中药药理实验方法学第二章

null 第三节 中药药理实验设计的基本原则 null1. 对照 （1） 正常对照组（空白对照、阴性对照） （2）模型对照组 （3）阳性对照组 意义：①检验实验体系是否可靠 ②粗略估计受试药与对照药相比，作用强度与特点上有哪些差异。 null（4）假手术对照组 有时可以替代正常对照 （5）自身对照 观察同一个体给药前、后的区别 .null 2. 随机： 目的： （1）避免非研究因素影响。 （2） 除研究因素外，提高各比较组的其他因素的均衡性、可比性。 （3）满足统计学假设检验的 要求 对教师党员的评价套管和固井爆破片与爆破装置仓库管理基本要求三甲医院都需要复审吗 。null 抽签随机法： 例：30只小鼠，要求随机分为3组： 可先将30只小鼠按1至30编号，做1-30号签，充分混合号签后，随机各取10枚为一组。 null随机数字 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 法：取P.187,表22－1，第16行 null 顺序号: A组：1， 9，12， 13，15 B组: 2， 3， 5， 7， 10， 11 C组：4， 6， 8， 14 按原随机数字顺序继续抄一随机号: 08 除以6 余数: 2, 将8组第二只，即3号小鼠编入C组。 调整后各组的编号 : A 组：1， 9，12，13， 15 B 组：2， 5，7， 10， 11 C 组: 3，4， 6， 8， 14 null 练习： 20个小鼠，根据下例随机数顺序，将其随机分成4组。 取P.187,表22－1，第1行 随机号：22 17 68 65 84 68 95 23 92 35 87 02 22 57 51 61 09 43 95 06 58 24 82 03 47null 鼠号： 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 随机号： 22 17 68 65 84 68 95 23 92 35 除以4余数：2 1 0 1 0 0 3 3 0 3 鼠号： 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 随机号： 87 02 22 57 51 61 09 43 95 06 除以4余数：3 2 2 1 3 1 1 3 3 2 随机号： 58 24 82 03 47null 根据余数分组鼠号： A组： 2 4 14 16 17 B组： 1 12 13 20 C组： 7 8 10 11 15 18 19 D组： 3 5 6 9 继续按顺序抄2个随机号： 58 24 58/ 7 余数为2，即C组第2个动物（8号）编入B组。 24/6 余数为0，即C组余下的6个动物中的第6个（19号）编入D组。null 调整后随机分组的结果为（按动物号）： A组： 2 4 14 16 17 B组： 1 8 12 13 20 C组： 7 10 11 15 18 D组： 3 5 6 9 19 null 3. 重复 ： 目的：验证在类似的条件是否可获得结果的重现以及结果的变异情况 。 要点： A.确定适当的样本数。 B.各组动物数目尽量相同。 按动物类型确定样本数： （1）小动物：计量>10例;计数>30例 （2）中等动物：计量> 8 ;计数> 20例 （3）大动物5-10例第四节 实验动物选择 第四节 实验动物选择 一、实验动物 1、按要求选择不同级别符合医学实验 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 的动物 一级：普通动物（亦称常规动物或无疾病的动物）； 二级：清洁动物（饲养在温度恒定，普通设施中的动物，饲料、垫料，用具均经过高压消毒）；null 三级：无特殊病原体动物（specific-pathogen free , 简称SPF动物）；在清洁级基础上还需不带干扰实验的微生物，在隔离室或层流室饲养 。 