实验三显微镜的使用、霉菌的形态及细菌三型的观察主讲人：刘涛李开一、实验目的观察霉菌的形态结构特征学习掌握霉菌水浸片制作的基本方法P74实验（一）霉菌的形态观察霉菌：凡在营养基质上形成绒毛状、棉絮状或蜘蛛网形丝状菌体的真菌，统称为霉菌。霉菌包括分类学上许多不同纲或类的真菌，它们分别属于藻状菌纲、子囊菌纲、担子菌纲和半知菌类。霉菌菌丝分为有隔菌丝和无隔菌丝两类.二、实验原理黑曲霉属于半知菌亚门,菌丝有隔,细胞多核；部分气生菌丝细胞形成特化的厚壁、膨大的足细胞，由足细胞的中间稍呈垂直地向上延长，形成分生孢子梗。青霉属于半知菌亚门,分生孢子梗基部无足细胞，孢子梗顶端不膨大成囊，而是多次分枝形成扫帚状，小梗末端形成分生孢子。根霉横向生长的菌丝产生假根，附着在基质上。菌丝无隔、无性生殖产生孢囊孢子，有性生殖产生接合孢子。三、实验材料真菌培养物1.黑曲霉、根霉、青霉的培养物。2.黑曲霉、根霉、青霉示范片。显微镜、载玻片、接种环、解剖针、酒精灯、镊子等。50％酒精、蒸馏水等。四、实验步骤：霉菌水浸片的制作和观察：1、黑曲霉、青霉的水浸片的制作取一块干净的载玻片，滴加50％的乙醇一滴→用解剖针挑取少量有孢子的霉菌菌丝（注意曲霉和青霉需要适当挑取一点培养基）浸入乙醇洗涤→于另一干净载玻片上加一滴蒸馏水，再将洗涤后的菌丝置于蒸馏水中，用解剖针将菌丝尽量分散，→盖上盖玻片，用橡皮或塑料请轻轻敲击。→镜检：10x，40x物镜观察。2、葡枝根霉水浸片的制作先用10x物镜直接观察生长在培养皿盖上的根霉菌丝，因菌丝是立体形态，观察时应将显微镜载物台上下移动，以便看清菌丝全貌。再取一载玻片，滴一滴蒸馏水，解剖针挑取少量根霉菌丝浸入水滴中，用解剖针将菌丝拨散、分开，盖上盖玻片。10x物镜观察菌丝、假根、孢子囊。黑曲霉观察黑曲霉菌丝分隔情况和分生孢子着生情况（着重辨认分生孢子梗、足细胞和分生孢子）青霉的帚状枝与分生孢子副 枝梗 基 小 梗观察青霉分生孢子着生情况（着重辨认分生孢子梗和分生孢子）葡枝根霉接合孢子囊轴囊托孢子囊梗 孢子囊囊轴观察根霉菌丝情况和子囊孢子情况（着重辨认孢子囊、包囊梗、假根）五、实验结果绘制青霉(40x)、黑曲霉(40x)、根霉(10x)的形态，注明各部分名称。六、思考
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你认为在显微镜下，细菌和霉菌的主要区别是什么？在霉菌的制片过程中，你觉得要注意哪些环节才能制得好的片子?实验(二)油镜的使用学习并掌握普通光学显微镜的构造和油镜的使用技术及维护的基本知识初步认识细菌的基本形态实验目的实验原理显微镜的构造1.光学部分:目镜、物镜、照明装置(聚光镜、虹彩光圈、反光镜等)。它使检视物放大，生成物象。2.机械部分:镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、载物台转移器、粗调节器、细调节器等部件。它起着支持调节固定等作用。图1-1-2光学显微镜的成像原理倒立的虚像油镜使用的原理油浸接物镜。当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时，由于空气与玻片的密度不同，使光线受到曲折，发生散射，降低了视野的照明度。若中间的介质是一层油（其折射率与玻片的相近），则几乎不发生折射，增加了视野的进光量，从而使物象更加清晰。浸没油与玻璃的折射率相近很多原来由于在透镜及载片
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面的反射和折射而损失的光线可以进入物镜，使照明亮度提高，改善观察效果。二、显微操作现场演示1.低倍镜观察：粗调、细调。依次再进行中倍、高倍观察2.油镜观察：高倍镜下找到清晰的物象后，在标本中央滴一滴香柏油，使油镜镜头浸入香柏油中，细调至看清物象为止。3.换片：另换新片，必须从第1条开始操作。4.用后复原：观察完毕，上悬镜筒，先用擦镜纸擦去镜头上的油，然后再用擦镜纸沾取少量二甲苯擦去残留的油，最后用擦镜纸擦去残留的二甲苯，后将镜体全部复原。注意：油镜使用完毕后一定要用二甲苯擦拭镜头用油镜观察细菌三型永久装片。1.不准擅自拆卸显微镜的任何部件，以免损坏。2.镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光洁度3.观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最后用油镜。当目视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可使用粗调节器，以免压碎玻片或损伤镜面。4.拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可单手拿，更不可倾斜拿。5.显微镜应存放在阴凉干燥处，以免镜片滋生霉菌而腐蚀镜片。显微镜保养和使用中的注意事项实验结果绘制细菌三型。思考题：P47：1、3本次实验课结束所用器皿自己洗净！请第二组同学留下值日下周再见！结束语若有不当之处，请指正，谢谢！
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