实验常用试剂、缓冲液的配制方法1、1MTris-HCl □组份浓度1MTris-HCl(pH7.4,7.6,8.0) □配制量1L □配置方法1.称量121.1gTris置于1L烧杯中。 2.加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。 3.按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。 pH值 浓HCl 7.4 约70mL 7.6 约60mL 8.0 约42mL 4.将溶解定容至1L。 5.高温高压灭菌后,室温保存。 注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差很大,温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。 2、1.5MTris-HCl □组份浓度1.5MTris-HCl (pH8.8) □配制量1L □配置方法1.称取181.7gTris置于1L烧杯中。 2.加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。 3.用浓盐酸调pH值至8.8。 4.将溶液定容至1L。 5.高温高压灭菌后,室温保存。 注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。 3、10×TEBuffer □组份浓度100mMTris-HCl,10mMEDTA(pH7.4,7.6,8.0) □配制量1L □配置方法1.量取下列溶液,置于1L烧杯中。 1MTris-HClBuffer(pH7.4,7.6,8.0)100mL 500mMEDTA(pH8.0)20mL 2.向烧杯中加入约800mL的去离子水,均匀混合。 3.将溶液定至1L后,高温高压灭菌。 4.室温保存。4、3M醋酸钠 □组份浓度3M醋酸钠 (pH5.2) □配制量100mL □配置方法1.称取40.8gNaOAc•3H2O置于100~200mL烧杯中,加入约40mL的去离子水搅拌溶解。 2.加入冰乙酸调节pH值至5.2。 3.加入去离子水将溶液定容至100mL。 4.高温高压灭菌后,室温保存。5、PBSBuffer □组份浓度137mMNaCl,2.7mMKCl,10mMNa2HPO4,2mMKH2PO4 □配制量1L□配置方法1.称量下列试剂,置于1L烧杯中。 NaCl 8g KCl 0.2g Na2HPO4 1.42g KH2PO4 0.27g 2.向烧杯中加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。 3.滴加HCl将pH值调节至7.4,然后加入去离子水将溶液定容至1L。 4.高温高压灭菌后,室温保存。 注意:上述PBSBuffer中无二价阳离子,如需要,可在配方中补充1mMCaCl2和0.5mMMgCl2。6、10M醋酸铵 □组份浓度10M醋酸铵 □配制量100mL □配置方法1.称量77.1g醋酸铵置于100~200mL烧杯中,加入约30mL的去离子水搅拌溶解。 2.加去离子水将溶液定容至100mL。 3.使用0.22μm滤膜过滤除菌。 4.密封瓶口于室温保存。 注意:醋酸铵受热易分解,所以不能高温高压灭菌。7、Tris-HCl平衡苯酚 □配置方法 1.使用原料:大多数市售液化苯酚是清亮无色的,无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色,应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚,结晶苯酚必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物,这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此,苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要,我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。 2.操作注意:苯酚腐蚀性极强,并可引起严重灼伤,操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行,与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗,并用肥皂和水洗涤,忌用乙醇。 3.苯酚平衡:因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相,因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上,苯酚平衡操作方法如下: ①液化苯酚应贮存于-20℃,此时的苯酚呈现结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温,然后在68℃水浴中使苯酚充分溶解。 ②加入羟基喹啉(8-Quinolinol)至终浓度0.1%。该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂,同时因其呈黄色。有助于方便识别有机相。 ③加入等体积的1MTris-HCl(pH8.0),使用磁力搅拌器搅拌15分钟,静置使其充分分层后,除去上层水相。 ④重复操作步骤③。 ⑤加入等体积的0.1MTris-HCl(pH8.0),使用磁力搅拌器搅拌15分钟,静置使其充分分层后,除去上层水相。 ⑥重复操作步骤⑤,稍微残留部分上层水相。 ⑦使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。 ⑧将苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。8、苯酚/氯仿/异戊醇 □配置方法 1.说明:从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯/酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)。氯仿可使蛋白(25:24:1)质变性并有助于液相与有机相的分离,而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。 2.配置方法:将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇(24:1)均匀混合后,移入棕色玻璃瓶中4℃保存。 9、10%(W/V)SDS □组份浓度10%(W/V)SDS □配制量100mL □配置方法1.称量10g高纯度的SDS置于100~200mL烧杯中,加入约80mL的去离子水,68℃加热溶解。 2.滴加数滴浓盐酸调节pH值至7.2。 3.将溶液定容至100mL后,室温保存。10、2NNaOH □组份浓度2NNaOH □配制量100mL □配置方法1.量取80mL去离子水置于100~200mL塑料烧杯中(NaOH溶解过程中大量放热,有可能使玻璃烧杯炸裂)。 2.称取8gNaOH小心地逐渐加入到烧杯中,边加边搅拌。 3.待NaOH完全溶解后,用去离子水将溶液体积定容至100mL。 4.将溶液转移至塑料容器中后,室温保存。11、2.5NHCl □组份浓度2.5NHCl □配制量100mL □配置方法1.在78.4mL的去离子水中加入21.6mL的浓盐酸(11.6N),均匀混合。 2.室温保存。12、5MNaCl □组份浓度5MNaCl □配制量1L □配置方法1.称取292.2gNaCl置于1L烧杯中,加入约800mL的去离子水后搅拌溶解。 2.加去离子水将溶液定容至1L后,适量分成小份。 3.高温高压灭菌后,4℃保存。13、20%(W/V)Glucose □组份浓度20%(W/V)Glucose □配制量100mL □配置方法1.称取20gGlucose置于100~200mL烧杯中,加入约80mL的去离子水后,搅拌溶解。 2.加去离子水将溶液定容至100mL。 3.高温高压灭菌后,4℃保存。14、SolutionI □组份浓度25mMTris-HCl(pH8.0),10mMEDTA,50mMGlucose(质粒提取用) □配制量1L □配置方法1.量取下列溶液,置于1L烧杯中。1MTris-HCl(pH8.0) 25mL 0.5MEDTA(pH8.0) 20mL 20%Glucose(1.11M) 45mL dH2O 910mL 2.高温高压灭菌后,4℃保存。 3.使用前每50mL的SoliutionI中加入2mL的RNaseA(20mg/mL)。15、SolutionII □组份浓度250mMNaOH,1%(W/V)SDS(质粒提取用) □配制量500mL □配置方法1.量取下列溶液置于500mL烧杯中。 10%SDS 50mL 2NNaOH 50mL 2.加灭菌水定容至500mL,充分混匀。 3.室温保存。此溶液保存时间最好不要超过一个月。 注意:SDS易产生气泡,不要剧烈搅拌。16、SolutionIII □组份浓度3MKOAc,5MCH3COOH(质粒提取用) □配制量500mL □配置方法1.量取下列溶液置于500mL烧杯中。 KOAc 147g CH3COOH 57.5mL 2.加入300mL去离子水后搅拌溶解。 3.加去离子水将溶液定容至500mL。 4.高温高压灭菌后,4℃保存。17、0.5MEDTA □组份浓度0.5MEDTA (pH8.0) □配制量1L □配置方法1.称取186.1gNa2EDTA•2H2O,置于1L烧杯中。 2.加入约800mL的去离子水,充分搅拌。 3.用NaOH调节pH值值8.0(约20gNaOH)。 注意:pH值至8.0时,EDTA才能完全溶解。 4.加去离子水将溶液定容至1L。 5.适量分成小份后,高温高压灭菌。 6.室温保存。18、1MDTT □组份浓度1MDTT □配制量20mL □配置方法1.称取3.09gDTT,加入到50mL塑料离心管内。 2.加20mL的0.01M的NaOAc(pH5.2),溶解后使用0.22μm滤器过滤除菌。 