华西药学杂志
W C J·P S 2011,26(2)∶193 ~ 195
1. 2. 3 理化鉴别 青海软玉为透闪石矿物,主要化
学成分为:59. 17% SiO2、24. 81% MgO、13. 81%
CaO、0. 22% ~0. 40% FeO[1 - 2]。按文献[3]分别鉴
别钙盐、镁盐、亚铁盐及铁盐。取 4 g 妙翅玉样品粉
末,加 30 mL 稀盐酸,超声处理 40 min,挥干,加 10
mL水溶解,得样品溶液。取 2 mL样品溶液,加甲基
红指示液 2 滴,用氨试液中和,再滴加稀盐酸至恰呈
酸性,加草酸铵试液,生成白色沉淀,分离,沉淀不溶
于醋酸,可溶于稀盐酸,试验呈钙盐阳性鉴别的结
果。另取 2 mL样品溶液,加氢氧化钠试液,生成白
色沉淀。分离该沉淀为两份,一份中加入过量氢氧
化钠试液,沉淀不溶解;另一份中加入碘试液,沉淀
转为红棕色,试验呈镁盐阳性鉴别的结果。再取 2
mL样品溶液,滴加铁氰化钾试液,生成深蓝色沉淀;
分离的沉淀在稀盐酸中不溶,但加氢氧化钠试液,即
分解成棕色沉淀,试验呈亚铁盐阳性鉴别的结果。
1. 2. 4 重金属检查 按文献[3]的重金属检查法
(第二法)检查样品的重金属。称取 2. 0 g妙翅玉粉
末,缓缓炽灼至完全炭化,放冷,加 1. 0 mL 硫酸,低
温加热至硫酸除尽后,放冷,加入 0. 5 mL 硝酸,蒸
干,至氧化氮蒸气除尽后,放冷,于箱式电阻炉上
550 ℃炽灼 4 h,炽灼至完全灰化,放冷,加 2 mL 盐
酸,置水浴上蒸干后加 15 mL水,滴加氨试液至对酚
酞指示液显中性,再加 2 mL pH3. 5 醋酸盐缓冲液,
微热溶解后,过滤,移至纳氏比色管中,编号为 1#,
加水稀释成 25 mL;另取 3 份配制样品溶液的试剂,
置瓷皿中蒸干,加 2 mL pH3. 5 醋酸盐缓冲液与 15
mL水,微热溶解后,分别移至纳氏比色管中,编号为
2# ~ 4#,分别加 1、2、3 mL
标准
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铅溶液(相当于
10 μg·mL -1 Pb) ,再分别用水稀释成 25 mL。在以
上各管中分别加 2 mL 硫代乙酰胺试液,摇匀,放置
2 min,同置白纸上,自上而下透视。妙翅玉样品颜
色均浅于 2# ~ 4#管,表明样品含重金属未超过《中
国药典》2005 年版一部的规定。
2 讨论
根据产地考查、性状鉴别、理化鉴别、重金属检
查,可初步确定藏医特色药材妙翅玉应为昆仑玉中
的青白玉。在《中药大辞典》中记载有药材玉屑,其
主要来源为矿物软玉的碎粒[4]。软玉为致密或细
粒的块状。白色至浅绿色,微透明至不透明,有灿烂
之玻璃状或蜡状光泽。由角闪石或阳起石变质而
成。功能主治为润心肺,清胃热。治喘息烦满,消
渴。可看出样品与《中药大辞典》中所收载的玉屑
相符合。为了避免药材名称的混淆(同物异名) ,故
建议更名为玉屑。
鉴别铁盐及亚铁盐时,由于含量很少,所以制备
供试品时,样品应充分研磨,以便提取完全。为便于
观察,反应生成的沉淀,应静置或离心去除上清液,
再进行下一步反应。尽管本品中亚铁盐含量较低,
但由于生成的沉淀具有明显而特有的颜色(深棕
色) ,因此,这一反应也能用于定性鉴别玉屑。
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上册
三年级上册必备古诗语文八年级上册教案下载人教社三年级上册数学 pdf四年级上册口算下载三年级数学教材上册pdf
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出版社,1985:554.
