临床乙肝两对半检验方案设计

临床乙肝两对半检验方案设计病例导入缪某某,女，32岁，因停经8+月，阴道流水伴不规则腹痛1+小时，以“胎膜早破”入院，既往史:有“乙肝”病史(具体不详)，未治疗。现为完善孕妇分娩前相关检查，开出检验申请单，申请乙肝两对半检查。1.检验方案1.1乙型肝炎病毒 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 面抗原（HBsAg）检测1.1.1实验原理本实验检测方法为双抗体夹心法,将适量的样本血清、抗HBsAg单克隆抗体、生物素化的抗HBsAg单克隆抗体和用钌复合物标记好的抗HBsAg多克隆抗体混合进行孵育，上述物质孵育完成后将会形成“三明治”样的抗原-抗体复合物。用缓冲液冲洗后加入链霉亲合素包被的微粒，再次进行孵育，链霉亲合素和生物素相互作用结合后至固相。将上述反应液通过电磁场，在电磁作用下，磁珠微粒将吸附在电极表面，而未与磁珠微粒结合的物质将被缓冲液除去。然后给电极加一定的电压，使复合物产生化学发光反应，使用光电倍增管检测发光强度。仪器通过Elecsys软件自动测出样本的信号值,与预先定标获得的Cutoff值进行比较得到检验结果。1.1.2实验器料罗氏cobas8000e602型全自动电化学发光免疫分析仪（如图1所示）、配套吸头和反应杯、高速离心机、乙型肝炎病毒表面抗原测定试剂盒（罗氏产品）、配套的系统缓冲液（ProCell/ProCellM）、测量池洗液和附加洗液。1.1.3标本采集静脉穿刺前准备好一次性采血针、灭菌干脱脂棉签、垫枕、75%乙醇、消毒的压脉带和惰性分离胶促凝管，在试管上贴好条码并核对检验单。因乙肝检查属于血清学免疫检测，不用受进食的影响，所以可以空腹抽血，也可以餐后抽血检测。采血前患者最好静息10～15分钟。压脉带使用时间尽可能缩短，选择肘前静脉进行采血，采血部位需用乙醇消毒，消毒直径需大于5厘米。采血针针头与患者皮肤呈30°刺入皮下静脉并顺势探入10～15mm，见回血需迅速解开止血带，并告诉患者松拳。采取5ml血液后，用棉签轻压伤口上方快速拔针，继续按压伤口约3min。迅速轻轻的颠倒混匀试管，不要振荡试管，再次核对检验单信息，及时送检。1.1.4检验步骤1.1.4.1将标本签收并将患者身份信息录入科室系统。标本室温静置15分钟，将含有全血的标本采集管放入离心机中以4000r/min离心5分钟，得到可直接上机使用的血清。1.1.4.2将冷藏的试剂在室温中平衡至20℃左右再放置到分析仪的试剂盘内，试剂使用前分析仪将会自动搅拌磁珠微粒使其处于悬浮状态。1.1.4.3将仪器开机：按顺序依次打开仪器增压泵、水箱和供水系统电源开关。开启DM，再接通仪器前端绿色操作按钮后登录用户名和密码，将仪器初始化后会进入自动保养，等待仪器进入Standby状态。1.1.4.4将待测标本录入LIs系统并编号，按进样顺序将待测标本按序号依次放入操作架中，核对编号无误并将操作架放入进样口，在操作系统页面点击start进行标本检测。1.1.4.5仪器自动运行下列程序：仪器吸取50uL的样本血清，然后加入一份抗HBsAg单克隆抗体、两份已生物素化的抗HBsAg单克隆抗体和一份用钌复合物标记好的抗HBsAg多克隆抗体混合进行孵育，上述混合物孵育完成后将会形成“三明治”样的抗原-抗体复合物。接着加入链霉亲合素包被的微粒，再次进行孵育，链霉亲合素和生物素相互作用结合后至固相。将上述反应液通过电磁场，在电磁作用下，磁珠微粒将吸附在电极表面，而未与磁珠微粒结合的物质将被缓冲液除去。然后给电极加一定的电压，使复合物产生化学发光反应，使用光电倍增管检测发光强度。仪器通过Elecsys软件自动测出样本的信号值,与预先定标获得的Cutoff值进行比较得到检验结果。1.1.4.6结果查询：大约20min。