乳粉中克雷伯氏菌检测方法研究

乳粉中克雷伯氏菌检测方法研究天津出入境检验检疫局高旗利纲要克雷伯氏菌（Klebsiella）简介克雷伯氏菌检测方法研究进口乳粉中克雷伯氏菌污染情况的普查克雷伯氏菌简介Klebsiella克雷伯氏菌简介1.分类肠杆菌科克雷伯氏菌属Ørskov分类法肺炎克雷伯氏菌K.pneumoniae产酸克雷伯氏菌K.oxytoca植生克雷伯氏菌K.planticola解鸟氨酸克雷伯氏菌K.ornithinolytica土生克雷伯氏菌K.terrigena肺炎克雷伯氏菌肺炎亚种K.subsp.pneumoniae肺炎克雷伯氏菌臭鼻亚种K.subsp.azaenae肺炎克雷伯氏菌鼻硬结亚种K.subsp.rhinoscleromatis克雷伯氏菌简介2.定义符合肠杆菌科定义，具荚膜、无鞭毛的革兰氏阴性球杆菌，大小0.5~0.8µm×1~2µm，单独、成双或短链状排列。发酵阿东醇或肌醇，不产生鸟氨酸脱羧酶。克雷伯氏菌简介3.生长条件肺炎克雷伯氏菌生长温度：20℃～45℃最适温度：37℃不生长：t<15℃,t>50℃生长pH：4.5～10.5最适pH:6.5～8.5产酸克雷伯氏菌生长温度：10℃～45℃最适温度：30℃～37℃不生长：t<5℃,t>50℃生长pH：4.5～10.5最适pH:6.5～8.5克雷伯氏菌简介4.培养特性营养要求:不高，在普通肉汤、普通琼脂、血平板、麦康凯和SS培养基上均可生长。生长特征：肉汤：24h后呈混浊生长普通琼脂平板：菌落呈灰白色，凸起，边缘整齐，湿润而粘稠血平板：形成浓厚、灰白色、凸起而闪亮的菌落，不溶血麦康凯和SS琼脂：形成粉红色，表面湿润且突起的菌落在上述培养基上，相邻菌落可能发生融合现象。5.生化特性克雷伯氏菌简介克雷伯氏菌属内种的生化特征见下表肌醇+d++阿东醇++++吲哚---+甲基红-++-VP+--（+）柠檬酸盐+（-）-+丙二酸盐（+）-+（+）尿素酶（+）--（+）赖氨酸脱羧酶+d-+果胶酸酶---+ONPG++-+10℃生长---+产酸克雷伯氏菌鼻硬结克雷伯氏菌臭鼻克雷伯氏菌肺炎克雷伯氏菌生化特性+：≥90%阳性;（+）：75-89%阳性;d：种间不同菌株不定;（-）：75-89%阴性;-：≥90%阴性克雷伯氏菌简介6.致病性肺炎克雷伯氏菌鼻炎克雷伯氏菌鼻硬结克雷伯氏菌产酸克雷伯氏菌克雷伯氏菌是除大肠埃希氏菌外的医源性感染中最重要条件致病菌，易感对象为免疫力低或长期使用抗生素的人群。易引起肺炎、支气管炎和创伤感染，有时引起严重的败血症、脑膜炎、腹膜炎和肝脓肿等。易引起慢性萎缩性鼻炎，侵犯鼻咽部，使组织发生坏死。易引起鼻部慢性肉芽肿性病变。可引起脑膜炎、败血症、结肠炎和食物中毒，有的菌株产生ST和LT肠毒素。克雷伯氏菌简介7.婴儿奶粉中克雷伯氏菌污染几率和含量Harry等人采用BP胨水结合EE肉汤增菌，VRBGA平板分离的方法，对35个国家141份婴儿奶粉中肠杆菌科污染情况进行了调查，按污染几率，依次为：取样方法为：3100g、310g、31g。检测结果表明：肺炎克雷伯氏菌含量为（0.36～46.22）CFU/100g，产酸克雷伯氏菌污染程度为（0.36～1.47）CFU/100g。3530201354431团聚肠杆菌阴沟肠杆菌坂崎肠杆菌肺炎克雷伯氏菌弗劳地枸橼酸杆菌大肠埃希氏菌产酸克雷伯氏菌差异枸橼酸杆菌蜂房哈夫尼亚杆菌污染几率（份/141份）肠杆菌科克雷伯氏菌简介8.FAO/WHO日内瓦会议FAO/WHO于2004年5月2～5日在日内瓦召开了“婴儿配方奶粉中阪崎肠杆菌和其他微生物”联席会议。参会的17名专家分别来自美国、英国、荷兰等13个国家。