂适宜制备软水（）A.RSO3NaB.RSO3HC.RCOOHD.RCOONa41.在凝胶过滤（分离范围是5000~400000）中，下列哪种蛋白质最先被洗脱下来（）。A、细胞色素C（13370）B、肌球蛋白（400000）C、过氧化氢酶（247500）D、血清清蛋白（68500）42.下列关于正相色谱与反相色谱说法正确的是（）。A.正相色谱是指固定相的极性低于流动相的极性B正相色谱层析过程中非极性分子或极性小的分子比极性大的分子移动的速度慢C.反相色谱是指固定相的极性低于流动相的极性D.反相色谱层析过程中，极性大的分子比极性小的分子移动的速度慢43.下列分离技术中，不能作为蛋白质溶液中的无机盐离子去除的方法是（）A.离子交换柱层析B.透析C.超滤D.凝胶过滤44．HPLC是哪种色谱的简称（C）。A．离子交换色谱B.气相色谱C.高效液相色谱D.凝胶色谱45．针对配基的生物学特异性的蛋白质分离方法是（C）。A.凝胶过滤B.离子交换层析C.亲和层析D.纸层析46．下列哪项酶的特性对利用酶作为亲和层析固定相的分析工具是必需的？（B）A.该酶的活力高B..对底物有高度特异亲合性C.酶能被抑制剂抑制D.最适温度高E.酶具有多个亚基47．用于蛋白质分离过程中的脱盐和更换缓冲液的色谱是（C）A．离子交换色谱B.亲和色谱C.凝胶过滤色谱D.反相色谱48．蛋白质分子量的测定可采用（C）方法。A．离子交换层析B.亲和层析C.凝胶层析D.聚酰胺层析49．氨基酸的结晶纯化是根据氨基酸的（A）性质。A.溶解度和等电点B.分子量C.酸碱性D.生产方式50．离子交换剂不适用于提取（D）物质。A．抗生素B.氨基酸C.有机酸D.蛋白质51．人血清清蛋白的等电点为4.64，在PH为7的溶液中将血清蛋白质溶液通电，清蛋白质分子向（A）A：正极移动；B：负极移动；C：不移动；D：不确定。52．凝胶色谱分离的依据是（B）。A、固定相对各物质的吸附力不同B、各物质分子大小不同C、各物质在流动相和固定相中的分配系数不同D、各物质与专一分子的亲和力不同53．依离子价或水化半径不同，离子交换树脂对不同离子亲和能力不同。树脂对下列离子亲和力排列顺序正确的有（A）。A、Fe3+﹥Ca2+﹥Na+B、Na+﹥Ca2+﹥Fe3+C、Na+﹥Rb+﹥Cs+D、Rb+﹥Cs+﹥Na+54．结晶过程中，溶质过饱和度大小（A）。A、不仅会影响晶核的形成速度，而且会影响晶体的长大速度B、只会影响晶核的形成速度，但不会影响晶体的长大速度C、不会影响晶核的形成速度，但会影响晶体的长大速度D、不会影响晶核的形成速度，而且不会影响晶体的长大速度55．离子交换法是应用离子交换剂作为吸附剂，通过（A）将溶液中带相反电荷的物质吸附在离子交换剂上。A、静电作用B、疏水作用C、氢键作用D、范德华力56．阴离子交换剂（C）。A、可交换的为阴、阳离子B、可交换的为蛋白质C、可交换的为阴离子D、可交换的为阳离子57．凝胶色谱分离的依据是（B）。A、固定相对各物质的吸附力不同B、各物质分子大小不同C、各物质在流动相和固定相中的分配系数不同D、各物质与专一分子的亲和力不同58．洗脱体积是（C）。A、凝胶颗粒之间空隙的总体积B、溶质进入凝胶内部的体积C、与该溶质保留时间相对应的流动相体积D、溶质从柱中流出时所用的流动相体积59．工业上强酸型和强碱型离子交换树脂在使用时为了减少酸碱用量且避免设备腐蚀，一般先将其转变为（B）。A、钠型和磺酸型B、钠型和氯型C、铵型和磺酸型D、铵型和氯型60．