1.1.5检测结果（如图2所示）及判断1.1.5.1参考范围：0～1COI1.1.5.2样本检测结果：1303.000COI，结果判断为阳性。1.2乙型肝炎病毒表面抗体（HBsAb）和乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）检测1.2.1实验原理本实验检测方法为夹心法，将适量的样本血清、生物素化的抗原或抗体和用钌复合物标记好的抗原或抗体混合进行孵育，上述物质孵育完成后将会形成抗原抗体夹心复合物。用缓冲液冲洗后加入链霉亲合素包被的微粒，再次进行孵育，链霉亲合素和生物素相互作用结合后至固相。将上述反应液通过电磁场，在电磁作用下，磁珠微粒将吸附在电极表面，而未与磁珠微粒结合的物质将被缓冲液除去。然后给电极加一定的电压，使复合物产生化学发光反应，使用光电倍增管检测发光强度。仪器通过Elecsys软件自动测出样本的信号值,与预先定标获得的Cutoff值进行比较得到检验结果。1.2.2实验材料实验器材和试剂：罗氏cobas8000e602型全自动电化学发光免疫分析仪、配套吸头和反应杯、高速离心机、棉签、乙型肝炎病毒表面抗体检测试剂盒（罗氏产品）、乙型肝炎病毒e抗原检测试剂盒（罗氏产品）、配套的系统缓冲液（ProCell/ProCellM）、测量池洗液和附加洗液。1.2.3标本采集静脉穿刺前准备好一次性采血针、灭菌干脱脂棉签、垫枕、75%乙醇、消毒的压脉带和惰性分离胶促凝管，在试管上贴好条码并核对检验单。因乙肝检查属于血清学免疫检测，不用受进食的影响，所以可以空腹抽血，也可以餐后抽血检测。采血前患者最好静息10～15分钟。压脉带使用时间尽可能缩短，选择轻拍或按压时会回弹的静脉进行采血，采血部位需用乙醇消毒，消毒直径需大于5厘米。采血针针头30°刺入静脉顺势探入10～15mm见回血需迅速解开止血带，并告诉患者松拳。采取5ml血液后，用棉签轻压伤口上方快速拔针，继续按压伤口约3min。迅速轻轻的颠倒混匀试管，不要振荡试管，再次核对检验单信息，及时送检。1.2.4检验步骤1.2.4.1将标本签收并将患者身份信息录入LIS系统。标本室温静置15分钟，将含有全血的标本采集管放入离心机中以4000r/min离心5分钟，得到带有少许纤维蛋白丝的澄清血清。用棉签尾端木棍伸入采集管内轻轻挑取纤维蛋白丝，得到可直接上机使用的血清。1.2.4.2将冷藏的试剂在室温中平衡至20℃左右后放置到分析仪的试剂盘内，试剂使用前分析仪将会自动搅拌磁珠微粒使其处于悬浮状态。1.2.4.3将仪器开机：按顺序依次打开仪器增压泵、水箱和供水系统电源开关。开启DM，再接通仪器前端绿色操作按钮后登录用户名和密码，将仪器初始化后会进入自动保养，等待仪器进入Standby状态。1.2.4.4将待测标本录入LIs系统并编号，按进样顺序将待测标本按序号依次放入操作架中，核对编号无误并将操作架放入进样口，在操作系统页面点击start进行标本检测。1.2.4.5仪器自动运行下列程序：①HbsAb的检测：仪器吸取40ul的样本，样本中的HbsAb、已生物素化的HBsAg和用钌复合物标记好的HBsAg混合进行孵育，上述混合物孵育完成后将会形成抗原抗体夹心复合物。接着加入链霉亲合素包被的微粒，再次进行孵育，链霉亲合素和生物素相互作用结合后至固相。将上述反应液通过电磁场，在电磁作用下，磁珠微粒将吸附在电极表面，而未与磁珠微粒结合的物质将被缓冲液除去。然后给电极加一定的电压，使复合物产生化学发光反应，使用光电倍增管检测发光强度。仪器通过Elecsys软件自动测出样本的信号值,与预先定标获得的Cutoff值进行比较得到检验结果。②HbeAg的检测：仪器吸取35ul的样本，样本中的HbeAg、已生物素化特异性抗HBeAg单克隆抗体和用钌复合物标记好的特异性抗HBeAg单克隆抗体混合进行孵育，上述混合物孵育完成后将会形成抗原抗体夹心复合物。