7化学发光法测血清HCG实验七化学发光法测血清HCG人绒毛膜促性腺激素（humanchorionicgonadotrophin，HCG）是孕卵着床后由人体滋养层细胞分泌的一种糖蛋白激素。在胚泡植入子宫内膜后胚泡滋养层生长时，HCG分泌量会骤然增加。这种变化同时反映在母体的血液和尿中，因此测定HCG的含量和其变化可用于诊断早期妊娠、葡萄胎等，还可用于计划生育有关药物的研究。【实验原理】本方法为化学发光（CLIA）夹心法，是两步骤免疫检测。在第一步骤中，样品和抗hCG包被的顺磁性微粒相结合。存在于样品中的HCG结合到抗HCG包被的微粒上。冲洗后，将抗HCG吖啶标志物结合物添加到第二步骤中。随后将前激发和激发溶液添加到反应混合物中，产生的化学发光反应作为相对光单位（RLU）进行检测。样品中HCG量与检测的RLU成正比。【试剂】仪器配套试剂1.试剂主要成份微粒子包被的抗体标记结合物样品稀释液2.试剂的准备、贮存及稳定性1）试剂准备与检查检查仪器上原有试剂量，如原有试剂量不足，取所需试剂放入仪器。检查激发液、预激发液、缓冲液的量及有效期。2）试剂的贮存试剂盒必须贮存于2-8℃下，从该温度下取出后应立即使用。试剂可以在仪器试剂舱中贮存，贮存时须确保其朝上放置。3）试剂的稳定性在按照指导进行贮存和处理的情况下，试剂稳定性可以直达效期。【仪器】全自动化学发光、电化学发光分析仪【样本采集与准备】1.样本采集：人血清或用EDTA三钾，肝素锂和肝素钠抗凝的血浆可在检测中使用。2.样本的准备1）离心（2500-3000r/min，10分钟）分离血清（浆）。2）样本上机前应确保样本中无泡沫、纤维、红细胞或其它颗粒，否则会导致错误结果。3.样本的保存及稳定性：如果放置时间超过24小时，须分离血清或血浆。样品可以在2-8℃下放至7天。如果超过7天检测，则需将样品贮存于-20℃或更低温度下。【校准】1.在进行实验校准操作时，对标准品A，B，C,D，E和F进行复管检测。2.校准后需测定高、中、低值的质控品，以对检测校准进行评估。3.应确保质控数值都在质控品
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中所规定的范围内。【操作步骤】1.申请检验项目，将样本架推入轨道。2.仪器运行：按下RUN。ARCHITECTI系统会执行以下操作：●将样品传送装置移至吸液点●将反应器装入处理通道●吸样，并将样品运送到反应器●将反应器前移一个位置，并将检测稀释液和微粒运送到反应器中。●混合，孵育并冲洗反应混合物●添加结合物到反应器●混合，孵育并冲洗反应混合物●添加前触发和触发溶液●检测化学发光情况，确定样品中HCG的定量●将反应器中的内容物吸液到废液中，并将反应器放入固体废弃物●计算结果【计算】ARCHITECTHCG检测使用了一个4参数逻辑曲线最适数据递减法（4PLC，Y加权）来生成一个校准曲线。根据校准曲线可测得HCG含量。此步骤由仪器自动完成。【质量控制】1.质控品：将质控品分装，保存于-20℃冰箱供日常检测使用。2.质控的方法：每天取出质控物，置室温15分钟融化，混匀。在机器做完日保养后上机检测，质控结果与允许值范围对比合格后才能检测病人标本，若结果失控应按失控程序处理。3.质控判定规则：Westgard多规则12s：一个质控结果超过±2S,违背此规则,提示警告。12.5s:一个质控结果超过±2.5S,违背此规则,提示存在随机误差。13s:一个质控结果超过±3S,违背此规则,提示存在随机误差。R4S:同批两个质控结果超过4S,即一个质控结果超过+2S,另一个质控结果超过-2S.也适用于超过+2.5S及-1.5S,违背此规则,提示存在随机误差。2-2S:两个连续质控结果同时超过+2S或-2S,违背此规则
表
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示存在系统误差。4-1S：一个质控品连续4次测定结果都超过+lS或-1S,两个质控品连续两次测定都超过+1S或-1S为违背此规则表示存在系统误差。10:10个连续的质控结果在平均数一侧，违背此规则表示存在系统误差。注:实验室可根据自己的工作情况选用上述规则。【生物参考区间】：0-5mIU/ml每个实验室最好通过对本地区各类人群的调查建立自己的参考值。【临床意义】HCG在月经延期3天左右即可测出，孕期9-12周血中浓度达高峰，可高达15000U/L（CLIA法）以上，此后逐渐下降，18周时降至最低水平约12000-28000U/L（CLIA法），直至分娩后4天达正常水平。因此可用以诊断早孕及宫外孕，进行先兆流产的动态观察及判断预后，还可作为孕期的监护观察指标。此外，也可用于绒癌、恶性葡萄胎等作为辅助诊断及治疗后随访的观察指标。因为血中HCG变化较快，能及时反映出绒毛的分泌活动。男性非精原细胞的睾丸肿瘤患者血中HCG值也高。【
注意事项
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】1.应该避免对样品的多次冻融。融解后，样品必须彻底混合。2.缓冲液、试剂、标准品和质控品必须严格按照试剂说明书的
要求
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保存和运输。3.缓冲液、试剂、标准品和质控品及系统消耗品在有效期内使用；不得将不同批号的试剂混合使用。【实验的干扰】来源于血红蛋白，胆红素，甘油三酸脂以及蛋白质的潜在干扰在ARCHITECTHCG检测中进行了试验。ARCHITECTHCG检测证明了以下干扰。●血红蛋白：在500毫克/分升上<10％●胆红素：在20毫克/分升上<10％●甘油三酸脂：在3000毫克/分升上<10％●蛋白质：在2和12克/分升上<10％【方法的评价】化学发光反应所用的标记物为吖啶酯，可直接标记抗原或抗体，结合稳定，不影响标记物的生物学活性和理化特性，试剂有效期长。发光背景噪音低，化学反应简单、快速而无需催化剂。所用分离剂为极细的固相磁粉，除可增大包被面积，加快反应外，亦同时使清洗及分离更简便、快捷。吖啶酯发光为瞬间发光，持续时间短，因此，对信号检测仪的灵敏度要求比较高。
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