收稿日期:2010 - 05 - 17
基金项目:广西科技厅桂科能 0630006 - 5A
作者简介:梁健钦(1977—) ,男,广西桂平,讲师,正攻读药理学专业的博士学位。Email:liangjianqin@ 139. com
* 通信作者,Email:dengjg53@ hotmail. com
芒果苷油水分配系数的测定
梁健钦1,2,邓家刚1*
(1.广西医科大学,广西 南宁 530021;2.广西中医学院,广西 南宁 530001)
摘要:目的 测定芒果苷在正辛醇 -水系统中的油水分配系数,考察系统中 pH对油水分配系数的影响。方法 采用 HPLC
法测定芒果苷的含量,并采用摇瓶法测定芒果苷在不同 pH 的正辛醇 -水中的油水分配系数。结果 芒果苷在 pH为 1. 32、
2. 52、3. 32、4. 50、6. 86、7. 40、8. 01时,油水分配系数平均值分别为 2. 234、2. 313、2. 125、1. 907、0. 246、0. 008、0. 005。结论 pH可
显著影响芒果苷的油水分配系数,在胃肠环境中油水分配系数很小,可能是造成芒果苷在胃肠道全段通透性较差的原因之一。
关键词:芒果苷;油水分配系数;高效液相色谱法;胃肠环境
中图分类号:R917 文献标志码:B 文章编号:1006 - 0103(2011)02 - 0193 - 03
芒果苷是从漆树科植物芒果 Mangifera indica
L.、百合科植物知母 Anemarrhena asphodeloides
Bge.、鸢尾科植物射干 Belamcanda chinensis(L.)
DC.等植物中提取得到的糖苷,具有抑制中枢神经
系统、抗炎、抑菌、抗单纯疱疹病毒、利胆和免疫调节
等作用,对模拟高原急性低氧肝损伤有保护作
用[1]。芒果苷具有 xanthones结构的 C糖苷,溶解度
差(纯水及 pH1. 3 ~ 5. 0 的缓冲溶液中平均溶解度
约为 0. 16 mg·mL -1) ,略溶于甲醇、乙醇,可溶于热
稀甲醇、热稀乙醇,不溶于非极性溶剂,很大程度上
影响了其应用。预实验发现芒果苷的生物利用度很
低。通常,造成药物生物利用度较低的原因主要为
溶解性低、稳定性不好、膜通透性差及高首过作用。
现通过考察芒果苷在不同 pH 环境下的油水分配系
数来预测其在胃肠道的通透性。
1 实验部分
1. 1 仪器与试药
e - 2695 高效液相色谱仪(美国Waters) ;pHS -
25 型 pH计(上海精科雷磁仪器厂)。芒果苷原料
药(自制,纯度 > 96%) ;芒果苷对照品(中国药品生
物制品检定所,批号:111607 - 200301) ;乙腈、甲醇
为色谱纯;其余试剂为分析纯。
1. 2 方法与结果
1. 2. 1 色谱条件 采用 Diamonsil C18(2)色谱柱
(250 mm × 4. 6 mm,5 μm) ;以乙腈为流动相 A,
0. 5%磷酸溶液为流动相 B,按 0 ~ 15 min、12%→
55% A、88%→45% B,15 ~ 20 min、55%→65% A、
45%→35% B,20 ~ 21 min、65%→12% A、35%→
88% B,21 ~ 22 min、12% A、88% B进行梯度洗脱;
检测波长 258 nm;进样量 10 μL。理论板数按芒果
苷峰计应不低于 6 × 103。在该色谱条件下,芒果苷
峰的分离效果很好(图 1)。
0 5 10
t/min
图 1 芒果苷的色谱图
1. 2. 2 线性关系的考察 精密称取 2. 20 mg 芒果
苷对照品,置 5 mL 量瓶中,用 50%甲醇溶解并定
容,制得 440. 0 μg·mL -1的对照品溶液。精密吸取
对照品溶液用 50%甲醇分别稀释成 0. 22、2. 2、11、