吸附色谱分离的依据是（A）。A、固定相对各物质的吸附力不同B、各物质分子大小不同C、各物质在流动相和固定相的分配系数不同D、各物质与专一分子的亲和力不同61．下面哪一种是根据酶分子专一性结合的纯化方法（A）。A.亲和层析B.凝胶层析C.离子交换层析D.盐析62．结晶过程中，溶质过饱和度大小（A）A、不仅会影响晶核的形成速度，而且会影响晶体的长大速度B、只会影响晶核的形成速度，但不会影响晶体的长大速度C、不会影响晶核的形成速度，但会影响晶体的长大速度D、不会影响晶核的形成速度，而且不会影响晶体的长大速度63．下列哪项不是蛋白质的浓度测定的方法（D）。A、凯氏定氮法B.双缩脲法C.福林-酚法D.核磁共振64．吸附剂和吸附质之间作用力是通过（A）产生的吸附称为物理吸附。A.范德华力B库伦力C.静电引力D.相互结合65．羧酸型离子交换树脂必须在（C）的溶液中才有交换能力A.pH＞5BpH﹤7C.pH＞7D.pH﹤566．离子交换树脂适用（B）进行溶胀A.水B乙醇C.氢氧化钠D.盐酸67．分子筛层析指的是（C）A.吸附层析B分配层析C.凝胶过滤D.亲和层析68．对于吸附的强弱描述错误的是（A）A.吸附现象与两相界面张力的降低成反比B某物质自溶液中被吸附程度与其在溶液中的溶解度成正比C.极性吸附剂容易吸附极性物质D.非极性吸附剂容易吸附非极性物质69．离子交换用的层析柱直径和柱长比一般为（B）之间A.1：10-1：20B.1：10-1：50C.1：10-1：30D.1：20-1：5070．通过改变pH值从而使与离子交换剂结合的各个组分被洗脱下来，可使用（A）A.阳离子交换剂一般是pH值从低到高洗脱B阳离子交换剂一般是pH值从高到低洗脱C.阴离子交换剂一般是pH值从低到高D.以上都不对71．疏水亲和吸附层析通常在（D）的条件下进行A.酸性B碱性C.中D.高浓度盐溶液72．气相色谱的载气不能用（C）A.氢气B氦气C.氧气D.氮气73．关于电泳分离中迁移率描述正确的是（A）A.带电分子所带净电荷成正比B分子的大小成正比C.缓冲液的黏度成正比D.以上都不对74．在什么情况下得到粗大而有规则的晶体（A）A.晶体生长速度大大超过晶核生成速度B晶体生长速度大大低于过晶核生成速度C.晶体生长速度等于晶核生成速度D.以上都不对75．人血清清蛋白的等电点为4.64，在PH为7的溶液中将血清蛋白质溶液通电，清蛋白质分子向（A）A：正极移动；B：负极移动；C：不移动；D：不确定。76．关于疏水柱层析的操作错误(D)A疏水层析柱装柱完毕后，通常要用含有高盐浓度的缓冲液进行平衡B疏水层析是利用蛋白质与疏水性吸附剂之间的弱疏水性相互作用的差别进行分离纯化的层析技术C洗脱后的层析柱再生处理，可用8mol/L尿素溶液或含8mol/L尿素的缓冲溶液洗涤，然后用平衡缓冲液平衡D疏水柱层析分辨率很高、流速慢、加样量小77．结晶法对溶剂选择的原则是（C）A、对有效成分溶解度大，对杂质溶解度小B、对有效成分溶解度小，对杂质溶解度大C、对有效成分热时溶解度大冷时溶解度小，对杂质冷热都溶或都不溶D、对有效成分冷热时都溶，对杂质则不溶E、对杂质热时溶解度大，冷时溶解度小78．网格高聚物吸附剂吸附的弱酸性物质，一般用下列哪种溶液洗脱。（D）A.水B.高盐C.低pHD.高pH79．下列哪个不属于初步纯化：(C)A.沉淀法B.吸附法C.离子交换层析D.萃取法80．高效液相色谱仪的种类很多，但是无论何种高效液相色谱仪，基本上由（D）组成。