接着加入链霉亲合素包被的微粒，再次进行孵育，链霉亲合素和生物素相互作用结合后至固相。将上述反应液通过电磁场，在电磁作用下，磁珠微粒将吸附在电极表面，而未与磁珠微粒结合的物质将被缓冲液除去。然后给电极加一定的电压，使复合物产生化学发光反应，使用光电倍增管检测发光强度。仪器通过Elecsys软件自动测出样本的信号值,与预先定标获得的Cutoff值进行比较得到检验结果。1.2.4.6结果查询大概40min。1.2.5检测结果（如图2所示）及判断检测项目检测结果单位参考范围结果判断HBsAb＜2.00IU/L0～10阴性HBeAg1637.000COI0～1阳性1.3乙型肝炎病毒e抗体（HBeAb）和乙型肝炎病毒核心抗体（HBcAb）检测1.3.1实验原理本实验检测方法为竞争法。把适量的样本血清和相应的抗原进行孵育，二者将结合形成复合物。再向上述复合物中加入已生物素化的抗体和用钌复合物标记好的抗体及包被了链霉亲和素的磁珠微粒后再次进行孵育，孵育时抗原上游离的位点会被占据，形成的免疫复合物将通过链霉亲合素和生物素的相互作用而结合至固相。将上述反应液通过电磁场，在电磁作用下，磁珠微粒将吸附在电极表面，而未与磁珠微粒结合的物质将被缓冲液除去。然后给电极加一定的电压，使复合物产生化学发光反应，使用光电倍增管检测发光强度。仪器通过Elecsys软件自动测出样本的信号值,与预先定标获得的Cutoff值进行比较得到检验结果。1.3.2实验材料实验器材和试剂：罗氏cobas8000e602型全自动电化学发光免疫分析仪、配套吸头和反应杯、高速离心机、一次性吸管、一次性样品杯、乙型肝炎病毒e抗体检测试剂盒（罗氏产品）、乙型肝炎病毒核心抗体检测试剂盒（罗氏产品）、配套的系统缓冲液（ProCell/ProCellM）、测量池洗液和附加洗液。1.3.3标本采集静脉穿刺前准备好一次性采血针、灭菌干脱脂棉签、垫枕、75%乙醇、消毒的压脉带和惰性分离胶促凝管，在试管上贴好条码并核对检验单。因乙肝检查属于血清学免疫检测，不用受进食的影响，所以可以空腹抽血，也可以餐后抽血检测。采血前患者最好静息10～15分钟。压脉带使用时间最好不要超过1min，选择肘前静脉进行采血，采血部位需用乙醇消毒，消毒直径需大于5厘米。采血针针头30°刺入静脉顺势探入10～15mm见回血需迅速解开止血带，并告诉患者松拳。采取5ml血液后，用棉签轻压伤口上方快速拔针，继续按压伤口约3min。迅速轻轻的颠倒混匀试管，不要振荡试管，再次核对检验单信息，及时送检。1.3.4检验步骤1.3.4.1将标本签收并将患者身份信息录入LIS系统。标本室温静置15分钟，将含有全血的标本采集管放入离心机中以4000r/min离心5分钟，得到带有少许纤维蛋白丝的澄清血清。用一次性吸管小心吸取，可得到能直接上机使用的血清。若吸取时不小心拉扯纤维蛋白丝致使血丝被拉扯，请将血清再次离心进行检测。1.3.4.2将冷藏的试剂在室温中平衡至20℃左右再放置分析仪的试剂盘内，试剂使用前分析仪将会自动搅拌磁珠微粒使其处于悬浮状态。1.3.4.3将仪器开机：按顺序依次打开仪器增压泵、水箱和供水系统电源开关。开启DM，再接通仪器前端绿色操作按钮后登录用户名和密码，将仪器初始化后会进入自动保养，等待仪器进入Standby状态。1.3.4.4将待测标本录入LIs系统并编号，按进样顺序将待测标本按序号依次放入操作架中，核对编号无误并将操作架放入进样口，在操作系统页面点击start进行标本检测。1.3.4.5仪器自动运行下列程序：①HbeAb的检测：仪器吸取35ul的样本，样本中的HbeAb与HbeAg结合进行孵育。然后加入已生物素化的HbeAb和用钌复合物标记好的HbeAb及包被了链霉亲和素的磁珠微粒，这些物质和前面孵育而成的复合物再次进行孵育，孵育时抗原上游离的位点会被占据，形成的免疫复合物将通过链霉亲合素和生物素相互作用结合至固相。