会议 报告 软件系统测试报告下载sgs报告如何下载关于路面塌陷情况报告535n,sgs报告怎么下载竣工报告下载 （Enterobactersakazakiiandmicroorganismsinpowderedinfantformula,MeetingReport,2004）将婴儿配方奶粉中病原微生物分成3类：A类B类C类克雷伯氏菌简介流行病学和微生物学上都有令人信服的证据表明，被污染的婴儿奶粉是婴儿患病的传播媒介和传染源，这类微生物包括阪崎肠杆菌和肠炎沙门氏菌。对婴儿致病，已从奶粉中检出，但无论是流行病学还是微生物学都不能很明确地表明，被污染的婴儿奶粉是婴儿传染病的传播媒介和传染源，这类微生物包括团聚肠杆菌、伤口埃希氏菌、蜂房哈夫尼亚菌、肺炎克雷伯氏菌、产酸克雷伯菌、克氏柠檬酸杆菌、弗氏柠檬酸杆菌和阴沟肠杆菌。对婴儿致病，但没有从婴儿奶粉中检出，或者尽管已从奶粉中检出，但没有证据表明被污染的婴儿奶粉是婴儿患病的原因，这类微生物包括蜡样芽孢杆菌、艰难梭菌、产气荚膜梭菌、肉毒梭菌、金黄色葡萄球菌和单增李斯特菌。克雷伯氏菌检测方法研究常规检测方法的研究分子生物学方法的研究检测方法研究1.试验用参考菌株常规检测方法的研究共采用参考菌株33株，自备菌株为本室分离或友情实验室提供，业经鉴定。肺炎克雷伯氏菌CMCC46102鼻炎克雷伯氏菌CMCC46110肺炎克雷伯氏菌CMCC46103坂崎肠杆菌ATCC29544肺炎克雷伯氏菌CMCC46104蜂房哈夫尼亚菌CMCC45201肺炎克雷伯氏菌CMCC46105弗劳地枸橼酸菌CMCC48021肺炎克雷伯氏菌CMCC46108小肠耶尔森氏菌CMCC52201肺炎克雷伯氏菌CMCC46109阴沟肠杆菌CMCC45301肺炎克雷伯氏菌CMCC46112痢疾志贺氏菌CMCC51252肺炎克雷伯氏菌CMCC46113普通变形杆菌CMCC49027肺炎克雷伯氏菌CMCC46114奇异变形杆菌CMCC49005肺炎克雷伯氏菌CMCC46117肺炎克雷伯氏菌自备菌株K.pne5830肠炎沙门氏菌CMCC50041产酸克雷伯氏菌产酸克雷伯氏菌ATCCATCC4947349334大肠杆菌大肠杆菌O157:H7ATCC自备菌株8739PTS001产酸克雷伯氏菌ATCC700324粘质沙雷氏菌自备菌株NSL1产酸克雷伯氏菌上海CDC总69-88团聚肠杆菌自备菌株DG1菌名来源菌号菌名来源菌号肺炎克雷伯氏菌ACCC10084鼻硬结克雷伯氏菌CMCC46116产气肠杆菌CMCCc45301产酸克雷伯氏菌自备菌株K.oxy5914   常规检测方法检测方法研究2.两种预增菌培养基增菌效果的比较（1）肺炎克雷伯氏菌CMCC46103和K.pne5830做试验菌株,稀释菌液成100至103四个稀释度。（2）无菌称取100g乳粉，用900mL灭菌蒸馏水溶解后，将每个稀释度菌液取1.0mL分别加入，制成试验原样。（3）取3×100mL、3×10mL、3×1mL试验原样，分别加入到3×900mL、3×90mL、3×9mL灭菌蒸馏水及BP两种预增菌培养基中。37℃预增菌（18～22）h，转种10mL到90mLEE肉汤中37℃增菌（18～22）h，分别接种VRBGA分离平板培养（18～24）h，挑取可疑菌落鉴定。效果的比较（MPN/100g）（MPN/100g） 添菌量/100g103CFU102CFU101CFU100CFUDWBPDWBPDWBPDWBPCMCC46103脱脂奶粉>1100>110015012015233.63全脂奶粉110011001501202315<3<3配方奶粉460>11009315016163<3乳清粉110046029015015386.23.6K.pne5830脱脂奶粉>1100>11003904303943146.2全脂奶粉>1100>110035036043399.114配方奶粉>1100>110043035075757.37.3乳清粉>1100>110043035043393.67.3 秩和检验T=25P>0.05T=22P>0.05T=26.5P>0.05T=26.5P>0.05结果分析：一般认为，BP由于具有缓冲作用和一定的营养成分，利于检样中受伤菌的恢复，但试验结果表明，BP和DW对乳粉中克雷伯氏菌增菌效果相同，两者无显著性差异。