A高压输液系统、进样系统、分离系统、过滤系统、记录系统或色谱工作站等五大部分B进样系统、分离系统、检测系统、记录系统或色谱工作站四大部分C高压输液系统、进样系统、分离系统、检测系统四大部分D高压输液系统、进样系统、分离系统、检测系统、记录系统或色谱工作站等五大部分81．影响电泳分离的主要因素（B）A光照B待分离生物大分子的性质C湿度D电泳时间82．在凝胶过滤（分离范围是5000~400000）中，下列哪种蛋白质最先被洗脱下来（B）A．细胞色素C（13370）B．肌球蛋白（400000）C．过氧化氢酶（247500）D．血清清蛋白（68500）E．肌红蛋白（16900）83．“类似物容易吸附类似物”的原则,一般极性吸附剂适宜于从何种溶剂中吸附极性物质（B）A．极性溶剂B．非极性溶剂C．水D．溶剂84．能够除去发酵液中钙、镁、铁离子的方法是（C）A．过滤B．萃取C．离子交换D．蒸馏85．HPLC是哪种色谱的简称（C）。A．离子交换色谱B.气相色谱C.高效液相色谱D.凝胶色谱86．洗脱体积是（C）。A、凝胶颗粒之间空隙的总体积B、溶质进入凝胶内部的体积C、与该溶质保留时间相对应的流动相体积D、溶质从柱中流出时所用的流动相体积87．分子筛层析纯化酶是根据（C）进行纯化。A.根据酶分子电荷性质的纯化方法B.调节酶溶解度的方法C.根据酶分子大小、形状不同的纯化方法D.根据酶分子专一性结合的纯化方法88．下列哪一项不是阳离子交换树脂（D）A氢型B钠型C铵型D羟型89．按分离原理不同，电泳可分为（A）A区带电泳、自由界面电泳、等速电泳、等电聚焦电泳B纸电泳、醋酸纤维薄膜电泳、琼脂凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳C区带电泳、自由界面电泳、纸电泳、醋酸纤维薄膜电泳D等速电泳、等电聚焦电泳、琼脂凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳90．在酸性条件下用下列哪种树脂吸附氨基酸有较大的交换容量（C）A．羟型阴B．氯型阴C．氢型阳D．钠型阳91．亲和层析的洗脱过程中，在流动相中加入配基的洗脱方法称作（C）A、阴性洗脱B、剧烈洗脱C、竞争洗脱D、非竞争洗脱92．活性炭在下列哪种溶剂中吸附能力最强？（A）A、水B、甲醇C、乙醇D、三氯甲烷93．将配基与可溶性的载体偶联后形成载体-配基复合物，该复合物可选择性地与蛋白质结合，在一定条件下沉淀出来，此方法称为（A）A、亲和沉淀B、聚合物沉淀C、金属离子沉淀D、盐析沉淀94．在选用凝胶层析柱时，为了提高分辨率，宜选用的层析柱是（A）A、粗且长的B、粗且短的C、细且长的D、细且短的简答题1.为什么凝胶过滤层析通常采用恒定洗脱法？2.GFC与其他层析法比较其特点是什么？3.为什么IEC（离子交换层析）很小采用恒定洗脱法？4.线性梯度洗脱法和逐次洗脱法优缺点时什么？5.产生亲和作用的充分必要条件是什么？6.比较特异性洗脱和非特异性洗脱的优缺点。7.蛋白质等生物大分子与小分子化合物的离子交换特性的差别？8.兰格缪尔的单分子层吸附理论的要点是什么？9.为什么离子交换需在低离子强度下进行？1、吸附的概念及类型吸附是利用吸附剂对液体或气体中某一组分具有选择性吸附的能力，使其富集在吸附剂表面的过程。吸附的类型:①物理吸附：吸附剂和吸附物通过分子力（范德华力）产生的吸附;②化学吸附：吸附剂和吸附物之间的电子转移,发生化学反应,形成库仑力而吸附;③交换吸附：吸附剂与吸附物之间发生离子交换而吸附。