还原糖的测定方法 还原糖和总糖的测定
还原糖和总糖的测定3,5-二硝基水杨酸比色法
一、目的
掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计 的使用。
二、原理
还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量(还原糖以葡萄糖含量计)。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关
1
系，利用分光光度计，在540nm 波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。
三、实验材料、主要仪器和试剂
1( 实验材料
小麦面粉;精密pH 试纸。
2( 主要仪器
(1)具塞玻璃刻度试管:20mL×11
(2)大离心管:50mL×2
(3)烧杯:100mL×1
(4)三角瓶:100mL×1
(5)容量瓶:100mL×3
(6)刻度吸管:1mL×1;2mL×2;10mL×1
(7)恒温水浴锅
(8)沸水浴
(9)离心机
(10)扭力天平
(11)分光光度计
3( 试剂
(1)1mg/mL 葡萄糖标准液
2
准确称取80?烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL 容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4?冰箱中保存备用。
(2)3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂
将6.3g DNS 和262mL 2M NaOH 溶液，加到500mL 含有185g 酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g 结晶酚和5g 亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中备用。
(3)碘-碘化钾溶液:称取5g 碘和10g 碘化钾，溶于100mL 蒸馏水中。
(4)酚酞指示剂:称取0.1g 酚酞，溶于250mL 70%乙醇中。
(5)6M HCl 和6M NaOH 各100mL。
四、操作步骤
1( 制作葡萄糖标准曲线
取7 支20mL 具塞刻度试管编号，按
表
关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf
1 分别加入浓度为1mg/mL 的葡萄糖标准液、蒸馏水和3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂，配成不同葡萄糖含量的反应液。
表1 葡萄糖标准曲线制作
将各管摇匀，在沸水浴中准确加热5min，取出，冷却至室温，用蒸馏水定容至20mL，加塞后颠倒混匀，在分光光度
3
计上进行比色。调波长540nm，用0 号管调零点，测出1~6号管的光密度值。以光密度值为纵坐标，葡萄糖含量(mg)为横坐标，在坐标纸上绘出标准曲线。
实验仪器大全 实验试剂大全
2( 样品中还原糖和总糖的测定
(1)还原糖的提取
准确称取3.00g 食用面粉，放入100mL 烧杯中，先用少量蒸馏水调成糊状，然后加入50mL 蒸馏水，搅匀，置于50?恒温水浴中保温20min，使还原糖浸出。将浸出液(含沉淀)转移到50mL 离心管中，于4 000r/min 下离心5min，沉淀可用20mL 蒸馏水洗一次，再离心，将二次离心的上清液收集在100mL 容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，混匀，作为还原糖待测液。
(2)总糖的水解和提取
准确称取1.00g 食用面粉，放入100mL 三角瓶中，加15mL 蒸馏水及10mL 6M HCl，置沸水浴中加热水解30min(水解是否完全可用碘-碘化钾溶液检查)。待三角瓶中的水解液冷却后，加入1 滴酚酞指示剂，用6mol/LNaOH 中和至微红色，用蒸馏水定容在100mL容量瓶中，混匀。将定容后的水解液过滤，取滤液10mL，移入另一100mL 容量瓶中定
4
容，混匀，作为总糖待测液。
(3)显色和比色
取4 支20mL 具塞刻度试管，编号，按表2 所示分别加入待测液和显色剂，空白调零可使用制作标准曲线的0 号管。加热、定容和比色等其余操作与制作标准曲线相同。
五、结果与计算:
计算出7、8 号管光密度值的平均值和9、10 管光密度值的平均值，在标准曲线上分别查出相应的还原糖毫克数，按下式计算出样品中还原糖和总糖的百分含量。
六、附 注
1( 离心时对称位置的离心管必须配平。
2( 标准曲线制作与样品测定应同时进行显色，并使用同一空白调零点和比色。
3( 面粉中还原糖含量较少，计算总糖时可将其合并入多糖一起考虑。
七、思考题
1(3,5-二硝基水杨酸比色法是如何对总糖进行测定的?
2(如何正确绘制和使用标准曲线?
参考
答案
八年级地理上册填图题岩土工程勘察试题省略号的作用及举例应急救援安全知识车间5s试题及答案
1(植物中的总糖包括单糖、寡糖和多糖，单糖是还原糖，
5
可直接测定。而没有还原性的寡糖和多糖，需用高浓度的酸在加热的条件下水解成有还原性的单糖，还原糖在碱性条件下加
热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成一定比例关系，利用分光光度计，在540nm 波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，可求出样品中还原糖和总糖的含量。由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需要加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。
2(标准曲线应在坐标纸上绘制，横坐标轴距坐标纸底边1.5~2cm，标示出刻度和葡萄糖的毫克数;纵坐标轴距坐标纸左边1.5~2cm，标示刻度和光密度值;曲线为过原点的直线，测定点均匀分布在直线的两侧;标准曲线只能在测试条件完全相同的情况下，用于确定样品中的物质含量。对于重复的测定，应取吸光度的平均值查标准曲线;测定数据不应记在标准曲线上。
百度搜索“就爱阅读”,专业资料,生活学习,尽在就爱阅读网92to.com,您的在线图书馆
6
7
浙公网安备 33021202002483