3.适量分成小份后,-20℃保存。19、10mMATP □组份浓度10mMATP □配制量20mL□配置方法1.称取121mgNa2ATP•3H2O,加入到50mL塑料离心管内。 2.加20mL的25mMTris-HCl(pH8.0),搅拌溶解。 3.适量分成小份,-20℃保存。分子生物学实验常用培养基的配制方法1、Ampicillin □组份浓度100mg/mlAmpicillin(100mg/ml) □配制量50mL □配置方法1.称量5gAmpicillin置于50mL离心管中。 2.加入40mL灭菌水,充分混合溶解后,定容至50mL。 3.用0.22μm滤膜过滤除菌。 4.小份分装(1mL/份)后,-20℃保存。2、IPTG □组份浓度24mg/mLIPTG(24mg/mL) □配制量50mL 配置方法1.称量1.2gIPTG置于50mL离心管中。 2.加入40mL灭菌水,充分混合溶解后,定容至50mL。 3.用0.22μm滤膜过滤除菌。 4.小份分装(1mL/份)后,-20℃保存。3、X-Gal □组份浓度20mg/mLX-Gal(20mg/mL) □配制量50mL □配置方法1.称取1gX-Gal置于50mL离心管中。 2.加入40mLDMF(二甲基甲酰胺),充分混合溶解后,定容至50mL。 3.小份分装(1mL/份)后,-20℃保存。4、LB培养基 □组份浓度1%(W/V)Tryptone,0.5%(W/V)YeastExtract,1%(W/V)NaCl □配制量1L □配置方法1.称量下列试剂,置于1L烧杯中 Tryptone 10g YeastExtract 5g NaCl 10g 2.加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。 3.滴加5NNaOH(约0.2mL),调节pH值至7.0。 4.高温高压灭菌后,4℃保存。5、LB/Amp培养基 □组份浓度 1%(W/V) Tryptone 0.5%(W/V) YeastExtract 1%(W/V) NaCl 0.1mg/mL Ampicillin □配制量1L □配置方法1.称量下列试剂,置于1L烧杯中 Tryptone 10g YeastExtract 5g NaCl 10g 2.加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。 3.滴加5NNaOH(约0.2mL),调节pH值至7.0。 4.加去离子水将培养基定容至1L。 5.高温高压灭菌后,冷却至室温。 6.加入1mLAmpicillin(100mg/mL)后均匀混合。 7.4℃保存。6、TB培养基 □组份浓度 1.2%(W/V) Tryptone 2.4%(W/V) YeastExtract 0.4%(V/V) Glycerol 17mM KH2PO4 72mM K2HPO4 □配制量1L □配置方法1.配制磷酸盐缓冲液(0.17MKH2PO4,0.72MK2HPO4)100mL。 2.称取下列试剂,置于1L烧杯中。 Tryptone 12g YeastExtract 24g Glycerol 4mL 3.加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。 4.加去离子水将培养基定容至1L后,高温高压灭菌。 5.待溶液冷却至60℃以下时,加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液。 6.4℃保存。7、TB/Apm培养基 □组份浓度1.2%(W/V) Tryptone 2.4%(W/V) YeastExtract 0.4%(V/V) Glycerol 17mM KH2PO4 72mM K2HPO4 0.1mg/mL Ampicillin □配制量1L□配置方法1.配制磷酸盐缓冲液(0.17MKH2PO4,0.72MK2HPO4)100mL。溶解2.31gKH2PO4和2.54gK2HPO4于90mL的去离子水中,搅拌溶解后,加去离子水定容至100mL,高温高压灭菌。 2.称取下列试剂,置于1L烧杯中。 Tryptone 12g YeastExtract 24g Glycerol 4mL3.加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。4.加去离子水将培养基定容至1L后,高温高压灭菌。 5.待溶液冷却至60℃以下时,加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液和1mLAmpicillin(100mg/mL)。 6.均匀混合后4℃保存。8、SOB培养基 □组份浓度2%(W/V) Tryptone 0.5%(W/V) YeastExtract 0.05%(W/V)NaCl 2.5mM KCl 10mM MgCl2 □配制量1L □配置方法1.配制250mMKCl溶液。 在90mL的去离子水中溶解1.86gKCl后,定容至100mL。2.