2、吸附过程的 流程 快递问题件怎么处理流程河南自建厂房流程下载关于规范招聘需求审批流程制作流程表下载邮件下载流程设计 吸附过程:待分离料液与吸附剂混合→吸附质被吸附到吸附剂表面→料液流出→吸附质解吸回收3、大孔吸附树脂的吸附规律大孔网状吸附树脂的种类:非极性吸附树脂;中等极性吸附树脂;极性吸附剂遵循规律：①非极性吸附剂可从极性溶剂中吸附非极性溶质;②极性吸附剂可从非极性溶剂中吸附极性物质;③中等极性吸附剂兼有以上两种能力.4、吸附等温线？当固体吸附剂从溶液中吸附溶质到达平衡时,其吸附量与溶液组成和温度有关,当温度一定时，吸附量与浓度之间的函数关系称为吸附等温线。5、亲和吸附的概念？亲和技术在生化分离中的应用综述？亲和吸附分离是利用溶质和吸附剂之间特殊的化学作用，从而实现分离。吸附剂由载体(载体通常是惰性的,须先活化然后与配基偶联)和配位体组成.6、固定床、流化床、膨胀床吸附的特点及区别？7、离子交换的定义？离子交换是利用离子交换树脂作为吸附剂，将溶液中的待分离组分，依据其电荷差异，依靠库仑力（静电引力）吸附在树脂上，然后利用合适的洗脱剂将吸附质从树脂上洗脱下来，达到分离的目的。8、离子交换树脂的结构组成？①具有三维空间立体结构的网络骨架;②联接在骨架上的活性基团③活性基团所带的相反电荷的活性离子（可交换离子）9、离子交换树脂的预处理方法、再生及洗脱？离子交换操作方法:树脂预处理→离子交换吸附→洗脱树脂预处理方法:①物理处理：水洗、过筛，去杂，以获得粒度均匀的树脂颗粒；②化学处理：用8-10倍树脂体积的盐酸或氢氧化钠溶液交替搅拌浸泡.阳离子树脂:酸—碱—酸;阴离子树脂:碱—酸—碱.最后以去离子水或缓冲液平衡洗脱方式:①改变溶液pH值;②改变溶液离子强度树脂再生是指使离子交换树脂重新具有交换能力的过程。酸性阳离子树脂:酸-碱-酸-缓冲溶液淋洗;碱性阴离子树脂:碱-酸-碱-缓冲溶液淋洗。方式有顺流再生和逆流再生。蛋白质离子交换分离的基本步骤:平衡,上样吸附,洗脱,再生第八章色谱分离1、色谱法的概念色谱分离也称色谱层析、色谱、色层,是指样品中各组成依据其在固定相与流动相之间作用行为的差别进行多次分离的过程。2据溶质分子与固定相相互作用的机理不同而分类的色谱技术主要有几种？根据溶质分子与固定相相互作用的机理不同可分为吸附层析法、分配层析法和凝胶过滤法三大类。其中吸附层析法又包含离子交换色层分离法、疏水作用色层分离法、金属螯合色层分离法和共价作用色层分离法四种。3、各色谱技术的作用机理？⑴柱色谱；①常用柱色谱介质分无机物色谱介质(氧化铝、硅胶、活性炭、膨润土、磷酸钙(凝胶型和晶型)、氧化钛和氢氧化锌凝胶等)和聚合物色谱介质(如琼脂糖、葡聚糖、纤维素和聚丙烯酰胺等)②洗脱方法:恒定洗脱法;逐次洗脱法;梯度洗脱法(最常用)⑵纸层析法:是一种常用的快速分离、鉴定方法，可用于定性分析以及确定分离 方案 气瓶 现场处置方案 .pdf气瓶 现场处置方案 .doc见习基地管理方案.doc关于群访事件的化解方案建筑工地扬尘治理专项方案下载 ，但一般不用于定量分析。介质:滤纸;固定相:水。操作方法：将试样溶于适当溶剂中，点样于滤纸的一端；选用适当的展开剂，借助毛细管现象从点样的一端向另一端流动，展开结束后，取下滤纸，晾干，染色显迹⑶薄层色谱法:将固定相涂布在惰性固体上，形成薄层进行色谱分离的方法操作要点:铺板,点样,点样量展开,显色⑷吸附色谱:指混合物随流动相通过固定相（吸附剂）时，由于固定相对不同物质的吸附力不同而使混合物分离的方法。