尸体残骸mtDNA序列测定异常1例

尸体残骸mtDNA序列测定异常1例 中l移浩苗警箍穗CHINJFORENSICMEt)2008年第23卷第5期 尸体残骸mtDNA序列测定异常1例 汪显着,曾发明,何辉.,李貌,何玮,翟滇,程宝文 (1.华宁县公安局,云南华宁652800;2.云南省公安厅,云南昆明650021; 3.玉溪市公安局交警支队,云南玉溪653100) 【关键词】法医物证学;线粒体DNA;高变区;序列分析;,广I体残骸 【文献标识码】B【文章编号】1001—5728(2008)05—0359—02 本文报道1例白骨化尸体残骸mtDNA两个高变 区域(hypervariableregionI/II,HVRUII)中HVRII 检出异质性. l案例资料 1.1 样本 保单样本pdf木马病毒样本下载上虞风机样本下载直线导轨样本下载电脑病毒样本下载 及DNA提取 下水道中白骨化尸骸1具(包括股骨,颅骨,毛 发)和疑为死者母亲的血痕,要求进行尸源认定.股 骨,颅骨,毛发参照文献?.的方法,血痕采用有机法提 取DNA. 1.2扩增 巢式扩增和序列分析参照文献的方法;引物序 列参照Anderson的剑桥序列用Primer3软件自行 设计,上海生工公司合成. 1.2.1长片段扩增PCR反应在PE9600热循环仪 上进行.采用l51反应体系,包括含镁离子10× PCR缓冲液1.5Ixl,5mmol/LdNTP1l,lp~mol/I正反 向引物1l(分别用L15996/H16401和L29/H5992 对引物),0.21xl(5U/I~1)TaqDNA聚合酶(宝生物公 【基金项目】国家自然科学基金资助项日(30460057) 【作者简介】汗显着(1969一),男,云南华宁人,学士,主要从事 法医现场勘查工作. 【通讯作者】程宝文(1968一),男,云南_【王溪人,主任法医师,博 :仁,主要从事法医物证学,群体遗传学研究. 司),0.5IxlDNA(50ng/Ix1),余量用水补足.PCR反 应条件为:95.C变性2min,94.C变性20s,58.C退火 20s,72.C延伸30s,30个循环;最后72.C延{~05min. 1.2.2短片段巢式扩增以长片段扩增产物作模 板,用L16081/H16328和LI21/H408引物对分别扩 增短片段,扩增体系及扩增条件同上.纯化用Multi. Screen96一WellFiltrationPlates板,各孑L加5%的G.50 溶液3001xl参见文献. 1.3测序反应及统计分析 所有产物均使用ABI3100DNA基因分析仪进行 测序.反应休系,条件及纯化按ABIPRISMBigDyeV 3.1试剂盒的说明进行.用DNASTAR比对软件将 各区域序列分别与校正剑桥序列比较』,发现并统计 变异点. I.4结果 股骨,颅骨和疑为死者母亲血样mtDNA在HVRI 区域序列相同,均有1个16223C—T的多态,而在 HVRII区域的序列则不相同,其中疑为死者母亲血样 HVRII序列与剑桥标准序列相同;股骨,颅骨HVRII 则均有l98C—T,2l0A—G的多态.进一步 检测 工程第三方检测合同工程防雷检测合同植筋拉拔检测方案传感器技术课后答案检测机构通用要求培训 尸体 毛发HVRII区域序列,结果与疑为母亲血样相同. 2讨论 L15996/H16401,L29/H599引物对常用于检测 在西侧墙面擦蹭停留一段时间.?用右手捡起石块 多次砸击头部.?沿渠内走到东侧瘀泥清污口处. ?爬上瘀泥清污口处铁栏杆内侧并沿栏杆向内行走 至水泥柱.?拿起电缆线欲自缢,从栏杆上不慎坠落 到清污口台阶处.?随手捡起身边碎玻璃切颈. 破案证实,伤者意图自杀,用头部撞墙虽然造成 出血但未能奏效,其在现场行走并多次停留,使血迹 滴落在经过处,其间曾检起石块敲击头部,仍未达到 目的后意图自缢,并因不慎而坠落,最后采用切颈的 方式,而终未能达到自杀的目的.其灰色棉衣右侧衣 袖远端检出有细小喷溅血迹,应系其以右手握石块砸 击头部时血液喷溅形成的证明. 【参考文献】 [1]闵建雄.命案现场霞建概论[M].北京:中国人民公安大 学出版社,2006:7. (收稿日期:2007—07—04;修回日期:2007—09—10) ? 359? 中国浊谚謦爨穗CHINdFORENSICMED2008年第23卷第5期 血液,组织样本mtDNA高变区多态,但直接扩增和检 测白骨化尸骸mtDNA结果均较差.而本例用 L15996/H16401和I29/H599作第一次扩增后,再用 L16081/H16328和L121/H408作较小片段巢式扩 增,结果尸骸股骨,颅骨与母亲血样HVRI序列相同 而HVRII序列不同,其中股骨,颅骨HVRII出现了 198C—T,210A.G两个多态.分析可能的原因为:尸骸 长期浸泡于下水道中,腐败产生大量亚硝酸,羟氨,甲 磺酸乙酯等化学物质.胞嘧啶(C)上NH,因亚硝酸 等作用产生脱氨反应,使氨基变为酮基并生成为尿密 啶(u).