四级：无菌动物（机体内外均无任何寄生虫的动物，一般是临产前按无菌手术 剖腹取出胎仔，在无菌条件下用无菌饲料繁养获得的动物）。 null 2、根据实验目的选择敏感种系 心血管系统: 大鼠猫、犬、小型猪等。 体温调节：兔 呕吐实验：鸽、猫或狗等。 免疫调节：纯种小鼠 原则:选择对药物的反应与人体相近的 种系。 null 3、性别 ：根据要求选择 用一种性别比两种性别兼用所得结果离散度较小。 4、年龄体重 ： 每批动物的体重，年龄越接近越好 通常：小鼠:18-22g，大鼠:200±25g， 豚鼠:250-300g，兔、猫:1.5-2Kg, 犬:10-15kg。 大鼠、小鼠:6-8周龄 null 4、数量 ： 计量研究：小鼠每组>10只 大鼠每组>8只 豚鼠或兔每组>6只 猪或狗>5只 计数研究： 小鼠每组>30只 大鼠每组>20只 null 5.习性:小鼠、大鼠均为群居动物，不宜单独饲养。 二、 受试药 二、 受试药 1.制备情况： （1）新药受试药要求：用处方固定，质量稳定、工艺、质控指标恒定后的中试产品。 （2）一般受试中药：生药经鉴定，科属种清楚；提取制备工艺明确，含量确定（以生药量或有效组分含量表示）。 （3）中药单体：化学结构式清楚。2、给药途径 2、给药途径 实验的给药途径与临床拟使用的途径一致。 中药粗制剂一般不用注射给药或体外实验的方法检测药物效应 。3、给药时间3、给药时间 注明首次给药时间及每次给药的间隔时间。 预防性给药： 治疗给药： 4、剂量：4、剂量： 剂量组数：新药研究至少设3个剂量组。 三者最好成等比，能反应量效关系。 给药容量相等，浓度不等。 合理选择剂量： （1）参考LD50：在LD50的1/10、1/20、1/40等范围内设置高、中、低剂量组。 （2）根据临床用药等效量计算 ： 不同种类动物等效用药量的计算不同种类动物等效用药量的计算null应用举例： ①某复方的总药量是60g/剂，每天1剂。按实验动物与人用药量折算表计算 ，200g重大鼠等效量是多少？ 200g重大鼠等效量为：60g×0.018=1.08g/只， 或： 60g÷56＝1.07g/只 null人的每公斤体重给药量为：60g÷70=0.857g/Kg。 大鼠每公斤的给药量是：1.08g×1000/200=5.4g/Kg 按体重计算，要达到等效，大鼠的剂量应为人用剂量的5.4g/Kg÷0.857g/Kg=6.3（倍）。 null②如同一复方要用小鼠实验，小鼠每只的给药量为： 60×0.0026＝0.156g/只； 0.156÷20/1000=7.8 g/Kg； 按体重计算，要达到等效，小鼠的剂量应为人用剂量的7.80g/Kg÷0.857g/Kg=9.1（倍）。null③豚鼠应用量为60÷31.5=1.90g/只； 1.90÷400/1000=4.762g/Kg。 按体重计算，要达到等效，豚鼠的剂量为人用量的4.762÷0.857＝5.56（倍）。null④兔：60÷14.2＝4.225g/只；4.225÷1.5＝2.81 6g/Kg。 按体重计算，要达到等效， 兔的剂量应为人用量的 2.816÷0.857＝3.287（倍）。null⑤狗用量为60g÷3.1＝19.35g/只；19.35÷12=1.61g/Kg。 按体重计算，要达到等效， 狗的给药量应为人的 1.61÷0.857＝1.88（倍）nullnull噻嗪类 不同种类动物间用药剂量换算表 （转换因子 计算法）不同种类动物间用药剂量换算表 （转换因子 计算法）某利尿 中药250g重大鼠的有效量为250 mg/kg，试计算15kg犬的等效实验剂量？ 犬的等效实验剂量 ＝ 250 mg/kg×6.9÷22 =78.4mg/kg 不同种类动物间用药剂量换算表 （体表面积/kg体重 比值法）不同种类动物间用药剂量换算表 （体表面积/kg体重 比值法）某利尿 中药250g重大鼠的有效量为250 mg/kg，试计算15kg犬的等效实验剂量？ 