某些因素对离体蛙心活动的影响【目的要求】1、学习斯氏离体蛙心灌流法。2、观察Na＋、K＋、Ca2＋及肾上腺素、乙酰胆碱等对离体心脏活动的影响。【基本原理】心脏的正常节律性活动需要一个适宜的内环境（如Na＋，K＋，Ca2＋等的浓度及比例、pH值和温度），而内环境的变化则直接影响到心脏的正常节律性活动。在体心脏还受交感神经和迷走神经的双重支配，交感神经末梢释放去甲肾上腺素，使心肌收缩力加强，传导速度加快，心率加快；迷走神经末梢释放乙酰胆碱，使心肌收缩力减弱，心肌传导速度减慢，心率减慢。将失去神经支配的离体心脏保持于适宜的理化环境中（如任氏液），在一定时间内仍能产生自动节律性兴奋和收缩。而改变任氏液的组成成分，离体心脏的活动就会受到影响。因此可用人工灌流的方法，研究心胜活动的规律及特点；还可观察灌流液成分的改变对离体心脏活动的影响。【动物、器材与试剂】【方法与步骤】1、离体蛙心的制备（斯氏蛙心插管法）先用蛙心夹夹住少许心尖部肌肉(不要夹过多，以免因夹破心室而漏液)。2、插好离体心脏的套管固定在支架上，再将蛙心夹上的系线与张力传感器相连。注：勿便灌流液滴到传感器上。调节记录仪上的收缩曲线的幅度适中。3、实验观察（图11）(1)记录正常心搏曲线。(2)改用0.65%NaCl溶液灌流，并作好加药标记，观察心搏变化。待曲线出现明显变化时，立即吸去套管中的灌流液，同时做好冲洗标记，并用新鲜任氏液清洗2－3次，待心搏恢复正常，注意：换液时切勿碰套管，以免影响描记曲线的基线，同时保持灌流液面一致(以下同)。任氏液配制方法见下
表
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1000ml水2.0gGlu0.01gNaH2PO40~2gNaHCO30.12gCaCl20.14gKCl6.5gNaCl（其中glu可加可不加，加的话可以多保存几天）(3)向套管内加1－2滴3%CaCl2溶液（较细的套管需少加）溶液，作好加药记号，观察心搏曲线的频率及振幅变化。当曲线出现明显变化时，应立即吸去套管中的灌流液，并做好冲洗标记，迅速用新鲜任氏液清洗2－3次，待心搏恢复正常。(4)同法向套管内加入1－2滴1%KCl溶液，记录心搏曲线的变化。当心搏曲线变化时，同法更换灌流液，待心搏恢复正常。(5)同法记录套管中加入1－2滴肾上腺素溶液(1/10，000)后心搏曲线的变化。(7)同法记录套管中加入1－2滴乙酰胆碱溶液(1/100，000)后心搏曲线的变化。(8)酸碱的影响：加3%乳酸1～2滴，待效应明显后，再加1滴2.5%NaHCO3，观察曲线的变化。【注意事项】1、制备离体心脏标本时，勿伤及静脉窦。2、蛙心夹应在心室舒张期一次性夹住心尖，避免因夹伤心脏而导致漏液。3、每一观察项目都应先描记一段正常曲线，然后再加药并记录其效应。加药时应在心跳曲线上予以标记，以便观察
分析
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。4、各种滴管应分开，不可混用。5、在实验过程中，插管内灌流液面高度应保持恒定；仪器的各种
参数
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一经调好，应不再变动。6、给药后若效果不明显，可再适量滴加，并密切注意药物剂量添加后的实验结果。给药量必须适度，加药出现变化后，就应立即更换任氏液，否则会造成不可挽回的后果，尤其是K＋稍有过量，即可导致难以恢复的心脏停跳。7、标本制备好后，若心脏功能状态不好（不搏动），可向插管内滴加1～2滴3%CaCl2或1：10，000肾上腺素，以促进（起动）心脏搏动。在实验程序安排上也可考虑促进和抑制心脏搏动的药物交换使用。8、谨防灌流液沿丝线流入张力传感器内而损坏其电子元件。【思考题】1、用实验说明内环境相对恒定的重要意义。2、分析有的蛙心标本套管内液面升降不明显的原因并提出相应的对策。3、实验过程中套管内液面为什么每次都应保持一定的高度？4、高Ca2+任氏液与肾上腺素引起的心脏活动变化有何不同？为什么？
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