实验二 MS培养基的配制与灭菌实验二 MS培养基的配制与灭菌
一、实验目的
学会配置MS+I mg/L2.4-D+蔗糖 3% + 琼脂 0.8% 二、实验原理
2,4-D(二氯苯氧乙酸)属生长素的范畴。在自然界中，生长素可影响到茎和节间的伸长 向性 顶端优势 叶片脱落和生根等现象，在组织培养中，生长素被用于诱导细胞的分裂和根的分化，其中2,4-D(二氯苯氧乙酸)被广泛用于愈伤组织的诱导。 三、实验材料
1.实验器械:灭菌锅， 电磁炉， 三角瓶量筒，酒精灯，镊子， 解剖刀， 超净工作台， pH， 试纸， 电子天平等。 2.实验药品:MS母...
实验二 MS培养基的配制与灭菌
一、实验目的
学会配置MS+I mg/L2.4-D+蔗糖 3% + 琼脂 0.8% 二、实验原理
2,4-D(二氯苯氧乙酸)属生长素的范畴。在自然界中，生长素可影响到茎和节间的伸长 向性 顶端优势 叶片脱落和生根等现象，在组织培养中，生长素被用于诱导细胞的分裂和根的分化，其中2,4-D(二氯苯氧乙酸)被广泛用于愈伤组织的诱导。 三、实验材料
1.实验器械:灭菌锅， 电磁炉， 三角瓶量筒，酒精灯，镊子， 解剖刀， 超净工作台， pH， 试纸， 电子天平等。 2.实验药品:MS母液， 蒸馏水， 2,4-D， 升汞， 乙醇， 无菌水等。
四、(一)配置培养基(1L MS培养基的配置)
1.瓶塞制作
2.盖纸的准备及配置100mg/L(100ml)的2,4-D(二氯苯氧乙酸) 3.称取8g/L(0.8%)的琼脂置于不锈钢的锅中，加蒸馏水直到培养基最终容积的3/4，在电炉上加热溶解。待琼脂溶解后再加30/L(3%)的蔗糖，用玻璃棒搅拌均匀。
4.分别加入一定量的各种贮备液，包括生长调节物质和其他的特殊补加物。
5.加蒸馏水定容。
6.分均匀后，用1.0或0.1mol/LNaOH或HCl调节培养基的pH (5.4~7.0)。
7.把培养基分装到所选用的培养容器中 (约25~30mL)。 8.用包在纱布中的棉塞(它不仅能阻止微生物污染，而且还可以使气体自由交换)，然后再用牛皮纸套在棉塞上(防止棉塞在高温灭菌时吸湿)。
(二) 培养基的灭菌
1.把已经装入了培养基的培养容器置于灭菌锅中进行灭菌(在灭菌之前，必须注意水至吃水线，防止烧干，接通电源升温后，首
2先要排净锅内的冷空气，然后在121? 1.06kg/cm或者0.105MPa的条件下灭菌15至20min)。
2.灭菌结束后，切断电源，让锅内气体自然下降，待压力表指针回到零后，再打开放气阀，排除剩余蒸汽，打开锅盖取出培养基(过早开阀放气会造成锅内气压骤降，引起培养基沸腾外溢)。 (三) 最后清理实验室。
实验项目注意事项:
1.注意琼脂和蔗糖的称量。
2.注意2,4-D(二氯苯氧乙酸)配制与量取。
3.注意瓶塞的制作与包扎(相对于瓶口不应该过大或过松)。 4.注意灭菌锅里的水是否至吃水线。
5.灭菌后应该切断电源，让锅内气体自然下降，待压力表指针回到零后，再打开放气阀，排除剩余蒸汽，打开锅盖取出培养基(因
为过早开阀放气会造成锅内气压骤降，引起培养基沸腾外溢)。 6.配置MS培养基时应该注意调节pH (5.4~7.0) 因为过酸培养基不易凝固 过碱培养基会变硬。
7.配置溶液时应注意定容到位。
8.生长素相对含量不宜过高以免刺激细胞产生乙烯。
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