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透析后絮状沉淀

透析后絮状沉淀透析后絮状沉淀蛋白透析时产生的絮状沉淀真的令不少人痛心不已，有时明明看了又看，都没发现哪里不对，那么，这其中可能是哪里出现问题，还有这些问题从哪些方面着手解决最合适呢?请看下文分析：蛋白透析产生沉淀可能有以下原因：1.由高浓度的蛋白变性试剂(如8m尿素)，到低浓度，再到不含变性剂的buffer，如果条件变化剧烈，使得蛋白不正确折叠而沉淀，这种情况比较常见。如果选择透析的方法，一定要多加几个中间浓度梯度，而且注意低温(4度)，这有利于蛋白正确折叠。2.透析袋本身有一定的吸附，可以通过磁力搅拌来降低吸附。3.透析液PH...

透析后絮状沉淀蛋白透析时产生的絮状沉淀真的令不少人痛心不已，有时明明看了又看，都没发现哪里不对，那么，这其中可能是哪里出现问题，还有这些问题从哪些方面着手解决最合适呢?请看下文分析：蛋白透析产生沉淀可能有以下原因：1.由高浓度的蛋白变性试剂(如8m尿素)，到低浓度，再到不含变性剂的buffer，如果条件变化剧烈，使得蛋白不正确折叠而沉淀，这种情况比较常见。如果选择透析的方法，一定要多加几个中间浓度梯度，而且注意低温(4度)，这有利于蛋白正确折叠。2.透析袋本身有一定的吸附，可以通过磁力搅拌来降低吸附。3.透析液PH靠近等电点，像catzp说的，换buffer。4.透析袋不干净?楼主不会范这种错误吧。或者没认真处理，有杂质、金属离子建议：1可以采用梯度浓度透析，先采用与你纯化后蛋白盐浓度相近的透析液透析，4-8小时后换更小浓度的盐溶液透析，最后采用生理盐水或PBS(pH7.4)透析。例如：用6M盐酸胍沉淀的目的蛋白，第一步透析可采用4M盐酸胍透析，4-8小时后采用2M盐酸胍透析，再之后可以使用PBS或生理盐水。2透析液的pH值不要和目的蛋白的等电点接近，这样目的蛋白可能会更容易沉淀。3保持蛋白浓度在mg/ml量级上面。4用20mM的醋酸透析也能降低沉淀5加一些保护剂，如蔗糖，甘油，巯基乙醇等。6减少脱盐时间。可考虑用超滤或者G系列的凝胶脱盐，这样时间较快，减少蛋白质的变性。7增加蛋白质浓度也可在一定程度上减少透析过程中蛋白质的沉淀，不过效果不是特别好的。8最后，不排除是蛋白不稳定的可能性，可在提纯开始时加点甘油，浓度控制在10-25%左右。

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