当此类碱基受损的DNA一次扩增时,与U 配对的是腺嘌呤(A),二次扩增时,A则与胸腺嘧啶 (T)配对,而引发C—T假多态的发生.此外,除 G,A,C和T4种标准碱基外,碱基相似物如5一溴尿 嘧啶,2一氨基嘌呤会随着模板的提取而进入PCR反 应,并与互补链上的碱基生成氢键而配对且能抵抗 DNA聚合酶3’’外切酶活性的校对作用.这种替 代在复制子代时也可引发配对性质的改变,造成A— G碱基替代突变.针对该残骸股骨,颅骨HVRII序列 与母亲血样不同,而毛发远离腐败严重的躯体部位, 故进一步检测毛发HVRII,结果其序列与母亲血样完 全相同,判定残骸股骨mtDNA出现了异质性;并推测 该残骸HVRII区域198C—T可能因C脱氨基后配对 性质改变而引起扩增中碱基转换错误,而210A.G则 可能由于碱基相似物渗人造成A—G碱基的替代. 针对mtDNA异质性的问题,在用白骨化尸骸样本 进行个体识别或母系亲权鉴定时,除常规提取长骨,颅 骨外,最好一并提取毛发,指甲等检材.当尸骸样本与 比对样本有1,2个碱基差异时,要结合尸体所处环境 的酸碱度,污染因素分析所得测序结果.此外,对当地 正常人群mtDNA,特别是高变区多态分布情况的调查, 可以提供参考数据J.实验室及检验人员的规范化管 理以及在实验中设立阴阳性对照,也需要注意. 【参考文献】 [1]张纯斌,周静,倪锦堂,等.用PCR测序法对人类线粒体 DNA多态研究[J].中国法医学杂志,1995,10(3):129 — 131. [2]VigilantL,StonekingM,HarpendingH,eta1.African populationsandtheevolutionofhumanmitochondrialDNA [J].Science,1991,253:1503—1507. [3]AndersonS,BankierAT,BarrellBG,eta1.Sequenceand organizationofthehumanmitochondrialgenome[J]. Nature,1981,290:457—465. [4]程宝文,曾发明,路帆,等.中国蒙古族群体mtDNA测序 的聚类分析及其法医学意义[J].中国法医学杂志, 2007,22(2):81—84. [5]PaaboS,PoinerH,SerreD,eta1.Geneticanalysesfrom ancientDNA[J].AnnuRevGenet,2004,38:645—679. [6]孙乃恩主编.分子遗传学[M].南京:南京大学出版社, 1990:175—177. [7]KongQP,YaoYG,SunC,eta1.PhylogenyofeastAsian mitochondrialDNAlineagesinferredfromcomplete sequences[J].AmJHumGenet,2003,73:671—676. (收稿日期:2007—07—26;修回日期:2007—09—24) 第八次全国法医学术交流会征文通知 中国法医学会 计划 项目进度计划表范例计划下载计划下载计划下载课程教学计划下载 于2009年下半年召开”第八次全国法医学术交流会”,这将是新一届学会举行的首次全国性学术交流活 动.会议交流内容涵盖法医学各学科以及其它相关或交叉学科.征文要求如下: 一 ,征文内容 在法医学及相关学科实践中的科研课题研究,新技术应用,典型案例,办案经验,标准化建设,教学经验,新产品研发等工作中 的成果,经验,体会和建议.本次征文拟评选出100篇优秀 论文 政研论文下载论文大学下载论文大学下载关于长拳的论文浙大论文封面下载 公开出版发行,其他录用论文编印会议论文集. 二,征文要求 1.论文所反映的信息和学术成果须是2005,2008年完成,被收录进公开发行文集的论文应尚未公开发 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf . 2.论文请勿涉及保密内容.请作者确保论文内容的真实性和客观性,文责自负. 3.超过2000字的论文,请附不超过800字的论文摘要. 4.论文投送截止日期为2O09年4月1日.每篇论文缴纳3o元审稿费,超过2500字缴纳50元(可多人统一缴纳). 5.文稿请用word录入排版,A4通栏版幅,字数不超过5000字. 6.文章结构:论文应依次包含论文题目,作者姓名,作者单位及通讯地址,摘要,关键词(3,5条),正文,参考文献,作者简介等 (具体格式请参考刊登在《中国法医学杂志》每年第一期上的”投稿须知”).论文应提供必要的照片或图片. 三,论文投送方式 论文请用电子邮件附件形式发送至中国法医学会,如附带照片可单独作为附件发送. 学会邮箱地址:fyxh6626@sina.corn联系人:黄力力电话:010—63495531,010—66269520 审稿费邮寄地址:北京市3817信箱收款人:中国法医学会邮政编码:100038 ? 360?