⑸新的吸附色谱技术，如疏水作用色谱、金属螯合作用色谱和共价作用色谱等，所用吸附剂一般为有机基质并通过化学修饰后制成，它们都有比较明确的作用机理，即疏水作用、螯合作用和共价作用。⑹亲和色谱(AFC):是将与目的产物具有特异亲和力的生物分子固定化后作为固定相从混合物中分离目的产物的过程。亲和作用是特殊的吸附作用。过程:载体活化、配基连接、吸附、洗脱⑺分配色谱又称为液液色谱，其原理是利用混合物中各物质在两液相中的分配系数不同而分离。要素：固定相、载体、流动相⑻凝胶色谱(见下第5题)气相色谱可分为气固色谱和气液色谱.是指用气体作为流动相的色谱法。系统组成:气路系统;进样系统;分离系统;温控系统;检测记录系统⑽高效液相色谱(HPLC)与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱法.4、柱色谱系统的组成？一般由蠕动泵、色谱柱、检测器、记录仪以及部分收集器等几个部分构成。5、凝胶色谱的定义？凝胶色谱:以一定孔径的凝胶为固定相，是一种根据各物质分子大小不同而进行分离的色谱技术，因而又称为分子筛色谱、空间排阻色谱。凝胶色谱分为两大类：凝胶过滤色谱和凝胶渗透色谱。6、阻滞因子(Rf)?阻滞因子是在色谱系统中溶质的移动速度和 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 物（与固定相没有亲和力的流动相Kd=0）的迁移率之比Rf=电泳是指荷电的胶体粒子在电场中的移动.电泳现象中的表面电势和双电层的因素起着决定性的作用。1、带电粒子在电场中的迁移方式主要依据哪些因素？带电粒子在电场中的迁移方式主要依据分子尺寸大小和形状、分子所带电荷或分子的生物学与化学特性。2、依据电泳原理，三种形式的电泳分离系统是什么？常用的是什么？依据电泳原理，有三种形式的电泳分离系统：移动界面电泳、区带电泳、稳态电泳；其中区带电泳是目前常用的电泳系统。区带电泳中的常用技术：①载体电泳：粉末电泳、纸电泳、凝胶电泳、聚焦电泳；②无载体电泳：自由电泳、毛细管电泳凝胶电泳的支持介质：聚丙烯酰胺凝胶；琼脂糖凝胶影响丙烯酰胺聚合的主要因素:引发剂和增速剂的浓度;系统pH值;温度;分子氧ABC＋-聚丙烯酰胺凝胶电泳中的分子筛效应:凝胶中的大分子分离取决于它的电荷、尺寸和形状。凝胶的这种用于分离不同尺寸分子的特性是由于它的尺寸筛分能力，这种现象被称为分子筛效应。图中A，B，C均为阳离子，在直流电场作用下电泳情况示意图分子量大小依次为MA=MB>MC，所带电荷量相同QA=QB=QC1、结晶：溶液中的溶质在一定条件下，因分子有规则的排列而结合成晶体，晶体的化学成分均一，具有各种对称的晶体，其特征为离子和分子在空间晶格的结点上呈规则的排列；结晶的实质是指溶质自动从过饱和溶液中析出，形成新相的过程2、结晶的步骤：①过饱和溶液的形成；②晶核的形成；③晶体生长其中，溶液达到过饱和状态是结晶的前提；过饱和度是结晶的推动力。二.讨论题请结合图示简述凝胶排阻色谱（分子筛）的分离原理；答：凝胶排阻色谱的分离介质（填料）具有均匀的网格结构，其分离原理是具有不同分子量的溶质分子，在流经柱床是，由于大分子难以进入凝胶内部，而从凝胶颗粒之间流出，保留时间短；而小分子溶质可以进入凝胶内部，由于凝胶多孔结构的阻滞作用，流经体积变大，保留时间延长。这样，分子量不同的溶质分子得以分离.