熊猴（Macaca assamensis）精子的电镜观察

熊猴（Macaca assamensis）精子的电镜观察 熊猴(Macaca assamensis)精子的电镜观察 第25卷第3期 1994年7月 解剖 ACTAANATOMICASlNlCA V01.25,No.3 July1994 猴(ca 电 ca 镜 as 观 sa察men浦子韵 商恩缘季维智邹如金杨上川陈建春普晓春 (中国科学院昆明动物研究所,昆明05O223)&.于2 A搪?用光镜,扫描电镜及透射电镜首次研究了熊猴精子的结构.在光镜及电镜下,熊猴精子 头的形状,顶体大小,核的结构等,与猕猴属其他种类相似.精子总长(79.40~0.11岬1)及各部 分的长度与藏酋猴相近,而与猕猴属其他种类存在明显差异(P<0.01).本文的结果 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明,熊猴可 瞻在种系进化过程中与藏酋猴关系最近.而与猕猴属中其他种分离较早. 关?调精子电镜熊猴?’—… 在灵长类动物进化研究中,物种的形态学,生物化学和分子生物学特征作为常规指标已 被广泛应用.精子结构特征亦是衡量物种间亲缘关系远近的一个重要指标.由于条件和材料 的限制,迄今为止,世界现存的200多种灵长类中仅有约15的种类,如狐猴,婴猴,懒猴, 狨猴,长尾猴,恒河猴,藏酋猴,狒狒,长臂猿,大猩猩,黑猩猩以及人类的精子作过较为详 细的研究[1_’].熊猴是国家一级保护动物,有关其精子的微细结构至今未见报道.本研究用光 学显微镜,扫描电镜和透射电镜法,对熊猴精子的光镜结构和超微结构进行了观察,为灵长 类精子生物学及探讨熊猴在进化中的地位提供基础资料. 材料和 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 1.精液采真 熊猴精液用电刺激采精法获得.选一只健康成年雄性熊猴(体重14kg)肌肉注射氯氨酮 (4mg/kg体重)麻醉,通过阴茎电极用美国Grass公司产S44型方渡发生器刺激,精子样品 经镜幢达到常规检验 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 (精子密度11.5X10;活动度81;正常率74)口].精液采集后于 室温液化30min,加30ml苦昧酸一多聚甲醛固定液(PAF)固定1h以上. 2.扫描电镜观察样品制备 将固定的精子悬液滴在事先涂有多聚赖氨酸的盖玻片上,待精子粘牢后经乙醇系列脱 水,COz临界点干燥,离子溅射仪喷金,日立S-2360N扫描电镜观察[. 3.透射电?观察样品制备 将苦昧酸一多聚甲醛预固定的精子悬液于1.5ml离心管中离心2Omin(4000r/rain),将 沉淀的精子团块用1oso.后固定1h(溶于0.1mol/L二甲砷酸缓冲液,pH7.3),乙醇系列 脱水,Epon812包埋,LKB超薄切片机切片,醋酸铀和枸橼酸铅染色,日立H300电镜观 察. 结果 ?本课题褥到美国洛克菲勒基金会.国家自然科学基金和云南省自然科学基盒资助 解剖 熊猴精子由头,颈和尾构成,精子总长79.49pm.在扫描电镜下观察,头呈椭圆形的扁 盘状,长5.59m,宽3.2g,um.其表面光滑,中部可见顶体下缘(图1,2).在透射电镜下,头 的矢状切面为三角形.核由高度致密,对电子不透明的染色质构成,其形状与精子头大致相 同.充满了头的大部分.核内未见空泡.一个巨大的顶体覆盖了核表面的四分之三,顶体在前 段较厚,在后段变薄并终止.薄的部分相当于赤道板.在核的前半核膜与染色质紧密相接,无 明显分界,在核的后半核膜与染色质之间有一不规则的间隙(图3,4). 在透射电镜下,可见短的颈部,内含中心粒及节柱,一侧有层叠的膜结构.精子的尾部全 长73.67,其中中段长11.47m,主段长62.20pm.中段最主要的特征是存在线粒体鞘. 线粒体呈螺旋状紧密排列在一起.间隙很窄,约有43周线粒体螺旋.线粒体鞘内为9束外致 密纤维,再内为9束微管,中心是1对中央微管(图3,6).尾部的主段特征是存在纤维鞘,其 内为9×2+2的微管结构.9束二联体微管绕成一周,中心是1对中央微管(图6,7).在尾末 段纤维鞘逐渐变薄消失,与细胞膜贴在一起形成薄膜包裹微管束,微管束的9×2+2结构则 变成了12+7+1的规则排列的20个单微管结构(图8). 讨论 已有的研究认为,真兽亚纲动物的精子在进化过程中不同于身体其他部分.它深藏于雌 雄个体的生殖道中,避开了外界环境的影响,独立地适应了自然选择,因而其形态从另一侧 面反映了系统演化的关系].Gould指出,灵长类精子的超微结构提供了灵长类种间系统演化 关系的一个精细的佐证口]. 早期对灵长类精子的光学显微镜,扫描电镜和透射电镜的研究表明.灵长类精子的基本 结构大体相似].熊猴精子有明显的头部,颈部和尾.