糖化血红蛋白分析仪色谱原理Bio-Rad公司孙玉茹色谱的介绍色谱:将混合物分离成各个成分的一种分离和鉴定技术HPLCHPLC：HighPerformanceLiquidChromatography，色谱的一种Variant/VariantII/D10使用高效液相色谱法原理分离的依据是离子交换，即各组分与分析柱内
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面或者缓冲液的亲和力的大小不同由输液系统、进样系统、分离系统、检测系统、
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系统五大部分组成。色谱仪组成分析柱分析柱内填充一种填料，在填料分子的内表面偶联了带负电荷的集团分析柱血红蛋白分子分裂形成带正电荷的分子，可与分析柱上的COO-结合分离不同血红蛋白成分的分离基于它们与缓冲液和分析柱的亲和力的大小不同与缓冲液的亲和力越大，越快被洗脱下来，保留时间（Retentiontime）越短；相反，与分析柱的亲和力越大，越慢被洗脱下来，保留时间越长。RetentionTimeRetentiontime：各组分未被缓冲液洗脱下来前在分析柱上保留的时间相同组分的retentiontime在相同的条件下、不同的运行中应当是相同的RetentionTime影响保留时间的因素:1)缓冲液2)分析柱3)温度4)流速5)样本内的其它组分RetentionTime温度升高，保留时间缩短-由于各组分更快的被从分析柱上洗脱下来流速增加，保留时间缩短缓冲液原理上仅使用一种缓冲液和一个分析柱也能分离各个组分。但是大部分厂家均采用多种缓冲液的方法已获得更好和更快的分离效果缓冲液D10/VariantIIA1c方法使用bis/tris缓冲液，其对血红蛋白的分离效果很好这与采用磷酸盐缓冲液的Variant仪器有所不同缓冲液Alc方法在每个样本的分析中通过加大B缓冲液的百分比，即增加盐浓度来洗脱分析柱上的一些成分VariantIIA1c缓冲液梯度A1c缓冲液B缓冲液为高盐浓度缓冲液缓冲液中盐浓度的增加可将分析柱上的Ao血红蛋白成分洗脱下来A1c方法洗脱下来的血红蛋白成分包括:A1aA1bF(胎儿血红蛋白)可变A1cA1cP3AoA1c方法A1a,A1b,A1c和可变A1c成分是有糖成分结合的糖化血红蛋白Ao,P3和F成分是没有糖成分结合的血红蛋白Ao,P3和F成分大概占正常人红细胞内血红蛋白的90%A1c方法A1a,A1b,A1c为糖与血红蛋白牢固结合的成分可变A1c：血红蛋白可失去其上结合的糖，即再变成糖化血红蛋白之前的不稳定中间产物可变A1c需参与A1c的计算可变A1c在variant仪器，它在分析前需被溶血素移除样本用溶血素稀释后，必须至少放置15分钟在variantII/D10仪器，可变A1c运行中可被分析柱和缓冲液分离出来A1c人体内的血红蛋白的寿命平均为3个月，所以检测A1c可以评估人体内3个月之内的血糖控制情况结果分析柱内洗脱下来的每一个成分先后通过检测器血红蛋白在415nm有吸收峰检测415nm处的吸光度值检测690nm处的吸光度值作为背景吸收结果电脑接收检测器内的电压信号，以电压-时间为坐标轴绘出色谱图分离出来每一个成分在色谱图上表现为一个吸收峰，计算各个吸收峰的面积与总面积的百分比VariantIIA1cChromatogramD10A1cChromatogramVariantA1cChromatogramVariant结果计算A1c%通过反应因子(responsefactor，rf)的调整计算variant使用一个定值的calibrator(数值标示在瓶标签上)rf是校正品的测量值与标示值相除得出Variant结果计算校正后的所有A1c结果通过rf计算Variant每个运行均需要校正VariantII/D10结果计算VariantII/D10有2个水平的calibrator,计算斜率和截距校正后所以A1c结果通过斜率和截距的修正variantII/D10的分析柱一般仅需要一次校正谢谢！
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