这是因为克雷伯氏菌生长最适pH值为6.5～8.5，值域宽，且乳粉具有很好的营养成分可以满足菌体恢复和生长的需要。3.各种分离培养基效果的试验观察常规检测方法检测方法研究结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂（VRBGA）文献报道沙门/志贺琼脂（SS）肌醇柠檬酸盐琼脂（SCAI）麦康凯肌醇羧苄青霉素琼脂（MIC）用于克雷伯氏菌分离鉴别的培养基自行研制麦康凯阿东醇肌醇羧苄青霉素琼脂（MAIC）克雷伯氏菌在各种分离培养基上的落特征观察a:克雷伯氏菌在SCAI平板上的培养条件为37℃、48h，其余平板为37℃、（18～24）h。参考菌株（株数）VRBGASSSCAIaMICMAIC肺炎克雷伯氏菌ACCC10084紫红，凸起，3-4mm粉红，凸起，2-3mm黄，凸起，3-4mm红，深红心，凸起，2-3mm红，深红心凸起2-3mm肺炎克雷伯氏菌CMCC46102紫红，凸起，2-3mm粉红，凸起，2-3mm黄，凸起，2-3mm红，深红心，凸起，3-4mm红，深红心，凸起，3-4mm肺炎克雷伯氏菌CMCC46103紫红，凸起，2-3mm粉红，凸起，1-2mm黄，凸起，2-3mm红，深红心，凸起，2-3mm红，深红心，凸起，2-3mm肺炎克雷伯氏菌CMCC46104粉红，凸起，2-3mm红，凸起，2-3mm黄，凸起2-3mm红，深红心，凸起，2-3mm红，深红心，凸起，2-3mm肺炎克雷伯氏菌CMCC46105紫红，凸起，2-3mm生长不良黄，凸起1-2mm半透明，凸起2mm红，深红心，凸起，2mm肺炎克雷伯氏菌CMCC46108紫红，凸起，2-3mm不生长黄，凸起，3-4mm红，凸起，2-3mm红，深红心，凸起，2-3mm肺炎克雷伯氏菌CMCC46109紫红，凸起，2-3mm不生长生长不良红，凸起，2-3mm红，凸起，2-3mm肺炎克雷伯氏菌CMCC46112紫红，凸起，2-3mm粉红，凸起，2-3mm黄，凸起，3-4mm红，深红心，凸起，2-3mm红，深红心，凸起，2-3mm肺炎克雷伯氏菌CMCC46113紫红，凸起，3-4mm粉红，凸起，2-3mm黄，凸起，3-4mm红，凸起，3-4mm红，深红心，凸起，3-4mm肺炎克雷伯氏菌CMCC46114紫红，凸起，2-3mm粉红，凸起，2-3mm黄，凸起，3-4mm红，深红心，凸起，2-3mm红，深红心，凸起，2-3mm肺炎克雷伯氏菌CMCC46117紫红，凸起，2-3mm不生长黄，凸起，3-4mm红，2mm红，2-3mm肺炎克雷伯氏菌K.pne5830粉红，凸起，2-3mm粉红，凸起，2-3mm黄，凸起，2-3mm红，凸起，3-4mm红，深红心，凸起，2-3mm产酸克雷伯氏菌总69-88紫红，2mm粉红，1-2mm黄，凸起，2-3mm红，深红心，凸起2-3mm红，深红心，凸起，2-3mm产酸克雷伯氏菌ATCC49473紫红，凸起，2-3mm粉红，1-2mm黄，凸起，3-4mm红，深红心，凸起，2-3mm红，深红心，凸起，2-3mm产酸克雷伯氏菌ATCC700324紫红，凸起，2mm粉红，凸起，2-3mm黄，凸起，3-4mm红，深红心，凸起，2-3mm红，深红心，凸起，2-3mm产酸克雷伯氏菌ATCC49334紫红，凸起，2-3mm粉红，凸起，2-3mm黄，凸起，3-4mm红，深红心，凸起，2-3mm红，深红心，凸起，2-3mm产酸克雷伯氏菌K.oxy5914粉红，2-3mm粉红，2-3mm黄，凸起，2-3mm红，深红心，凸起2-3mm红，深红心，凸起，2-3mm鼻硬结克雷伯氏菌CMCC46116紫红，凸起，2-3mm粉红，1-2mm生长不良半透明，凸起，2-3mm红，深红心或无，凸起，2-3mm鼻炎克雷伯氏菌CMCC46110紫红，凸起，2-3mm粉红，凸起，2-3mm黄，凸起，2-3mm红色，凸起，2-3mm红，深红心，凸起，3-4mm阪崎肠杆菌ATCC29544粉红，粘融，凸起，3-4mm红，凸起，2-3mm蓝，1mm不生长 