绘制结晶过程中饱和曲线和过饱和曲线图，并简述其意义；答：结晶过程中的饱和温度曲线和不饱和温度曲线的简图如右图所示：S-S曲线为饱和温度曲线，在其下方为稳定区，在该区域溶液为不饱和溶液，不会自发结晶；T-T曲线为过饱和温度曲线，在其上方为不稳定区，能够自发形成结晶；S-S曲线和T-T曲线之间为亚稳定区，在该区域，溶液为过饱和溶液，但若无晶种存在，也不能自发形成晶体何谓亲和吸附，有何特点？答：亲和吸附是吸附单元操作的一种，它是利用亲和吸附剂与目标物之间的特殊的化学作用实现的高效分离手段。亲和吸附剂的组成包括：惰性载体、手臂链、特异性亲和配基。亲和吸附的特点是高效、简便、适用范围广、分离速度快、条件温和，但载体制备难度大，通用性差，成本较高。简述结晶过程中晶体形成的条件；答：结晶过程包括过饱和溶液的形成、晶核的形成及晶体的生长三个过程，其中溶液达到过饱和状态是结晶的前提，过饱和度是结晶的推动力。试比较常规聚丙稀酰胺凝胶电泳与SDSPAGE的分离原理；答：常规聚丙烯酰胺凝胶电泳和SDS-PAGE均为凝胶电泳的一种。聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质是依据其电荷（性质、荷电量）、分子形状和分子大小（分子量）差异实现分离的；SDS-PAGE由于加入了SDS和强还原剂（DTT等），破坏了蛋白质分子的高级（二级、三级、四级）结构，并与蛋白质形成荷大量负电荷的聚合物，消除了不同蛋白质分子电荷及分子形状差异，而仅将分子量差异作为分离依据，常用于测定未知蛋白质的亚基分子量。何谓色谱的理论塔板数，如何计算？答：理论塔板数反应不同时刻溶质在色谱柱中的分布以及分离度与柱高之间的关系。N-理论塔板数tR-保留时间W1/2半峰宽Wb-峰底宽简述疏水层析的原理，并说明基本操作步骤；答：在载体表面连接上疏水的直链碳链或其他疏水基团，可以与蛋白质的某些疏水基团相互作用，从而实现多组分的分离。在高盐浓度下，蛋白质表面的疏水区域暴露，固定相表面修饰了一些疏水基团，这样蛋白质的疏水部分即可与固定相发生较强的疏水相互作用，从而被结合在固定相表面，而一旦降低流动相的盐浓度即可实现蛋白质的洗脱。结合SDSPAGE电泳的分离原理说明未知蛋白质分子量的测定方法；答：以不同分子量的标准蛋白进行SDS-PAGE电泳得到不同标准蛋白的电泳迁移率，制作标准曲线，然后对未知蛋白在相同条件下进行SDS-PAGE电泳，测定迁移率，从标准曲线得到相应的分子量。请说明在进行SDSPAGE电泳之前，样品的处理方法，并解释其原因；答：样品处理方法：加入SDS和还原剂DTT.原因：SDS-PAGE由于加入了SDS和强还原剂，破坏了蛋白质分子的高级结构，并与蛋白质形成带大量负电荷的聚合物，消除了不同蛋白质分子电荷及分子形状的差异，而仅将分子量差异作为分离的依据，常用于测定未知蛋白质的亚基分子量。简述载体两性电介质梯度等电聚焦（IEF）的分离原理；答：在支持介质中加入载体两性电解质，通以直流电后在两极之间形成稳定、连续和线性的pH梯度，当带电的蛋白质分子进入该体系时，便会产生移动，并聚集于相当其等电点的位置。离子交换分离单元的基本过程有哪几部分？答：①样品准备②离子交换剂和层析剂的制备③上样④目的蛋白的洗脱⑤洗脱液的鉴定和回收⑥离子交换剂的再生和储存试比较物理吸附与化学吸附过程；答：物理吸附吸附剂与吸附质之间的作用力是分子间作用力，物理吸附无选择性，吸附量可因物系不同而相差很多，可在低温下进行，不需要较高活化能，可以是单分子层也可以是多分子层。