22、44、110、220、440 μg·mL -1的对照品溶液,照
“1. 2. 1”项色谱条件测定。以峰面积为纵坐标、浓
度为横坐标,进行线性回归,得回归方程为:Y =
3. 284 × 104X + 7. 272 × 104(r = 0. 9994)。进样浓度
的线性范围为 0. 22 ~ 440 μg·mL -1。
1. 2. 3 精密度的考察 取 pH4. 5 醋酸盐缓冲溶液
制备的正辛醇 -水混合体系,精密吸取 2 mL上层正
辛醇溶液,于 1. 2 × 104 r·min -1离心 10 min,精密吸
取 1 mL 上清液,置 2 mL 量瓶中,加甲醇定容。照
“1. 2. 1”项色谱条件测定,重复 6 次,芒果苷的平均
峰面积的 RSD = 0. 86%。
1. 2. 4 重复性考察 取 pH4. 5 醋酸盐缓冲溶液制
备的正辛醇 -水混合体系,精密吸取 2 mL上层正辛
醇溶液,共 6 份,于 1. 2 × 104 r·min -1离心 10 min,精
密吸取 1 mL上清液,置 2 mL 量瓶中,加甲醇定容,
照“1. 2. 1”项色谱条件测定,芒果苷的平均含量为
32. 5 μg·mL -1,RSD为 1. 37%。
1. 2. 5 加样回收率 取 pH4. 5 醋酸盐缓冲溶液制
备的正辛醇 -水混合体系,精密吸取 2 mL上层正辛
醇溶液 6 份,于 1. 2 × 104 r·min -1离心 10 min,精密
吸取 0. 5 mL上清液,加 0. 5 mL 22 μg·mL -1的对照
品溶液,置 2 mL 量瓶中,加甲醇定容。照“1. 2. 1”
项色谱条件测定芒果苷的含量,计算加样回收率。
计算得平均加样回收率为 99. 74%,RSD = 1. 12%,
准确度良好。
1. 2. 6 稳定性试验 取“1. 2. 3”项下溶液,分别于
2、4、6、8、16、24 h 时测定峰面积,溶液在 24 h 内稳
定性良好,RSD = 1. 76%。
1. 2. 7 溶液的制备 取过量的芒果苷,置 50 mL量
瓶中,加入适量水饱和的正辛醇,置水浴摇床中,
37 ± 1 ℃振摇 48 h,经 0. 45 μm滤膜过滤,即得芒果
苷正辛醇饱和溶液。依法测定芒果苷的浓度(C0)。
配制 100 mmol·L -1、pH 分别为 1. 32、2. 52、3. 32、
4. 50、6. 86、7. 40、8. 01 的缓冲溶液。吸取适量正辛
醇溶液与 pH不同的缓冲溶液,置恒温水浴摇床中,
37 ± 1 ℃振摇 24 h,离心分层后,吸取下层溶液,即
为正辛醇饱和的水溶液。
1. 2. 8 油水分配系数的测定 分别吸取 2 mL芒果
苷的正辛醇饱和水溶液,分别加入 2 mL pH 分别为
1. 32、2. 52、3. 32、4. 50、6. 86、7. 40、8. 01 的缓冲溶
液,平行操作 2 份,置恒温水浴摇床中,37 ℃振摇
24 h,离心分层后,精密吸取 1 mL 上清液,置 2 mL
量瓶中,加甲醇定容。依法测定芒果苷的峰面积,计
491 华 西 药 学 杂 志 第 26 卷
算油相中芒果苷的浓度(C)及油水分配系数[P =
C /(C0 - C) ]。芒果苷在 pH1. 32、2. 52、3. 32、4. 50、
6. 86、7. 40、8. 01 时的油水分配系数分别为 2. 234、
2. 313、2. 125、1. 907、0. 246、0. 008、0. 005,以 P 为纵
坐标、pH为横坐标,绘制 P - pH 图(图 1)。芒果苷
的油水分配系数受 pH影响很大。芒果苷在酸性环
境的分配系数较大,说明在酸性环境中分子型比解
离型多;在 pH1. 3 ~ 3. 3,芒果苷的 P 值约为 2. 2,说
明芒果苷在正辛醇相的浓度是水相的 2. 2 倍,但是