不生长蜂房哈夫尼亚菌CMCC45201紫红，＜1mm半通明，＜1mm蓝，2mm不生长不生长弗劳地枸橼酸菌CMCC48021紫红，1-2mm透明，黑心1-2mm蓝，1mm不生长不生长小肠耶尔森氏菌CMCC52201紫红，1-2mm透明，1mm不生长生长不良生长不良阴沟肠杆菌CMCC45301紫红，2-3mm半透明，2-3mm生长不良不生长不生长痢疾志贺氏菌CMCC51252粉红，1-2mm透明，红心，1-2mm不生长不生长不生长普通变形杆菌CMCC49027紫红，1-2mm半透明，黑心1-2mm生长不良不生长不生长奇异变形杆菌CMCC49005紫红，1-2mm透明具黑心，1-2mm生长不良不生长不生长产气肠杆菌CMCC45103粉红，2-3mm 粉红，凸起2-3mm黄，凸起2-3mm红，凸起2-3mm红，凸起，2-3mm肠炎沙门氏菌CMCC50041紫红，1-2mm透明，黑心，1-2mm不生长不生长  不生长大肠杆菌ATCC8739紫红，1-2mm粉红，1-2mm不生长不生长不生长 大肠杆菌O157:H7PTS001紫红，1-2mm红，1-2mm不生长不生长不生长粘质沙雷氏菌NSL1朱红，2-3mm朱红，1-2mm朱红，1-2mm不生长不生长团聚肠杆菌DG1紫红，1-2mm粉红，＜1mm黄，2mm红，2mm红，2mm麦康凯阿东醇羧苄青霉素琼脂（MAIC） 总结 初级经济法重点总结下载党员个人总结TXt高中句型全总结.doc高中句型全总结.doc理论力学知识点总结pdf 结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂（VRBGA）文献报道沙门/志贺琼脂（SS）肌醇柠檬酸盐琼脂（SCAI）麦康凯肌醇羧苄青霉素琼脂（MIC）用于克雷伯氏菌分离鉴别的培养基自行研制VRBGA平板选择性较差，所有肠杆菌科细菌都能生长，菌落呈紫红色或粉红色，不易判读和分离克雷伯氏菌。SS平板为肠杆菌科强选择性分离平板，对克雷伯氏菌属的部分菌株有抑制作用。Eric等人根据肺炎克雷伯氏菌和产酸克雷伯氏菌利用肌醇和柠檬酸盐的生化特性研制出了SCAI分离平板用于粪便中上述两种菌的分离，SCAI分离平板是在西蒙氏柠檬酸盐琼脂的基础上，加入了1％的肌醇。在SCAI平板上，典型菌落为黄色、突起、湿润、边缘整齐的较大菌落，但肺炎克雷伯氏菌CMCC46109和鼻硬结克雷伯氏菌CMCC46116生长不良。MIC平板是根据克雷伯氏菌耐受羧苄青霉素和发酵肌醇的原理，将麦康凯培养基中1％的乳糖换成了肌醇并加入了100mg/L的羧苄青霉素，观察试验结果，所有克雷伯氏菌菌株、产气肠杆菌CMCC45103和团聚肠杆菌DG1在该平板上生长良好。由于发酵肌醇，产酸，克雷伯氏菌形成红色菌落，但其中肺炎克雷伯氏菌CMCC46105和鼻硬结克雷伯氏菌CMCC46116形成半透明菌落，其它试验用阴性菌株被抑制，如果以是否形成红色菌落作为主要特征来筛选可疑克雷伯氏菌的话，该平板会出现漏检，产气肠杆菌和团聚肠杆菌也形成了红色菌落。MAIC是将肌醇与阿东醇结合在一起。结果表明，在该培养基上，所有试验用克雷伯氏菌均形成湿润、光滑、边缘整齐的红色菌落，直经为(2-4)mm，典型菌落突起、黏稠，相邻菌落会发生融合现象，从平板的背面观察，菌落具深红色心。