其头部外形为椭圆形的扁盘状,核由 高度致密的染色质构成,无空泡等,均与猕猴属其他动物相似.但尾末段的微管排列为1+7 +12(图8)有关灵长类精子尾末段的微管排列方式报道不多,仅在人,红面猴和藏酋猴 有报道.在已知的两种猕猴属动物中,其排列为1+6+13,人的是1+7+12.熊猴精子尾末 段微管排列方式不同于猕猴属动物而与人的相似. 熊猴主要分布在我国西藏,云南,贵J川,广西及与上述地区相邻的东南亚国家,是目前 生存的濒危灵长类之一,在我国被列为国家一级保护动物.Fooden口依据雄性外生殖器的形 态特征将猕猴属分为4个种组,即:食蟹猴组(fascicularisgroup),蛮猴组(silenus-sykoama group),头巾猴组(sinicagroup)和红面猴组(a,’ctoidesgroup).按照Fooden的分类,熊猴与藏 酋猴亲缘关系最近,同属头巾猴组.Delmn[1o]基于骨髂形态和地理分布的研究,也把熊猴列在 与藏酋猴较近的位置上.在头巾猴组4个种的地理分布上.头巾猴与戴帽猴都是独立分布,其 分布地域不与组内其他种的地域相邻,熊猴与藏酋猴分稚地域紧密相邻而不交叉.另外, ZhangYaping和ShiLimingC”对猕猴属5个种进行的mtDNA多态性的研究中发现,熊猴与 藏酋猴遗传距离为0.016,与恒河猴为0.049,与红面猴为0.091.熊猴与藏酋猴遗传距离最 近,大约在8×10年前分离.从我们的结果看,熊猴精子的总长及各部分的长度与藏酋猴非 常接近,而明显长于猕猴属的红面猴,恒河猴,食蟹猴(附表).上述结果表明,熊猥与藏酋猴 的亲缘关系较近,与猕猴属其他种类分离较早. 2期商恩缘等.熊猴(Macaca曲)精子的电镜观察?275? 附表几种灵长类精子的太小(士岛)单位;m 经t检验表明,庶璇精于的大小与猕猴Jl其他种类存在显着差异(P<0.01) 翻版说明 收穑1993--09隹回1994--01 本文图1,B见插图第lO页 图1庶猴精于的扫描电镜图,示概貌×2300 图2精于头部扫描图像,箭头所指为顶体边缘,左侧横于两十精于尾上的是另一精于尾×4600 图3精于纵切的透射电镜图像,显示精于头,颈,尾中段盈尾主段一部分t上方蕾头所指为中心粒,下方蕾头所指 为线粒体x6500 图4头襄部切.显示棱,顶体,中心粒盈基扳,左上方蕾头所指为璜体,左中箭头所措为棱与精于膜之问隙,左 下箭头所指为颈部层叠的膜结构,颈部中心的短蕾头所指为基扳×13000 图5尾中段横切.示线粒体,9柬外致毒纤维盈9×2+2的擞警构造,箭头所指为外象毒纤维x30000 图6尾中段-主段连接部孰切,上中下箭头所指分别为线粒体曩艇,中 段-主段连接部致毒环,纤维精×30000 图7尾主段横切,左右箭头所指分别为纤维鞘与0×2+2的徽警扮造 ×50000 图8尾丰段横切.显示12+7+1的徽警结构×45000 参考文献 [1]}{皑,E瓤.tlnap砒temsplasm~emmaofh珊nan印nat.?曲 -4ew~bymlmgelectronmlcrc~copy?hat JFer山,1975,20(4)m209 [2]BedfordJ’M.Biologyofill~te~tozoa.InLuekettwP(eds)lco”trjbI】 thto?t.10.Vcl3.Repr~luetive K山ofthePrlmat~.BasellY~rger,1974?97?139 [92peder~mtH.TheHumanSpermatozoonIAnElect~onMierc=co~ealStu dyhComparativeDemibofMae~tAre- tiod~sp?t0目0Co.Sen,Costez~Bostrykkeri,1974,1-35 [4]商恩缘,季维智.扬上川举藏l|璇精于的电镜观寨.动物学研 究,1993.14(1)-1 [5]橱上川,季维智.陈建春辱.一种改进的阴茎电刺激采精法和猕狠, 藏酋璇盈熊璇的采精盈其精液特征的韧步研究.动物 学研究,1994,15(1)’77 [82StedsniniM.MarfinoCD,ZambonlL.ofem’ulateaspermatozc~[orelectr onmlc~eopy.Natttret1967,216 (5111),173 [7]Gould,KG.Se蛆ni丑gelectronmicroscopy0Itheprlm吐 esperm.hatRevCytol,Vol63.NewYorkjAcade~Pr噶t 1980.323—355 [82WooleyDM.Selectica(orthelengthofthe81:mrmato~蒯 pinthem0ImCe~netRe,1970,16(2)t261 [92FoodenJ.P?3ch.nandkeytollvingspedesofm蝴u皓(P工 ilI?,Maea~).F0liaPrimaml?1976,25(2— 3)m225 [io]Dea咖E.hu-ldbergDG(ed~):11IeBcBq峨lstl1d越inEco,0r舭 dEvdoI-.NewYork,Ac_dem P煳,1980,1o_29 [1】]口”.ShlLM.