食品微生物检验：志贺氏菌、弧菌

志贺氏菌检验志贺氏菌属(Shigella)的细菌通称为痢疾杆菌，是细菌性痢疾的病原菌。临床上能引起痢疾症状的病原微生物很多，如志贺氏菌属、沙门氏菌属、变形杆菌属、艾希氏菌属等，还有阿米巴原虫、鞭毛虫及病毒等均可引起人类痢疾，其中以志贺氏菌引起的细菌性痢疾最为常见。人类对志贺氏菌的易感性较高，所以在食物和饮用水的卫生检验时，常以是否含有志贺氏菌作为指标。志贺氏菌属是由四个亚群组成，即A、B、C、D四个亚群。A群:痢疾志贺氏菌，有10个抗原组成各不相同的血清型，其中包括最知名的志贺氏杆菌(1型痢疾志贺氏菌)和舒密次杆菌(2型痢疾志贺氏菌)。B群:福氏志贺氏菌，有6个血清型，其中的1～5又可分为两个亚型，还有x、y两个变种，这些型、亚型和变种之间通过大量的共同抗原联系在一起。C群:鲍氏志贺氏菌，有15个血清型，其中有的血清型有甘露醇阴性的变种。D群:宋内氏志贺氏菌，只有一个种(血清型)，它具有I相(光滑型)和Ⅱ相(粗糙型)的变异。(一)形态与染色志贺氏菌属的形态，与肠杆菌科细菌的形态相似。为革兰氏阴性短杆菌，两侧平行、末端钝圆，长约2µm～3µm，宽约0.5µm～0.7µm。无荚膜、无鞭毛、不形成芽胞，无动力，是与沙门氏菌不同之处。福氏志贺氏菌的1a、2a、2b、3、4a、5、x、y血清型有I型菌毛，容易附着在肠粘膜上皮细胞上。本菌为兼性厌氧菌，但厌氧培养时，生长较不旺盛。营养要求不高，在普通培养基上易于生长。最适温度为37℃左右，但在10℃～40℃范围内亦可生长，最适pH约为7.2。在固体培养基上经培养18h～24h后，菌落圆形、透明、隆起并微凸、直径约2mm～3mm、 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 面光滑、湿润、边缘整齐。在普通琼脂培养基上无色。志贺氏菌菌落形态志贺氏菌在SS和Mac上形成较小的，无色半透明不发酵乳糖的菌落在HE上形成不发酵乳糖的深绿色菌落HE上不发酵乳糖的肠道菌，可能就是志贺氏菌SS（Salmonella-ShigellaMediun）上无黑色中心很可能是志贺氏菌了Mac（麦康凯培养基）选择性培养基上可呈现不同的颜色，例如，宋内氏志贺氏菌在SS琼脂平板上生长出边缘较整齐，因能迟缓发酵乳糖而呈玫瑰红色的菌落，应注意勿当大肠杆菌处理。(三)生化特性志贺氏菌属的细菌发酵糖类和醇类的能力远比艾希氏菌属弱，但都能发酵葡萄糖，对侧金盏花醇、肌醇和水杨苷均不发酵，对其他糖类多为少数发酵：如宋内氏志贺氏菌对乳糖能迟缓发酵，鲍氏志贺氏菌9型的一些培养物能发酵，痢疾志贺氏菌I型少数培养物能迟缓发酵。(四)抗原结构志贺氏杆菌有O抗原和K抗原。1、O抗原脂多糖，耐热，稳定。不同的志贺氏菌O抗原不同。每群志贺氏菌中不同的O抗原用罗马数字表示Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ····同一群志贺氏菌中不同菌型所带的O抗原也不同。2、K抗原K抗原包绕于某些新分离的痢疾杆菌表面，不耐热，加热100℃1h即被破坏。此抗原可以阻止菌体抗原与相应免疫血清发生凝集。(五)抵抗力志贺氏菌属的细菌与沙门氏菌属及其他肠道杆菌相比，对理化因素抵抗力较低。对酸较敏感，必须使用含有缓冲剂的培养基。在外界环境中的生存力，宋内氏志贺氏菌最强、福氏志贺氏菌次之，而痢疾志贺氏菌最弱。一般潮湿的土壤中能生存34d，37℃的水中存活20d，而在冰块中可存活3个月，粪便中的细菌在室温情况下(20℃左右)可存活11d。含有高浓度胆汁的培养基能抑制某些志贺氏菌株的生长。