4食品中番泻苷A、番泻苷B和大黄素甲醚的测定

10附件2食品中番泻苜A、番泻苜B和大黄素甲瞇的测定BJS201917范围本方法规左了食品(含保健食品)中番泻昔A、番泻昔B和大黄素甲毬含量的高效液相色谱-串联质谱测泄方法。本方法适用于饮料、代用茶等食品及片剂、胶囊、颗粒剂、口服液等剂型的保健食品中番泻昔A、番泻昔B和大黄素甲瞇含量的测迫。原理试样经甲醇-甲酸彼溶液(9:1)超声提取、离心、过滤后，滤液供髙效液相色谱-质谱联用仪测泄，外标法泄量。试剂和材料注：水为GB/T6682 规定 关于下班后关闭电源的规定党章中关于入党时间的规定公务员考核规定下载规定办法文件下载宁波关于闷顶的规定 的一级水。3」试剂3.1.1甲酸(HCOOH)：色谱纯。3.1.2甲醇(CH3OH)：色谱纯。3.1.3甲酸鞍(CH5NO2)：色谱纯。3.2试剂配制3.2.1甲酸溶液(0.1%)；取甲酸(3.1.1)l.OmL用水稀释至lOOOmL。3.2.2甲酸彼溶液(2mmoL/L)：称取甲酸彼(3.1.3)0.13g(精确至O.Olg),溶于水并稀释至1L。3.2.3甲醇-甲酸彼溶液(9:1)：取甲醇(3.1.2)900mL,加入1OOmL甲酸彼溶液(3.2.2),混匀。3.3标准物质番泻昔A、番泻昔B和大黄素甲瞇的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见附录A 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf A.1。番泻昔B和番泻昔A的纯度均＞95.0%,大黄素甲陋纯度＞99.0%o3.4标准溶液配制3.4.1番泻昔A标准储备液(4Op0mL)：准确称取番泻昔A(3.3)10.0mg(精确至0.000lg),置250mLS瓶中，加入甲醇•甲酸鞍溶液(9:1)(3.2.3)200mL,超声(409)使溶解,冷却至室温，用甲醇-甲酸彼溶液定容至刻度，摇匀，制成浓度为40pg/mL标准储备液，-20°C保存，保存期3个月。3.4.2番泻昔B标准储备液(40ng/mL)：准确称取番泻昔B(3.3)lO.Omg(精确至O.OOOlg),置250mL量瓶中,加入甲醇■甲酸钱溶液(9:1)(3.2.3)200mL,使其溶解,用甲醇-甲酸鞍溶液泄容至刻度，摇匀，制成浓度为40Mg/niL标准储备液，-20°C保存，保存期3个月。3.4.3大黃素甲庭标准储备液(40诸mL)：准确称取大黄素甲碰(3.3)lO.Omg(精确至0.000lg),置250mL量瓶中，加入甲醇(3.1.2)200mL,超声(40*0使溶解，冷却至室温,用甲醇定容至刻度，摇匀，制成浓度为40唧mL标准储备液，-20°C保存，保存期3个月。3.4.4混合标准中间液(lOpginL)：分别准确吸取番泻昔A、番泻昔B和大黄素甲毬标准储备液(40加mL)各2.5n】L,用甲醇-甲酸彼溶液＜9:1)(3.2.3)稀释至10mL,摇匀，制成1OpgiiiL的混合标准中间液，-20°C保存，保存期1个月。3.4.5混合标准系列工作液的制备：分别准确吸取混合标准中间液(10pg/niL)(3.4.4)适量，用甲醇-甲酸彼溶液(9:1)(3.2.3)稀释，摇匀，作为系列混合标准工作溶液，浓度依次为各化合物0.25pg/mL、0.5pg/mL、1Opg/mL＞2.0pg,/mL、4.0pg/mL、&Opg/rnL，临用新制或依仪器响应情况配制适当浓度的混合标准工作溶液。或根据需要采用空白基质提取液(5.1.3),配制适当浓度的基质混合标准工作溶液。4仪器和设备4.1髙效液相色谱-质谱联用仪，配有电喷雾（ESI）离子源。4.2天平：感量分别为0.0000lg和O.OOOlg。4.3超声波涓洗器。4.4涡旋混匀器。4.5离心机：转速＞3000r/mino5分析步骤5.1试样制备5.1.1固态试样或半固态试样取适量固态试样（代用茶及片剂、胶囊内容物、颗粒剂等保健食品）混匀，研细，或取适量半固态试样（软胶囊）内容物混匀，准确称取l.Og（精确至0.001g）,置lOOmLfi：瓶中，加入甲醇-甲酸鞍溶液（9:1）（3.2.3）80mL,涡旋混匀1min,超声（40*0提取60min,冷却至室温，用甲醇■甲酸钱溶液（9:1）定容至刻度,摇匀,以3000r/min离心5min,取适量上淸液过0.22pm有机滤膜，取续滤液，待测。5.1.2液态试样取适量试样（饮料、口服液）混匀，准确量取l.OmL,置100mL量瓶中，加入甲醇-甲酸鞍溶液（9:1）（3.2.3）80mL,涡旋混匀lmin,超声（40*0提取60min,冷却至室温,定容至刻度，摇匀，以3OOOr/min离心5min,取适量上淸液过0.22pm有机滤膜，取续滤液，待测。5.1.3空白基质提取液称取空白试样适星，与试样同法处理，制得空白基质提取液。5.1.4空白溶液不加试样，与试样同法处理，制得空白溶液。5.2仪器参考条件5.2.1色谱参考条件a）色谱柱：Cis（2.1x50mm,1.8pm）,或性能相当者。b）流动相:A相为甲醇（3.1.2）,B相为0.1%甲酸溶液（3.2.1）,梯度洗脱程序见表1。c）流速：0.2mL/min。d）柱温：40°C«e）进样量:2叫表1梯度洗脱程序表梯度时间/min流动相A/%流动相B/%025751025751560401890102590102625752825755.2.2质谱条件a）离子源：电喷雾离子源（ESI源）。