P值较小;在偏中性(pH6. 86 及 pH7. 40)及碱性
(pH8. 01)环境中,芒果苷的油水分配系数显著降
低,尤其是在 pH7. 4 以上时,P 值非常低,水中芒果
苷的量是油相中的 100 ~ 200 倍。
2.5
2
1.5
1
0.5
0
0 5 10
pH
P
图 2 芒果苷在不同 pH下的油水分配系数
2 讨论
文献[2]对芒果苷的解离常数(pKa)进行测定时
发现:芒果苷芳环上 4 个羟基的酸性强弱顺序为6 -
OH >3 - OH > 7 - OH > 1 - OH,pKa 分别为 pKa1
(6 - OH)= 6. 52 ± 0. 06、pKa2(3 - OH)= 7. 97 ±
0. 06、pKa3(7 - OH)= 9. 44 ± 0. 04、pKa4(1 -
OH)= 12. 10 ± 0. 01。结合文中内容,当 pH6. 86
(pH > pKa1)时,芒果苷发生一级解离,离子型百分
比增加,芒果苷水溶性增加,油水分配系数降低至
0. 25;当 pH8. 01(pH > pKa2)时,发生二级解离,分
子极性进一步增加,油水分配系数迅速降低至
0. 005。芒果苷在酸性环境下(如十二指肠、空肠、
回肠部位)1 < P < 3;中性及碱性环境下(如小肠部
位)P < 1。根据这些特点,推测芒果苷在 pH1. 3 ~
3. 3 细胞膜通透性不高,但是相比其在碱性环境下,
芒果苷的通透性仍然高 10 ~ 300 倍。从整体水平
看,芒果苷在大鼠肠道的全段通透性较差,与其油水
分配系数较低有直接关系。人与大鼠吸收数据相关
较好(r2 = 0. 97) ,所以通常选用大鼠作为药物在体
肠道吸收模型。人体胃肠道的 pH 梯度为:胃中
pH1 ~ 2,小肠中 pH5 ~ 8、十二指肠中 pH5 ~ 6、结肠
中pH7 ~ 8。小肠通过的时间范围为 3 ~ 4 h[3]。
完全溶解的芒果苷溶液在十二指肠、空肠、回肠
及结肠部位的吸收符合被动过程一级速度过程,吸
收速度回肠 >空肠 >结肠 >十二指肠,芒果苷在各
部位的平均吸收半衰期约为 5. 25 h[4]。结合本实
验,由于芒果苷在偏酸性环境(如十二指肠、空肠、
回肠部位)的油水分配系数较偏碱性环境(如小肠
部位)大,预测芒果苷在十二指肠、空肠、回肠段较
结肠段的吸收好,肠道全段吸收较差。同时可预测
芒果苷口服给药后,在胃肠道吸收较少,导致生物利
用度较低。结果提示:芒果苷在十二指肠、空肠、回
肠、结肠段的吸收速度常数分别为 0. 107 ± 0. 012、
0. 132 ± 0. 006、0. 164 ± 0. 007、0. 125 ± 0. 008 h -1。
文献[5]对大鼠静脉注射给予 3 个剂量的芒果苷
(10、25、50 mg·kg -1) ,其消除速度常数分别为
0. 18 ± 0. 01、0. 35 ± 0. 05、0. 58 ± 0. 37 h -1;同时,文
献[6]对大鼠灌胃给予知母提取液,血浆中芒果苷的
消除速度常数为 0. 1156 ± 0. 0078 h -1。对比分析发
现,芒果苷的吸收速度常数与消除速度常数相近,所
以导致血浆中芒果苷浓度很低,芒果苷是一种吸收
慢的药物。
芒果苷在不同 pH 下油水分配系数较小且受
pH值影响显著。低的油水分配系数可能是导致芒
果苷在胃肠道全段膜通透性较差的原因之一。可以
通过结构修饰的方法,增加芒果苷脂溶性,提高芒果
苷的膜通透性来达到提高生物利用度的目的。目前
采用最为广泛的方法是制成酯类前体药物,该前体
药物进入小肠上皮后可在代谢酶的作用下还原成芒
果苷,从而发挥药效。
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收稿日期:2010 - 05 - 20
591第 2 期 梁健钦,等。芒果苷油水分配系数的测定