日光直射30min可杀死，56℃～60℃只需19min可杀死，1％石炭酸中15min～30min可杀死。对磺胺、链霉素和氯霉素敏感但很容易产生耐药性。(六)变异性1．S—R型变异菌落由光滑型变为粗糙型时，常伴有生化反应，抗原结构和致病性的变异。在机体内，尤其是慢性患者和恢复期患者，痢疾志贺氏菌可发生变异而失去原来的生化和抗原特性，成为不典型菌株。其中部分不典型菌株，可通过10％胆汁肉汤等又转变为典型菌株。2、耐药性变异自从广泛使用抗菌素以来，志贺氏菌属的耐药菌株不断增加，给防治工作带来许多因难。国内部分地区 报告 软件系统测试报告下载sgs报告如何下载关于路面塌陷情况报告535n,sgs报告怎么下载竣工报告下载 ，志贺氏菌对四环素的耐药率达74％、氯霉素73.6％～97％、链霉素84％～98％、金霉素75％～100％、磺胺类97％～100％，可见对国内常用几种抗菌素的耐药率相当高。(七)致病性志贺氏菌的致病作用，主要是侵袭力和菌体内毒素，个别菌株能产生外毒素，常使人得痢疾及食物中毒。1、侵袭力志贺氏菌进入大肠后，由于菌毛的作用，粘附在大肠和回肠末端肠粘膜的上皮细胞上，继而在上皮层繁殖，扩散至邻近细胞及上皮下层。由于毒素的作用，上皮细胞死亡，粘膜下发炎，并有毛细血管血栓形成，以致坏死、脱落、形成溃疡，志贺氏菌一般不侵犯其他组织，偶尔可引起败血症。目前认为不论是产生外毒素的还是只产生内毒素的志贺氏菌，必须侵入肠壁才能致病，非侵袭性痢疾杆菌突变菌株不能引起疾病。因此，对粘膜组织的侵袭力是决定致病力的主要因素。2、内毒素志贺氏菌属中各菌株都有强烈的内毒素。作用于肠壁，使通透性增高，从而促进毒素的吸收，引起一系列毒血症症状，如发热、神志障碍、甚至中毒性休克。毒素破坏粘膜形成炎症、溃疡，呈现典型的痢疾脓血粘液便。毒素作用于肠壁植物神经，使肠功能紊乱，肠蠕动共济失调和痉挛，尤其直肠括约肌最明显，因而发生腹痛、里急、后重等症状。3．肠毒素痢疾志贺氏菌I型和II型能产生肠毒素，肠毒素的活性主要在小肠发生，而菌痢的病变主要在大肠。痢疾志贺氏菌I型突变菌株不产肠毒素但仍有侵袭力。(八)志贺氏菌的食物中毒1、流行病学志贺氏菌食物中毒常称作志贺氏菌痢疾，传染是从人到人，无动物宿主。传染源是病人和带菌者，主要通过消化道传播。人类对志贺氏菌的易感性极高，大约10个～200个细菌即可使10％～50％受攻击的人致病。病后有一定的免疫力，但是免疫期短，也不稳固。可能因细菌菌型多，各型细菌之间无交叉免疫性之故。2、临床症状志贺氏菌食物中毒引起的细菌性痢疾可分为急性和慢性两大类、6个不同的型。（1）急性细菌性痢疾急性细菌性痢疾又分为急性典型、急性非典型和急性中毒性菌痢三型。急性典型痢疾症状典型，有腹痛、腹泻、脓血粘液便、里急、后重、发热等，经治疗预后良好。如治疗不彻底可转为慢性。急性非典型痢疾症状不典型，易诊断错误，延误治疗，常导致带菌或慢性。急性中毒性菌痢常见于小儿，各菌型都可发生，常常无明显的消化道症状，而是以全身中毒性症状为主。中毒性菌痢一系列的病理生理变化，主要是内毒素造成机体微循环障碍的结果，导致内脏淤血、周围循环衰竭，主要功能器官灌注不足，引起心力衰竭、腹水肿、急性肾功能衰竭，严重微循环障碍，再加上内毒素损伤血管内上皮细胞、激活凝血因子等，而发生弥散性血管内凝血。（2）慢性细菌性痢疾慢性菌痢又分为迁延型、慢性隐伏型和急性发作型。常因急性期治疗不彻底或人体防御机能低下、营养不良或合并其他慢性病，例如低酸性或无酸性胃炎、胆囊炎、肠道寄生虫病等等，一般认为福氏志贺氏菌感染的慢性者较多。细菌性痢疾的带菌者有三种类型，即恢复期带菌者、慢性带菌者和健康带菌者。健康带菌者是指临床上无肠道症状而又能排出志贺氏菌者。