但不能区分产气肠杆菌及团聚肠杆菌，对其它试验用阴性菌株有良好的抑制作用。常规检测方法检测方法研究常规检测方法检测方法研究常规检测方法检测方法研究检测方法研究常规检测方法4.各种分离培养基在乳粉普查中的应用方法：采用VRBGA、SCAI和MAIC作为分离培养基，对100份进口乳粉进行克雷伯氏菌的分离。每份样品取3×100g，分别溶于900mL灭菌蒸馏水中，37℃预增菌（18～22）h，转种10mL到90mLEE肉汤中，37℃增菌（18～22）h，四区法涂布平板。结果：分离平板可疑菌落数阳性菌落数(%)VRBGA467(15)SCAI117(64)MAIC97(71)检测方法研究常规检测方法5.肺炎克雷伯氏菌检测流程图样品100g×3，10g×3，1g×3加入9倍量的无菌蒸馏水或样品100g×3加入900mL无菌蒸馏水10ml加入90mL肠杆菌增菌肉汤（EE肉汤）MAIC动力试验荚膜染色革兰氏染色氧化酶试验API20E生化鉴定或VITEK生化鉴定报告分子生物学检测方法的研究检测方法研究1肺炎克雷伯氏菌荧光PCR检测方法引物设计：在16S-23S间区序列设计5条引物组合成5对，经试验筛选出一对引物具有较好的特异性及灵敏度。分子生物学检测方法检测方法研究CGTAGGGGAACCTGCGGTTGGATCACCTCCTTACCTTAAAGAACCTGCCTTTGCAGTGCTCACACAGATTGTCTGATGAAAAACAGCANTNAAAACCTCTACAGGCTTGTAGCTCAGGTGGTTAGAGCGCACCCCTGATAAGGGTGAGGTCGGTGGTTCAAGTCCACTCAGGCCTACCAAATTTGCGAAGCAAATTTGAAGAGGTTGCAAACGATGGGGCTATAGCTCAGCTGGGAGAGCGCCTGCTTTGCACGCAGGAGGTCTGCGGTTCGATCCCGCATAGCTCCACCATCTTTACTGCGAACACAAGAAAACTTCAGAGTGAACCTGAAAAGGTGCACTGCGAAGTTTTGCTCTTTAAAAATCTGGATCAAGCTGAAAATTGAAACGACACACAGTTAATGTGTGTTCGAGTCTCTCAAATTTTCGCAATCAGAAGTGAAACATCTTCGGGTTGTGAGGTTAAGCGACTAAGCGTACACGGTGGATGCCCTGGCAGTCAGAGGCGATGAAGGACGTGCTAATCTGCGAAAAGCGTCGGTNAGGTGATATGAACCGTTANANCCGGCGATGTCCNAATGGGGAAACCCAGTGCNATTCGTTNCACTATTCGTAACTGGATACATAGGTTAACGAGGCGAACCGGGGGAACTGAAACATCTAAGTACCCCGAGGAAAAGAAAANAANCGGG肺炎克雷伯氏菌荧光PCR特异性试验10株肺炎克雷伯氏菌的 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 株及野生株均出现特定的扩增曲线，该菌特异性融解曲线的Tm值在85.6℃－86.2℃。分子生物学检测方法检测方法研究肺炎克雷伯氏菌灵敏度试验添菌量为1.6CFU/100g及16CFU/100g的4个样品经增菌后检测全部为阳性，说明该方法检测低限可以达到100CFU/100g。分子生物学检测方法检测方法研究2.