犬的等效实验剂量 ＝ 250 mg/kg×0.16÷0.47 =85.1mg/kg null（3）根据文献估计剂量 如有相关的药物，相似的复方，其使用剂量可作为参考。 （4）通过预试估计剂量 null 5．给药容量： 小鼠口服： 0.1ml-0.25ml/10g 最大不超过0.4ml/10g 其他途径不超过0.25ml/10g。 大鼠口服：10ml/kg, 不超过2.0ml/100g 其他途径不超过1.0ml/100g.药物溶液配置药物溶液配置 例：戊巴比妥钠对小鼠腹腔注射的有效麻醉剂量为40mg/kg。现有体重为20g左右的30只小鼠要麻醉。试问要称量多少克的戊巴比妥钠，设计的给药容量为多少，配成怎样浓度 ？药物溶液配置药物溶液配置答：称量戊巴比妥钠30mg，加生理盐水至7.5ml, 使浓度为4mg/ml, 小鼠腹腔注射0.1ml/10g(即10ml/kg)。 或：称量戊巴比妥钠40mg，加生理盐水至10ml, 使浓度为4mg/ml, 小鼠腹腔注射0.1ml/10g(即10ml/kg)。 三、 对照药 三、 对照药 ①合法性：《中国药典》收载或符合部颁标准，或新批准合法生产的药物。 ②可比性：其功用、主治、剂型（给药途径）与受试药相似。特殊情况下，在合理范围内可适当灵活掌握。 ③择优选用：有多种同类药可供选用时，应择优选用公认疗效较好的药物。null 选择的阳性对照药要注意有无批准文号。 如：麝香保心丸：国药准字Z31020068 生产单位： 有效期：必须用有效期内产品。 恬尔心注射用：国药准字（2001）J53号：进口药品注册证号：BX20010122） 四、 实验条件控制 四、 实验条件控制 时辰：动物生理活动有其昼夜节律，如小鼠夜间活动增加，白天活动减少。最好每批实验在每天相同的时间测定。 环境温度：室温稳定、适宜。 饮食：有些实验需对动物禁食。 预适应：3－7天。五、 数据表达和常用统计分析 的 注意事项 软件开发合同注意事项软件销售合同注意事项电梯维保合同注意事项软件销售合同注意事项员工离职注意事项 五、 数据表达和常用统计分析 的注意事项 (一)数据表达 和精确度： 一般应至少有3位有效数字， 标准差至少有2位有效数字， 均数的小数位数应与标准差相同， 出示的结果应包括均数，标准差，例数，P值情况（大于、小于0.05或具体P值） 数字的精确度要与测量仪器所能达到的精确度一致null表5 增液汤、四逆汤对腹主动脉不完全结扎致心室重构大鼠动脉血压的影响与模型组相比,P≤0.01：** P≤0.05：* null (二)极端数据（outliers）的处理 ： 避免差错形成极端数据。 对可疑数据及时复测或复核,及时纠正差错 在x±3s 之外数据，可考虑舍弃。否则不应随便舍弃 -根据《新药（西药）临床药研究指导原则汇编（药学、药理学毒理学）》 null一组数据按正态分布时： x± s 内的数据占68.27% x±1.96s 内的数据占95.0% x±2.58s 内的数据占99.0%null (三)数据统计分析应避免的差错： 1.量反应资料： (1) 两组间实验结果比较常用t检验 （unpaired t test）。T值计算 公式 小学单位换算公式大全免费下载公式下载行测公式大全下载excel公式下载逻辑回归公式下载 （通式）T值计算公式（通式）nullnull 下列情况两组间比较不能使用t检验: ①方差不齐改用校正t值法（即t’检验） 方差齐性检验： ▲如两组的标准差相差一倍以上时，即可判断为方差不齐。 null▲通过计算，当 F>F0.05 时可判断为方差不齐。 (式中S较大者为S1、n1，较小者为S2, n2)。 F0.05也可通过可查“方差齐性检验F值表”获得（注：与“方差检验F值表”不同）。