配制2MMgCl2溶液。在90mL的去离子水中溶解19gMgCl2后,定容至100mL,高温高压灭菌。3.称取下列试剂,置于1L烧杯中。 Tryptone 20g YeastExtract 5g NaCl 0.5g4.加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。5量取10mL250mMKCl溶液,加入到烧杯中。 6.滴加5NNaOH溶液(约0.2mL),调节pH值至7.0。7.加入去离子水将培养基定容至1L。8.高温高压灭菌后,4℃保存。 9.使用前加入5mL灭菌的2MMgCl2溶液。9、SOC培养基 □组份浓度 2%(W/V) Tryptone 0.5%(W/V) YeastExtract 0.05%(W/V) NaCl 2.5mM KCl 10mM MgCl2 20mM 葡萄糖 □配制量100mL□配置方法1.配制1M葡萄糖溶液。将18g葡萄糖溶于90mL去离子水中,充分溶解后定容至100mL,用0.22μm滤膜过滤除菌。2.向100mLSOB培养基中加入除菌的1M葡萄糖溶液2mL,均匀混合。3.4℃保存。10、2×YT培养基 □组份浓度1.6%(W/V)Tryptone,1%(W/V)YeastExtract,0.5%(W/V)NaCl □配制量1L □配置方法1.称取下列试剂,置于1L烧杯中。 Tryptone 16g YeastExtract 10g NaCl 5g 2.加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。 3.滴加1NKOH,调节pH值至7.0。 4..加水离子水将培养基定容至1L。 5.高温高压后,4℃保存。11、Φb×broth培养基□组份浓度2%(W/V)Tryptone,0.5%(W/V)YeastExtract,0.5%(W/V)MgSO4•7H2O □配制量1L □配置方法1.称取下列试剂,置于1L烧杯中。 Tryptone 20g YeastExtract 5g MgSO4•7H2O 5g 2.加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。 3.滴加1NKOH,调节pH值至7.5。 4..加水离子水将培养基定容至1L。 5.高温高压后,4℃保存。12、NZCYM培养基 □组份浓度 0.5%(W/V) YeastExtract 0.1%(W/V) CasaminoAcid 1%(W/V) NZ胺 0.5%(W/V) NaCl 0.2%(W/V) MgSO4•7H2O □配制量1L □配置方法1.称取下列试剂,置于1L烧杯中。 YeastExtract 5g CasaminoAcid 1g NZ胺 10g NaCl 5g MgSO4•7H2O 2g 2.加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。 3.滴加5NNaOH溶液(约0.2mL),调节pH值至7.0。 4..加水离子水将培养基定容至1L。 5.高温高压后,4℃保存。13、NZYM培养基 □组份浓度 0.5%(W/V) YeastExtract 1%(W/V) NZ胺 0.5%(W/V) NaCl 0.2%(W/V) MgSO4•7H2O □配置方法NZYM培养基除不含CasaminoAcid(酪蛋白氨基酸)外,其他成份与NZCYM培养基相同。14、NZM培养基 □组份浓度 1%(W/V) NZ胺 0.5%(W/V) NaCl 0.2%(W/V) MgSO4•7H2O□配置方法NZM培养基除不含YeastExtract(酵母提取物)外,其他成份与NZYM培养基相同。15、一般固体培养基的 □配置方法1.按照液体培养基配方准备好液体培养基,在高温高压灭菌前,加入下列试剂中的一种。 配制 Agar(琼脂:铺制平板用) 15g/L Agar(琼脂:配制顶层琼脂用) 7g/L Agarose(琼脂糖:铺制平板用) 15g/L Agarose(琼脂糖:配制顶层琼脂用)7g/L 2.高温高压灭菌后,带上手套取出培养基,摇动容器使琼脂或琼脂糖充分混匀(此时培养基温度很高,小心烫伤)。 3.待培养基冷却至50~60℃时,加入热不稳定物质(如抗生素),摇动容器充分混匀。 4..铺制平板(30~35mL培养基/90mm培养皿)。16、LB/Amp/X-Gal/IPTG □组份浓度 1%(W/V) Tryptone 平板培养基 0.5%(W/V) YeastExtract 1%(W/V) NaCl 0.1mg/mL Ampicillin 0.5%(W/V) IPTG 0.04mg/mL X-Gal 1.5%(W/V) Agar □配制量1L □配置方法1.称取下列试剂,置于1L烧杯中。 Tryptone 10g YeastExtract 5g NaCl 10g 2.加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。 3.滴加5NNaOH溶液(约0.2mL),调节pH值至7.0。 4.