产酸克雷伯氏菌荧光PCR检测方法引物设计：由于产酸克雷伯氏菌具有多聚半乳糖醛酸酶，所以菌落在多聚半乳糖醛酸盐半固体琼脂平板上形成程度不同的凹陷（见图）＋＋K.oxy5914产酸克雷伯氏菌＋＋ATCC700324产酸克雷伯氏菌＋＋ATCC49473产酸克雷伯氏菌＋＋ATCC49334产酸克雷伯氏菌＋＋上海CDC69-88产酸克雷伯氏菌PehX多聚半乳糖醛酸酶菌号菌名ttcacggccaccaacctgcagccggatacggagtatgcctttacggtgcgcgcggtctacgccaatggccaggaatctccggacagcgcggtggttaaagcgcaaacccgcaaaacgccgcacgtcatcgaagccagcacattcggcgcgaagggtgacggcaccacgctgaatacccaggcgctgcagcgggccattgatagctgtaccgtcacgcactatcctcagggctgcaaggtgctgatttccggcggcgaattcaaaactggcgcgttgttcctgcacagcgatatgaccctggatattgcggctggcgccaccctgctgggttcggacgatccggcccagtatccgcttgataaaggctattacctctatccctatagcgatcatccgcagcctcgccgcccgccatcatta根据该多聚半乳糖醛酸酶基因设计出一对特异性强、灵敏度高的引物。分子生物学检测方法检测方法研究产酸克雷伯氏菌灵敏度试验从图中可以看出，阳性对照的Ct值为18；添菌量为25CFU/100g的A、B样品，其Ct值在21附近；添菌量为2.5CFU/100g的A、B样品，其Ct值在27附近。灵敏度试验结果表明建立的荧光PCR方法的检测低限可达到100CFU/100g。该菌特异性融解曲线Tm值在88.6℃－89.2℃之间。产酸克雷伯氏菌特异性试验五株阳性菌Ct值在23左右11株阴性菌均无交叉反应分子生物学检测方法检测方法研究ATCC49334ATCC49473ATCC700324K.oxy5914上海CDC69-88肺炎克雷伯氏菌CMCC46102、鼻硬结克雷伯氏菌CMCC46116、臭鼻克雷伯氏菌CMCC46110、蜂房哈夫尼亚氏菌CMCC45201、弗劳地枸橼酸杆菌CMCC48021、阴沟肠杆菌CMCC45301、普通变形杆菌CMCC49027、痢疾志贺氏菌CMCC51252、坂崎肠杆菌ATCC29544、大肠杆菌ATCC8739、团聚肠杆菌DG1。样品100g×3加入9倍量的无菌LST中DNA提取荧光PCR检测MAIC动力试验荚膜染色革兰氏染色氧化酶试验API20E生化鉴定或VITEK生化鉴定报告进口乳粉中克雷伯氏菌污染情况的普查采用本文建立的传统方法对在天津口岸进境的100份乳粉进行了克雷伯氏菌检测，这些奶粉分别来自新西兰、法国、澳大利亚、芬兰、比利时、美国、丹麦、瑞士和德国，5份乳粉检出了该菌，具体情况见表。污染情况普查肺炎克雷伯氏菌25芬兰脱脂奶粉1-77832肺炎克雷伯氏菌5600法国乳清粉1-67145肺炎克雷伯氏菌240法国乳清粉1-68397肺炎克雷伯氏菌270荷兰全脂奶粉1-76275产酸克雷伯氏菌75法国乳清粉1-64400菌名细菌总数cfu/g国别品名报验号污染情况普查食品中过敏原成分荧光PCR检测天津出入境检验检疫局张霞纲要过敏原情况简介我实验室过敏原研究情况介绍过敏原花生成分荧光PCR检测方法过敏原情况简介过敏原情况简介1.过敏原已被认为是严重的公共卫生问题食物过敏是人们对食物产生的一种不良反应，属于机体对外源性物质的一种变态反应。近二十年来，被逐渐重视。根据美国FDA资料统计，在美国和欧洲，2%的成年人和5%的婴幼儿患有食物过敏症，美国每年大约30000人需要临床紧急治疗，2000人住院，150人死于食物引起的过敏反应。临床资料和调查显示，食物过敏症近年成上升趋势，甚至是成倍增长。WHO预测可能成为最常见的流行病之一。过敏原情况简介2.