null 如：有两组数据,需统计有无显著差异： 甲组：11.5，14.1，12.3, 10.8，13.0, 13.2, 13.9 12.3, 10.6 x±s：12.41±1.26(n=9) 乙组：10.0, 11.9, 12.0, 12.8, 14.9, 17.4, 19.3, 20.2, 23.1 x±s: 15.73±4.48(n=9) 查无应舍数据。 有无方差不齐：F=4.48×4.48/(1.26×1.26)=12.64 F0.05≈1.2+8/9+14/(9-3)=4.422 F>F0.05 说明两组方差不齐，用t’检验。方差不齐时的校正t’值 计算公式方差不齐时的校正t’值 计算公式null甲组：11.52±1.3 2(n=9) 乙组：15.73±4.48(n=9) 按上式计算 t’=2.142 f’=9.501 f=10时 t0.05=2.228 f= 9时 t0.05=2.262 因此,P>0.05,甲、乙两组间无显著差异。 但以“t”检验，上述两组数据f=9+9-2=16 f=16 时 t0.05=2.120 ，将得出:P<0.05, 两组数据有显著差异的错误结论。 nullnullEXCEL软件T检验过程： 选中fx →T TEST→显示填写框：EXCEL软件T检验过程： 选中fx →T TEST→显示填写框： Array 1 A1:A9 Array 2 B1:B9 Tails 2 Type Array1    为第一个数据集。 Array2    为第二个数据集。 Tails    指示分布曲线的尾数。 如果 tails = 1，函数 TTEST 使用单尾分布。如果 tails = 2，函数 TTEST 使用双尾分布。null Type    为 t 检验的类型。 1：成对检验 2：等方差双样本检验 3：异方差双样本检验 上列 Type 填“2”时 p=0.045993 Type 填“3”时 p=0.57358null ②数据明显偏态时,不能用“t”检验，不用x±s表达。 （改用中位数检验，用非参数统计法。如Mann-Whitney秩和检验，等级和检验，序值法等）。 偏态简便判断法A：如均数两侧例数之差大于2×√n时不用检验，即可判断为明显偏态。 例 1：例 1：一组数据是否正态分布：15.1, 17.9 , 18.2 , 14.3 , 16.5 , 19.7 , 18.6 , 17.4 , 18.1, 40.8, 38.9 分析： x±s＝21.41±9.26， n=11, 均数左边9位、右边2位，均数两侧例数之差为7， 2×√11=6.63, 上述一组数值为偏态，不可用正态检验。null 偏态简便判断法B: 用公式R＝4 × n – D2 ， D为均数两侧例数之差，n为例数， 如R为负，表示数据肯定为偏态。 如上述一组数据: R＝4×11 - 7×7= -5, 表示数据肯定为偏态。 null例2： 一组数据总数为50例，大于均数35例，小于均差15例，是否为正态分布？ R＝4×50－（35－15）× （35－15） ＝200－400＝－200， 此组数据为偏态。 ③如有不定值（如>30，<10等）不用t检验，改为中位数表达，用非参数统计法。如Mann-Whitney秩和检验，等级和检验，序值法等。(2)方差分析（analysis of variance, ANOVA)(2)方差分析（analysis of variance, ANOVA)有时用某药的不同剂量与同一对照组比较，并同时要分析不同剂量作用有无区别时，构成了多组均数的组间比较，此时常使用单因素方差分析。 使用方差分析时，仍然要首先考虑各组样本是否符合正态分布，方差是否齐性，若符合方可进行分析，计算F值，分析总体是否有差异。null表5 增液汤、四逆汤对腹主动脉不完全结扎致心室重构大鼠动脉血压的影响与模型组相比,P≤0.01：** P≤0.05：* 方差分析方差分析 F=组间方差/组内方差 F ≈ 1时说明组间随机误差与组内随机误差接近，研究因素的作用不明显。 