b）扫描方式：负离子扫描（ESI-）。c）检测方式：多反应离子监测（MRM）od）干燥气、雾化气、加热气等均为髙纯氮气，使用前应调肖相应参数使质谱灵敏度达到检测要求，干燥气流速、加热气流速、雾化气流速、接口温度、脱溶剂管温度、加热器温度、碰撞能量等参数应优化至最佳灵敏度，监测离子对和圧量离子对等信息详见附录Bo5.3定性测定按照超高效液相色谱•三重四极杆串联质谱条件测左试样和标准工作溶液， 记录 混凝土 养护记录下载土方回填监理旁站记录免费下载集备记录下载集备记录下载集备记录下载 试样和标准溶液中各化合物的色谱保留时间，当试样中检出与某标准品色谱U金保留时间一致的色谱峰（变化范用在±2.5%之内）,并且试样色谱图中所选择的监测离子对的相对丰度比与相当浓度标准溶液的离子相对丰度比（k）的偏差不超过表2规定的范弗I,可以确龙试样中检出相应化合物。表2定性确定时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度（％）k>50%50沁>20%20沁>10%k<10%允许的最大偏差（％）±20±25±30±505.4定量测定5.4.1标准曲线的制作将混合标准工作溶液（3.4.5）分别按仪器参考条件（5.2）进行测泄，得到相应的标准溶液的色谱蚯而积。以混合标准工作溶液的浓度为横坐标，以定量离子的色谱峰的峰而积为纵坐标,绘制标准曲线。5.4.2试样溶液的测定将试样溶液（5.1.1-5.1.2）按仪器参考条件（5.2）进行测左，得到样品溶液中对应组分的色谱峰而积。根据标准曲线得到待测液中组分的浓度，平行测左次数不少于两次。对照品色谱图参见附录C。5.4.3空白溶液的测定空白溶液（5.1.4）同试样溶液测泄步骤操作。6结果计算将髙效液相色谱-质谱联用仪测得浓度代入下式计算含量:(1)CXrX1Q0°x^mx1000式中：X—试样中各待测物的含量，单位为亳克每千克（mg/kg或mg/L）：c—从标准曲线中读出的各待测物的浓度，单位为微克每亳升（pg/mL）；V-样液最终泄容体积，单位为亳升（mL）：m—试样的质量或体积，单位为克(g或mL)；K—稀释倍数。计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。7精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的20%。8其他当称样量为lg(精确至0.00lg)或ImL,定容体积为100mL时，番泻昔A的检出限为0.050nig/kg(mg/L),定量限为0.200mg/kg(mg/L)。番泻昔B的检出限为0.050mg/kg(mg/L),怎量限为0.15mg/kg(mg/L)o大黄素甲瞇的检出限为0.089mg/kg(mg/L),宦呈:限0.356mg/kg(mg/L)o空白试验应无干扰。附录A化合物相关信息表A.1番泻昔A、番泻昔B、大黄素甲醴标准样品的中、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量中文名称英文名称CAS登录号分子式相对分子量番泻昔ASennosideA81-27-6C42H38O20862.75番泻昔BSennosideB128-57-4C^zII.^Ozo862.75大黄素甲醸Physcion521-61-9CJ6H12O5284.27附录B质谱参考条件质谱参考条件a）离子源：电喷雾离子源（ESI）：b）检测方式：多反应监测（MRM）:c）扫描方式：负离子扫描（ESI）；d）雾化气流速：3.0L/min：e）加热气流速：lO.OL/min：f）干燥气流速：10.0L/min：g）喷雾电压：4.5kV；h）接口温度:3OO*C：i）脱溶剂管温度：250°C；j）加热器温度：400°C；k）苴他质谱参数见表表B」化合物定性、定呈离子和质谱分析参数序号化合物需称电离方式母离子（m/z）子离子（m/z）碰撞能量（V）保留时间（min）1番泻昔BESI-861.4386.2*699.2422914.742番泻苜AESI-861.4386.2*699.2422915.873大黄素甲瞇ESI-2833240.1*183.2255321.09•定屋离子。附录c标准色谱图|：15）12腳13\11\1400000：300000；200000；10000。5.010.015.020.025.0min图C」番泻昔B、番泻昔A、大黄素甲酬标准物质的总离子流色谱图（1・番泻昔珀2■番泻昔A；3■大黄素甲醸以下同）1：861.4b>386.20（-）CE：42.012300000-200000-100000-0-JU5.010.015.020.025.0min图C.2番泻昔B、番泻昔A标准物质的提取定呈离子色谱图图C.3番泻昔B、番泻昔A标准物质的提取定性离子色谱图150000-100000-50000-5.010.015.020.025.0min图C4大黄素甲瞇标准物质的提取定呈离子色谱图7500p：283.30>183.20(-)Ct：53.05000-2500-0-I5.010.015.020.025.0min图C.5大黄素甲瞇标准物质的提取定性离子色谱图本方法负责起草单位：山东省食品药品检验研究院。方法的参与单位：中国食品药品检左研究院、山四省食品药品检验所、福建省食品药品质量检验研究院、河北省药品检验研究院、辽宁省食品检验检测院。主要起草人为：李启艳、刁飞燕、曹进、卢端萍、高广慧、董培智。