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DNA浓度的测定方法

DNA浓度的测定方法用分光光度计法定量DNA： 1.取2μl提取的质粒DNA，加入98ul蒸馏水对待测DNA样品做1:50(或更高倍数的稀释); 2.蒸馏水作为空白,在波长260nm、280nm处调节紫外分光光度计读数至零。 3.加入DNA稀释液，测定260nm 及280nm的吸收值。 4.记录OD值，通过计算确定DNA浓度或纯度，公式如下: dsDNA=50×(OD260) × 稀释倍数以上浓度单位为μg /ml 1 OD值的单链寡核苷酸大约33 mg，双链寡核苷酸约为 50.mg。 A260/ A280比值，比值...

用分光光度计法定量DNA： 1.取2μl提取的质粒DNA，加入98ul蒸馏水对待测DNA样品做1:50(或更高倍数的稀释); 2.蒸馏水作为空白,在波长260nm、280nm处调节紫外分光光度计读数至零。 3.加入DNA稀释液，测定260nm 及280nm的吸收值。 4.记录OD值，通过计算确定DNA浓度或纯度，公式如下: dsDNA=50×(OD260) × 稀释倍数以上浓度单位为μg /ml 1 OD值的单链寡核苷酸大约33 mg，双链寡核苷酸约为 50.mg。 A260/ A280比值，比值在1.8-2之间，说明样品满足实验要求。寡核苷酸的定量：　　Oligo DNA是以OD260值来计量的。在1cm光程标准石英比色皿中,260nm波长下吸光度为1的１毫升Oligo溶液定义为1 OD260。虽然对于每种特定的寡核苷酸来说,其碱基的组成不尽相同,但1 OD260 Oligo DNA的重量约为33 μg，每个碱基的平均分子量约为330 Da。因此合成的水的量（ml）= [OD值×33]/[(碱基数×330) ×所需浓度（μM）]溶解好的DNA最好保存在－20℃，带有荧光标记的引物请注意避光保存蛋白质分子中含有共轭双键的酪氨酸、色氨酸等芳香族氨基酸。它们具有吸收紫外光的性质，其吸收高峰在280nm波长处，且在此波长内吸收峰的光密度值与其浓度成正比关系，故可作为蛋白质定量测定的依据，但由于各种蛋白质的酪氨酸和色氨酸的含量不同，故要准确定量，必需要有待测蛋白质的纯品作为标准来比较，或且已经知道其消光系数作为参考。另外，不少杂质在280nm波长下也有—定吸收能力，可能发生干扰。其中尤以核酸(嘌呤和嘧啶碱)的影响更为严重。然而核酸的最大吸收峰是在260nm。因此溶液中同时存在核酸时，必须同时测定OD260nm，与OD280nm。，然后根据两种波长的吸收度的比值，通过经验公式校正，以消除核酸的影响而推算出蛋白质的真实含量。

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