F>1, 说明组间变异>组内变异。方差分析即计算F值，并根据自由度，判断组间变异即研究因素引起的可能性有多大（确定P值） 如p<0.05,再进行组间两两比较，此时常用Q检验，(student-newman-keuls test)，也可用t检验。null计量资料统计方法的选择 2. 质反应资料2. 质反应资料 又称计数资料。有时机体对药物的反应只有“是”或“否”两种，如用药后动物死与不死。翻正反射的存在或消失，某种病理症状（如惊厥）出现或不出现等，实验结果可以是百分比或自然比，其显著性检验一般采用卡方检验（22法）。null 有效 无效 总计 有效率 —————————————————— 甲药 35(a) 15(b) 50(a+b) 70% 乙药 25© 25(d) 50(c+d) 50% —————————————————— 总计 60(A+c) 40(b+d) 100(n)null 四格表的自由度恒等于1。 0.05的机率点为3.841 。 X2< 3.841, P>0.05, 两药作用无显著性差异。null样本较小（两组总数<40例）或数据中有0或1时：不用卡方检验，而用精确概率法或简化直接概率法。 例：使用甲药16例中5例出现不良反应，使用乙药16例无不良反应，两药有无区别？ nullnull 上式 p= 16!16! 5!27! /5!0!11!16!32! =0.0217 结论：乙药的不良反应小于甲药，两者有显著差异。 注：上式的P值分布为分布中的单侧概率，因而，双侧检验时以P<0.025为差异有显著统计意义。null注：本例如用卡方检验 X2＝(80-0.5x32)2x32/(5x27x16x16) =3.793, X2 < 3.841, P>0.05 结论出现差错。 null 3.等级资料: 可以认为是一种有序的计量资料，它包括： 时反应资料，如潜伏期，凝血时间。 病变程度及临床疗效按等级分组的资料，如－、＋、Ⅱ、Ⅲ或痊愈、显效、好转、无效等。 两端确切数据不明的分组资料，如血清滴度>1：40，1：80，1：60，<1：320等。 这些资料不宜用均数及标准差作常规的统计分析，可用等比差值法，等级序值法，秩和法，及Ridit法等非参数统计分析。null (四)常用统计软件包 SAS（statistics analysis system）由美国SAS软件有限公司研制并发行已有30多年的历史，该软件采用窗口菜单或命令方法或交互方式选择各种统计方法，适合统计专业人员使用。 SPSS(statistical package for the social seience),version13,由美国SPSS公司研制。nullBMDP(biomedical computer programs)由美国BMDP统计软机公司研制，由多个功能模块组成，采用交互式，图形界面设计操作较直观，方便、较适宜于医学统计。 新药开发权威统计软件Drug and statistics 使用统计软件的注意事项使用统计软件的注意事项1.选择合适的方法 计量资料如符合正态分布，但方差不齐时可通过数据转换，如取对数后再进行方差分析。 2. 论文中除说明采用的软件名称外，需说明采用的方法。 null (五)结论: 经过统计分析，要有结论，要注意的是: ①判断结果不能绝对化：例如，判断两组差别有无显著性时，一般按P≤0.05而拒绝“检验假设”。P<0.05的意思是说，仅仅由于抽样误差造成如此大的差别的概率根小（P<0.05）而已，并不是说“检验假设”绝对不能成立，当然P越小越有理由拒绝“检验假设”。null ②与专业知识相结合：指的是即使P<0.05两者有显著差异，还要考虑专业知识方面有无意义。如降血压药，用后血压下降5mmHg，P<0.05，但是这个药还是没什么应用价值。又如抗肿瘤药，用药组较对照组对小鼠实体瘤重抑制率为20％，P<0.05, 但从专业角度来看，仅对瘤重增长抑制<30%并无明显实用价值。