这种带菌者是主要的传染源，特别是在饮食上，炊事员和保育员中的带菌者危险性更大。(九)防治措施志贺氏菌随粪便排出体外，通过食物、水和手经口传染给健康人。但只要我们切实地把好“病从口入”这一关，志贺氏菌痢是可以预防的。1．加强饮水卫生要保护水源，便桶不下河洗涤，新粪不下田，菌痢病人的衣裤、病儿的尿裤不下河洗涤。搞好饮水消毒，严格做到不喝生水。2．注意饮食卫生严格执行《食品卫生法》的各项规定。饭莱现烧现吃，隔顿隔夜的菜肴要回锅。集体食堂和饮食店还要做到饭莱烧熟烧透，生熟分开，严格消毒食具。要自觉做到四不吃，即不吃生冷蔬菜、不吃不洁瓜果、不吃腐败变质食物、不吃未经回锅煮透的剩菜剩饭。3．自觉养成卫生习惯工作后、学习后、外出回家后要洗手，特别是食前、便后要洗手，勤剪指甲。4．早期发现病人早期隔离治疗如发现有大便性状改变，次数频多等情况应及时就诊。特别是托儿所、幼儿园要加强入托前的检查，午间检查和全日观察，发现可疑病儿要立即送医院诊治，确诊后严格隔离，还应及时进行消毒处理。急性病例应一直到症状消失，大便培养二次阴性为止。（十）检验原理：1、增菌志贺氏菌国标用GN增菌液。目前志贺氏菌增菌液都不理想，关键是抑菌效果差，GN相对来说是较好的，但也存在着同样的问题，因此用其增菌时间不宜过长，一般为6～8h，时间过长，其他杂菌就会大量繁殖。2、选择性鉴别培养基分离志贺氏菌志贺氏菌常用的选择性琼脂平板HE、SS、麦康凯（MC）、伊红美蓝，这些平板中都含有乳糖。由于志贺氏菌不发酵乳糖或迟缓发酵乳糖(24h内不发酵乳糖，24h后才发酵乳糖)，硫化氢阴性，所以在这些平板上呈现出无色半透明不发酵乳糖的菌落。HE、SS相对于志贺氏菌来说选择性较强，麦康凯、伊红美蓝相对于志贺氏菌来说选择性较弱，同时用两种平板分离志贺氏菌，可互补提高检出率，防止漏检。3、初步生化试验、血清学分型和进一步生化试验首先用三糖铁培养基（TSI）做初步生化试验，用半固体培养基做动力试验。志贺氏菌在三糖铁培养基上的反应为：斜面产碱(红色)，底层产酸(黄色)，不产气(福氏志贺氏菌6型可微量产气)，硫化氢试验为阴性，无动力(不能运动）福氏志贺氏菌各型和亚型的型抗原和群抗原挑取三糖铁琼脂上的培养物，做玻片凝集试验。煮沸菌液可消除K抗原对O抗原凝集的阻碍。四种多价血清不凝集者用鲍氏（C群）多价1，2，3分别检查，并用1~15各型因子检查。若鲍氏多价不凝集则用痢疾志贺氏菌3-12型多价血清及各型因子血清检查。 型和亚型 型抗原 群抗原 1a Ⅰ 1、2、4、5、9…… 1b Ⅰ 1、2、4、5、6、9…… 2a Ⅱ 1、3、4…… 2b Ⅱ 1、7、8、9…… 3a Ⅲ 1、6、7、8、9…… 3b Ⅲ 1、4、6、（7、8、9）…… 3c Ⅲ 1、6…… 4a Ⅳ 1、（3）… 4b Ⅳ 1、6…… 5a Ⅴ 1、4…… 5b Ⅴ 1、5、7、9…… 6 Ⅵ 1、2、（4）…… x - 1、7、8、9…… y - 1、3、4……（十一）检验程序GB4789.5-2012志贺氏菌检验 流程 快递问题件怎么处理流程河南自建厂房流程下载关于规范招聘需求审批流程制作流程表下载邮件下载流程设计 志贺氏菌属生化特性试验挑取平板上的可疑菌落，接种三糖铁琼脂和半固体琼脂各一管。志贺氏菌在三糖铁琼脂内的反应结果为底层产酸而不产气(福氏志贺氏菌6型可微产气)，斜面产碱，不产生硫化氢，无动力，在半固体管内沿穿剌线生长。然后再做V-P/苯丙氨酸脱氨酶、赖氨酸脱羧酶、西蒙氏柠檬酸盐和葡萄糖铵试验，结果均应阴性反应。