将上述反应液通过电磁场，在电磁作用下，磁珠微粒将吸附在电极表面，而未与磁珠微粒结合的物质将被缓冲液除去。然后给电极加一定的电压，使复合物产生化学发光反应，使用光电倍增管检测发光强度。仪器通过Elecsys软件自动测出样本的信号值,与预先定标获得的Cutoff值进行比较得到检验结果。②HBcAb的检测：HBcAb检测还需用还原剂预处理40ul的标本，再加入HBcAg与已预处理标本内的HBcAb结合进行孵育。然后加入已生物素化的HBcAb和用钌复合物标记好的HBcAg特异性抗体及包被了链霉亲和素的磁珠微粒，这些物质和前面孵育而成的复合物再次进行孵育，孵育时抗原上游离的位点会被占据，形成的免疫复合物将通过链霉亲合素和生物素相互作用结合至固相。将上述反应液通过电磁场，在电磁作用下，磁珠微粒将吸附在电极表面，而未与磁珠微粒结合的物质将被缓冲液除去。然后给电极加一定的电压，使复合物产生化学发光反应，使用光电倍增管检测发光强度。仪器通过Elecsys软件自动测出样本的信号值,与预先定标获得的Cutoff值进行比较得到检验结果。1.3.4.6结果查询：大约50min。1.3.5检测结果（如图2所示）及判断检测项目检测结果单位参考范围结果判断HBeAb7.580COI1～10000阴性HBcAb0.008COI1～10000阳性图1罗氏cobas8000e602型全自动电化学发光免疫分析仪图2患者乙肝两对半检测结果报告单1.4注意事项1.4.1进行标本测定前仪器必需要进行质量控制和制作定标曲线。1.4.2考虑到液体挥发效应，上机的所有样本（患者样本、质控液和校准液）需要在两个小时内进行测定。1.4.3仪器进行检测前一定要确保机器所需的试剂是否齐全，机器所需的耗材是否需要补充和样本检测时的样本量是否充足。1.4.4进样时要注意推板位置是否正确，机器运作时注意不要碰到正在运作的部件，否则可能夹伤操作者肢体或造成仪器停机。2.结论乙肝两对半又叫做乙肝五项，乙肝指乙型肝炎病毒，五项是指乙型肝炎病毒的五个检测指标。这五个检测指标第一项为表面抗原(HBsAg)，若检验结果为阳性则标志着患者已经感染病毒；第二项为表面抗体表面抗原(HBsAb)，若检验结果为阳性则标志着患者机体对病毒产生了免疫力，若接种了乙肝疫苗，检验结果为阳性应将其视为正常现象；第三项为e抗原(HBeAg)，若检验结果为阳性则标志着患者体内病毒复制，正处于病毒复制活跃时期的患者传染性较强，若检验结果3个月以上都为阳性会有慢性化倾向；第四项为e抗体(HBeAb)，若检验结果为阳性则标志着患者体内病毒复制停止，处于此时期的患者传染性因为病毒复制减少的原因，传染性较弱；第五项为核心抗体(HBcAb)，若检验结果为阳性则标志着患者曾经感染或现在正在感染。以上五项统称为乙肝五项，作为一个组合项目的检查意义在于患者机体是否感染乙肝病毒和感染的具体情况，比如第一、三、五项检查结果为阳性，为乙肝的“大三阳”；第一、四、五项检查结果为阳性，为乙肝的“小三阳”。一般认为“小三阳”的感染性较“大三阳”要小，但无论是“大三阳”还是“小三阳”都只是反映患者体内携带病毒的情况，不能反映肝功能的情况。经化学发光法检测，该病人乙型肝炎表面抗原含量为1303.000(COI)，乙型肝炎病毒e抗原含量为1637.000(COI)，乙型肝炎病毒核心抗体含量为0.008(COI)，三者检测结果为阳性，为余阴性，结合病人的临床资料，考虑为慢性HBV携带者。因其系慢性乙肝病毒携带，有胎儿宫内感染可能，胎儿出生后需实施预防感染措施被动免疫，且不能完全杜绝。参考文献[1]韩丽蓉.乙型肝炎乙肝五项检测的临床意义[J].临床合理用药杂志,2012,08(26):109.[2]林逢春,石艳春主编.免疫学检验第4版[M].北京:人民卫生出版社,2015.[3]李萍，孙连桃.临床检验基础实验[M].武汉:华中科技大学出版社,2013.