国外对食品中过敏原成分标注的相关规定美国2004年8月通过了“食品过敏标签和消费者保护”法案，这一法案要求自2006年1月，所有可能含有过敏物源的食品成份必须标注在食品标签上。欧共体2000/13/EC指令也要求自2003年底起在成分标签中标注相关的过敏成分。日本的标签标注要求将花生、蛋和奶等列为必须标注的成分，大豆、树坚果及麸质等列为推荐标注的成分。过敏原情况简介3.食品中主要过敏原成分FDA发布《食品过敏原标识和消费者保护法案—2004》（FALCPA），规定主要食物过敏原是指含有乳、蛋、小麦、花生、大豆、鱼、甲壳类水生动物、树坚果等八种食物的成分，或是含有上述八种食物衍生的蛋白质。在所有的过敏反应中，花生和树坚果过敏占10％－47％，过敏死亡率的50％由花生引起。在美国，花生是八种主要过敏原中最受关注的一种。过敏原情况简介4.国内外学者针对过敏原成分检测方法的研究以检测蛋白为基础的免疫化学检测方法，如最常见的ELISA（enzyme-linkedimmunosorbentassay）；以检测DNA为基础的方法有聚合酶链反应（PCR）和实时（real-time）PCR方法，以识别特定的DNA片段得到高精确度的检测结果；将免疫学和核酸技术相结合的检测方法PCR－ELISA法；蛋白质双向电泳技术结合质谱分析确定过敏原成分。过敏原情况简介5.各种检测方法的优劣比较：ELISA法优点灵敏度高，操作简单，便于普及。美国、欧盟、加拿大和日本均推荐使用进行初筛。缺点检测致敏的特异性蛋白，不同的试剂盒选择的特异性蛋白不同，检测结果也会有所不同蛋白质不稳定，容易造成漏检。过敏原情况简介5.各种检测方法的优劣比较：PCR法优点针对过敏成分的DNA检测，更能同法案要求相适应。DNA较蛋白质稳定，结果较ELISA法更准确。避免大量抗体需求。欧盟、日本和AOAC建议使用进行确证缺点灵敏度低于ELISA法操作难于ELISA法对仪器有一定要求天津局过敏原检测研究情况简介花生、大豆及榛果荧光PCR检测方法已经建立，同时进行ELISA比对试验。已发表相关文章两篇，待发表文章一篇。建立食品中过敏原花生成分检测方法行业标准。过敏原花生成分荧光PCR检测方法荧光PCR检测方法1.目的基因的选取目前国内外对花生过敏原主要集中在Arah1,Arah2,NGLB1,CHI四段基因序列的研究上。其中对Arah2的检测灵敏度最高。NONO1:1000000NO36.001:10000035.6735.071:1000033.1130.891:100029.5427.361:10026.0423.731:1024.8620.11DNACHICt值Arah2Ct值DNA稀释浓度荧光PCR检测方法2.引物及探针的设计遵循一般规则为提高检测灵敏度，引物设计也要求特异性。荧光PCR检测方法3.特异性试验检测物质：花生、大豆、榛果、麦粉、粟米粉、杏仁。荧光PCR检测方法4.灵敏度试验花生DNA提取、测DNA浓度及含量，作10倍梯度稀释，做实时荧光PCR检测，以建立标准曲线。花生添加灵敏度试验。添加基质为麦粉或粟米粉：检测低限20mg/kg。添加基质为巧克力:检测低限10mg/kg。取浓度为634μg/mL花生DNA10倍稀释，使得在反应体系中DNA量为6.3×10-1μg～6.3×10-5μg，DNA量为6.3×10-5μg时，检测不到荧光值，将6.3×10-4μg稀释至3.0×10-4μg可检测到。说明检测灵敏度可达到10-4μg。Ct值39.63.0×10-4μgCt值35.36.3×10-4μgCt值32.16.3×10-3μgCt值29.46.3×10-2μgCt值24.26.3×10-1μg荧光PCR检测结果反应体系DNA含量荧光PCR检测方法5.样品普查对抽样市售的31份进口食品（标签中没有标识含有花生成分）进行ELISA及荧光PCR检测，同时检出3份食品中含有花生成分。