葡萄糖半固体（无动力）血清学分型进一步的生理生化鉴定（十二）检验注意事项1、检验报告凡是与志贺氏菌多价血清之一发生凝集反应的革兰氏阴性杆菌，生化反应符合志贺氏菌特性，即报告“发现志贺氏菌” 不与任何一种志贺氏菌多价血清发生凝集反应者，判定为非志贺氏菌，即报告“未发现志贺氏菌”。 生化反应判定为志贺氏菌，而血清学实验未能确定的，报告为“发现可疑志贺氏菌，待定”，并送有条件的实验室做进一步鉴定。2、志贺氏菌在常温下存活期较短，因此，采样后应尽快进行检验。如果在24小时内检验，样品可保存在冰箱内；如果要保存时间比较长，必须放在低温冰箱里。3、增加鉴别培养基的数目，可以增加志贺氏菌阳性检出率。用于分离的鉴别培养基一般不少于两个。第五节其他致病菌的检验一、副溶血性弧菌的检验 副溶血性弧菌系分布在海洋及盐湖极为广泛的一种致病性嗜盐菌。 引起人的食物中毒是近20年才被发现和重视的，尤其在夏秋季节的沿海地区，经常由于食用含有大量副溶血性弧菌的海产品而引起爆发性食物中毒；在非沿海地区，食用被此菌污染的盐渍食品亦常有中毒发生。 一般冬季不易检出此菌。二、生物学特性（一）形态与染色 革兰氏阴性无芽胞多形态杆菌，单端鞭毛、两端浓染。杆状、棒状、甚至球状、丝状等. SS琼脂上：菌体呈卵圆形，两端浓染，中间淡或不着色，少数成杆状。 血琼脂上：菌体多为卵圆形，少数为球杆状，也有成丝状。 嗜盐琼脂上：主要为两头小、中间稍胖的球杆菌。 罗氏双糖培养基上：24h培养后菌体基本形似，48h后菌体形态变化很大，有球状、丝状、杆状、弧状、逗点状等，其大小形态的差异也很大。 副溶血弧菌的多形性与球状体是它与气单胞菌属在形态学上的主要鉴别特征。（二）培养特性：1、需氧或兼性厌氧：生长最好2、在2-3%NaCL培养基中生长最好，无盐或食盐>10%不能生长。3、最适温度36℃，PH7.5-7.8（7.7）4、在专用选择性平板上，菌落呈圆形凸起，混浊不透明，表面光滑，较湿润，边缘不整齐。5、血平板：可见溶血环。副溶血性弧菌生长特性在TCBS平板上分解蔗糖产酸的菌落为黄色。副溶血性弧菌等不分解蔗糖为蓝绿色菌落。TSI-NaCl副溶血弧菌分解葡萄糖产酸，所以底部为黄色，不产硫化氢，而分解蛋白胨产生的碱使斜面变红。（四）抗原结构 已明确本菌有三种抗原成分，即O抗原、K抗原及H抗原。 本菌的O抗原有耐热性，100℃2h仍保持抗原性； K抗原存在于菌体表面，不耐热，能阻止菌体与O抗血清凝集； H抗原不耐热，100℃30min即破坏，特异性低，无助于分类，副溶血性弧菌所有的菌株具有共同的H抗原。 目前，至少有13个O抗原，65个K抗原。根据O、K抗原可以进行血清学分型。肠道致病性血清有O1:K38、O1:K56、O2:K1.....等。（六）致病性 此菌能引起人的急性胃肠炎，摄入致病菌达106个即可发病，潜伏期1h-26h不等，主要症状为腹痛、腹泻、恶心、呕吐、发热等，粪便多呈水样，常混有粘液或脓血，一般病程1d-7d。呕吐、腹泻严重，失水过多者可引起虚脱并伴有血压下降。 大部分病人发病后2-3天恢复正常，少数严重病人由于休克、昏迷而死亡。病后一周血清抗体效价可达1:80，二周后下降到1:10。(七)检验原理1、增菌 根据副溶血性弧菌具有嗜盐特性利用氯化钠结晶紫增菌液（氯化钠浓度为4%）进行增菌。2、分离培养 根据副溶血性弧菌嗜盐的特点，利用氯化钠琼脂和嗜盐菌选择平板进行选择培养。3、选择性培养 3.5%氯化钠三糖铁斜面37℃培养24小时。 可疑菌株的现象是：三糖铁培养基底层变黄，葡萄糖产酸不产气，斜面不变色，乳糖、蔗糖不分解，有动力，不产生硫化氢。4、涂片镜检 可疑菌株进行涂片革兰氏镜检形态。 副溶血性弧菌为不产芽孢的革兰氏阴性多形态杆菌。（八）检验程序GB4789.7-20133.培养基和试剂4.检验程序5.操作步骤