化学吸附在吸附质与吸附剂之间有电子转移，形成化学键，因此化学吸附需要较高的活化能，需要在较高温度下进行，化学吸附放出的热量很大，只能是单分子层吸附，且不易吸附和解吸，平衡慢，化学吸附选择性较强简述活性炭的吸附规律？答：活性炭是非极性吸附剂，因此在水溶液中吸附力最强，在有机溶剂中吸附力较弱。在一定条件下，活性炭对不同物质的吸附力不同，一般遵循下列规律：极性基团多的化合物的吸附力大于极性基团少的化合物；②对芳香族化合物的吸附力大于脂肪族化合物；性炭对分子量大的化合物的吸附力大于分子量小的化合物；酵液的pH与活性炭的吸附率有关；活性炭吸附溶质的量在达到平衡前一般随温度提高而增加，但在提高温度时应考虑到溶质对热的稳定性。判断题1.色谱分离技术中固定相都是固体。（）2.采用凝胶层析分离时，在所用的凝胶的分离范围内，溶质分子量越小洗脱越快。（）3.流动相为气体的色谱称为气相色谱。（√）4.凝胶层析会使得大分子后流出，小分子先流出。（）5.酸性、中性、碱性氨基酸在强碱性阴离子交换树脂上的吸附顺序为酸性＞中性＞碱性氨基酸。6.采用活性炭为吸附剂时，所用洗脱剂应从高极性开始，逐渐降低洗脱剂的极性。7.凝胶层析会使得大分子后流出，小分子先流出。8..离子交换树脂是一种不溶于酸、碱及有机溶剂的固体化合物。9.离子交换的推动力是离子浓度差。（）10.离子交换树脂的交联度大，其网孔大，机械强度大。()11.利用阳离子交换树脂去除钙镁离子后的水称为去离子水。()12.由于pH值可能对蛋白的稳定性有较大的影响，故一般通常采用改变离子强度的梯度洗脱。13.测定阴离子交换树脂的总交换容量可采用Cl-将OH-交换下来后用稀盐酸滴定洗脱液中OH-的量即得到树脂的总将换容量。（）14.采用凝胶过滤分离蛋白质主要取决于蛋白质分子的大小，先将蛋白质混合物上柱然后进行洗脱，小分子的蛋白质由于所受排阻力较小首先被洗脱出来。（）15．蛋白质变性，一级、二级、三级结构都被破坏。（×）16．酸性、中性、碱性氨基酸在强碱性阴离子交换树脂柱上的吸附顺序是碱性氨基酸＞中性氨基酸＞酸性氨基酸（×）17．离子交换剂是一种不溶于酸、碱及有机溶剂的固态学分子化合物。（√）18．离子交换速率总是取决于内部扩散速率。（×）19．只有树脂对被交换离子比原结合在树脂上的离子具有更高的选择性时，静态离子交换操作才有可能获得较好的效果。（√）20．层析分离是一种化学的分离方法。（×）21．离子交换剂可以分为3部分：高分子聚合物基质、电荷基团和被交换离子。（×）22．凝胶柱层析可进行生物大分子分子量的测定。（√）23．在高浓度盐溶液中疏水性相互作用减小。（×）24．色谱分离技术中固定相都是固体。（×）25．色谱分离技术中被检测物质的峰越宽越好。（×）26．在聚丙烯酰胺凝胶中加入阴离子去污剂十二烷基硫酸钠（SDS），影响凝胶的形成。（×）27．等电聚焦电泳会形成的一个由阳极到阴极逐步递减的pH梯度。（×）28．由于pH值可能对蛋白的稳定性有较大的影响，故一般通常采用改变离子强度的梯度洗脱（√）29．凝胶层析会使得大分子物质后流出，小分子物质先流出。（×）30．同一化合物用不同溶剂重结晶，其结晶的熔点可能有差距。（√）计算题2、应用离子交换树脂作为吸附剂分离抗菌素，饱和吸附量为0.06Kg（抗菌素）/Kg（干树脂）；当抗菌素浓度为0.02Kg/m3时，吸附量为0.04Kg/Kg；假定此吸附属于Langmuir等温吸附，求料液含抗菌素0.2Kg/m3时的吸附量。