加水离子水将培养基定容至1L后,加入15gAgar。 5.高温高压灭菌后,冷却至60℃左右。 6.加入1mLAmpicillin(100mg/mL)、1mLIPTG(24mg/mL)、2mLX-Gal(20mg/mL)后均匀混合。 7.铺制平板(30~35mL培养基/90mm培养基)。 8.4℃保存平板。17、TB/Amp/X-Gal/IPTG □组份浓度 1.2%(W/V) Tryptone 平板培养基 2.4%(W/V) YeastExtract 0.4%(W/V) Glycerol 17mM KH2PO4 72mM K2HPO4 0.1mg/mL Ampicillin 0.024mg/mL IPTG 0.04mg/mL X-Gal 1.5%(W/V) Agar □配制量1L □配置方法1.配制磷酸盐缓冲液(0.17MKH2PO4,0.72MK2HPO4)100mL。 2.称取下列试剂,置于1L烧杯中。 Tryptone 12g YeastExtract 24g Glycerol 4mL 3.加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。 4.加水离子水将培养基定容至1L后,加入15gAgar。 5.高温高压灭菌后,冷却至60℃左右。 6.加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液、1mLAmpicillin(100mg/mL)、1mLIPTG(24mg/mL)、2mLX-Gal(20mg/mL)后均匀混合。 7.铺制平板(30~35mL培养基/90mm培养基)。 8.4℃保存平板。生物化学实验常用试剂的配制方法1、0.5mol/L氢氧化钠溶液□组份浓度0.5mol/L □配制量 2L □配置方法1.准确称取氢氧化钠40g。 2.用去离子水溶解并稀释至2L。 2、0.5mol/L盐酸溶液 □组份浓度 0.5mol/L □配制量 2L □配置方法1.准确量取盐酸83.4mL。 2.用去离子水稀释至2L。4、0.2%葡萄糖标准溶液 □组份浓度0.2% □配制量1L □配置方法1.称取葡萄糖2.5g置于称量瓶中,在70℃干燥2小时。 2.干燥器中冷却至室温,重复干燥,冷却至恒重。 3.准确称取葡萄糖2.000g。 4.用去离子水溶解并定容至1L 5.于4℃保存。5、250μg/mL牛血清 □组份浓度250μg/mL白蛋白标准液 □配制量2L □配置方法1.准确称取250mg标准牛血清白蛋白。 2.用0.03mol/LpH7.8的磷酸缓冲液溶解并定容至1L。 3.4℃保存。6、Folin试剂甲 □配置方法1.称取10g氢氧化钠溶于400mL去离子水中, 加入50g无水碳酸钠,溶解,待用。 2.称取0.5g酒石酸钾钠,溶于80mL去离子水中, 加入0.25g硫酸铜•5水,溶解。 3.将1:2:去离子水按20:4:1的比例混合即可。 4.4℃保存,可用一周。7、Folin试剂乙 □配置方法1.在500mL的磨口回流装置内加入钨酸钠•2水25.0359g, 钼酸钠•2水6.2526g,去离子水175mL,85%磷酸12.5mL, 浓盐酸25mL,充分混合。 2.回流10小时,再加硫酸锂37.5g,去离子水12.5mL及数滴溴。 3.然后开口沸腾15min,以驱除过量的溴,冷却后定容到250mL。 4.于棕色瓶中保存,可使用多年 注意:上述制备地Folin试剂乙地贮备液浓度一般在2mol/L左右,几种操作
方案
气瓶 现场处置方案 .pdf气瓶 现场处置方案 .doc见习基地管理方案.doc关于群访事件的化解方案建筑工地扬尘治理专项方案下载
都是把Folin试剂乙稀释至1mol/L的 浓度作为应用液,我们这时是把贮备液于使用前稀释18倍,使之浓度为0.1mol/L略高。这种稀释18倍后的Folin试剂乙就是上文称之为的“应用液”。Folin试剂乙贮备 液浓度的标定,一般是以酚酞为指示剂。用Folin试剂乙去滴定1mol/L左右的标准氢氧化钠溶液,当溶液颜色由红变为紫灰,再突然变成墨绿即为终点,如果用氢氧化钠去滴定Folin试剂乙,终点不太好掌握,溶液地颜色是由浅黄变为浅绿,再变为灰紫色为终点。 8、DNS试剂 □配置方法1.取3,5-二硝基水杨酸10g,加入2mol/L氢氧化钠溶液200mL。(3,5-二硝基水杨酸试剂) 2.将3,5-二硝基水杨酸溶解,然后加入酒石酸钾钠300g。3.待其完全溶解,用去离子水稀释至2000mL,棕色瓶保存。 9、5%蔗糖溶液 □组份浓度5% □配制量1L □配置方法称取蔗糖50g,用去离子水溶解定容至1L。 10、0.1mol/L蔗糖溶液 □组份浓度0.1mol/L □配制量1L □配置方法称取蔗糖34.230g,用去离子水溶解并定容至1L。11、20%乙酸溶液 □组份浓度20% □配制量1.2L □配置方法量取冰乙酸300mL,用去离子水稀释至1200mL。 12、30%(W/V)Acrylamide □组份浓度30%(W/V)Acrylamide0.05% □配制量1L □配置方法1.称量下列试剂,置于1L烧杯中 Acrylamide 290g BIS