嘶DNApdymorphisra’mfive_瞄0ItheG衄1月 Mm.Chin~JGeneticst1989?16 (4),325 解剖25卷 ELECTRoNMICRoSCoPICALSTUDY0FASSAMESE MoNKEY(ACACAASSAJ】lfE?SiS)SPERM ShangEnyuan,jiWeizhi,ZouRujin, YangShangchuan,ChenJianchun,PuXiaochun (K~nminglmtofZoology.AcademiaSbr&-a,K~mg) Asssmescmonkeyranksthefirstinthelistoftheprotectedwildlifeofnationali mportancein Chim.Inthiswork,thefinestructureofasssmescmonkeyspermwasstudiedusinglightmi— croscopy(LM),transmissionelectronmicroscopy(TEM)andscanningdecironmicroscopy (SEM).Thetotallengthofthespermis79.49?0.11m.Theheadofthespermisovaland fiatinshape,and5.59+0.02Hminlengthwithhrgeacrosomesurroundingtheanterior3/4of thenuclearsurface.ThereiSashortneckinwhiehacentriolecanbeseen.ThemdpieceiS l1.47士0.03? mlongandapproximarely43circlesofmitochondriawhicharrangedinahelix. Themainpieceis62.20?0.09minlength.Intheendpiece,onemicrotubulewasfoundinthe centerandsurroundedbyaringof7microtubuleswhichisfurtherencompassedbyaringofl2 microtuhules.Thesizeofa~fltlTxescmonkeyspermisverysimilartothatofTihetanmacaquehut differentfromthatofotherspeciesinm2??(P<O.O1).Theresultsindieate:1.Assamese monkeyismorecloselyrdatedtoTibetanmacaqueinevolutionthantoanyothe rspeciesofmaca— ca’2.Asssmesemonkeyisanearlydivergedspecmsinthephylogenyofrnacac a. KEYWORDSSpermatozoa;Ultrastructure;oxTaassamensis ? 研究通讯? 吗啡对备用根大鼠背根节神经元胞体形态的影响 (中山医科大学组织学胚胎学教研室,广州510089,曾园山华西医科大学组织学研究室,昊良芳) 为探讨发生侧支出芽及重建突触的背根节神经 元的胞体是否也呈现相应的形态变化,以及吗啡对 此变化的影响,取10只大鼠分为吗啡备用根组和备 用根对照组.切除两组动物脊髓一侧LI~L3,L5,L8 背根和背根节,保留L4背根(作为备用根).术后34 d灌注固定动物,取两侧L4背根节树脂包埋,等距 离切取半薄切片,甲苯胺蓝染色.用体视学方法测量 背根节及其神经元胞体等的体积变化.结果发现两 组大鼠术侧背根节体积与非术侧比较没有统计学差 异.亮神经元胞体,胞核和核仁的体积也没有显着差 异.对照组非术侧的亮神经元胞质尼氏休呈细颗粒 状,而术侧则呈小块状.吗啡组术侧的亮神经元胞质 尼氏体也在胞核周围聚集成小块状,有些还呈斑块 样.这种变化可能与发出有髓传人纤维的亮神经元在 脊髓侧支出芽及重建爽触有关.对照组术侧暗神经元 胞体,胞核和核仁的体积分别比非术侧的显着增大. 吗啡组术侧暗神经元上述3种体积又比对照组术侧 的大,胞质的嗜碱性染色也增强.这表明与无髓传人 纤维在脊髓侧支出芽及重建突触有关的暗神经元胞 体也发生了相应的可塑性变化,而吗啡对此变化有 明显的促进作用.本实验结果首次为研究吗啡促进脊 髓可塑性变化提供了薪的资料f同时提示发出无髓 传人鲆维的暗神经元胞体的可塑性变化,比发出有 髓传人纤维的亮神经元的胞体变化更为明显. 收蔷l904—02